Таняшин

Номер патента: 1226840

Опубликовано: 27.07.2000

Авторы: Ансберга, Баев, Баумане, Глухов, Ежов, Крюкова, Николаева, Солонин, Таняшин, Троицкая, Трояновский

МПК: C12N 9/22

Метки: полинуклеотидлигазы, фага

Способ получения полинуклеотидлигазы фага Т4 из клеток E.coli, включающий выращивание продуцента фермента, дезинтеграцию клеток, отделение экстракта, хроматографию на последовательно соединенных колонках с ДЭАЭ-целлюлозой и фосфоцеллюлозой, концентрирование ферментного раствора, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода фермента и сокращения продолжительности процесса, хроматографию на ДЭАЭ-целлюлозе проводят при массовом отношении последней к биомассе клеток 1,5 - 1,8 : 1, концентрирование осуществляют путем ультрафильтрации.

Номер патента: 1218678

Опубликовано: 10.04.1995

Авторы: Баев, Кузьмин, Солонин, Таняшин

МПК: C12N 15/00, C12N 9/16

Метки: рестрикции, эндонуклеазы

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ РЕСТРИКЦИИ ECO RV из клеток продуцента Escherichia coli, содержащих рекомбинантную ДНК, несущую гены рестрикции - модификации Eco RV, предусматривающий разрушение клеток и последующую хроматографию экстракта белков клеток на фосфоцеллюлозе PII и гидроксипатите, отличающийся тем, что, с целью обеспечения электрофоретической гомогенности препарата, не содержащего интерферирующих примесей ферментов нуклеинового обмена, разрушение клеток ведут в присутствии 5-15%-ного раствора глицерина, хроматографию на фосфоцеллюлозе PII проводят, используя для элюции фермента раствор хлористого натрия с линейным градиентом концентрации от 200 до 800 мМ, а перед очисткой на гидроксилапатите фракции, содержащие фермент с...

Номер патента: 1438239

Опубликовано: 15.07.1994

Авторы: Захарова, Солонин, Таняшин, Чернов

МПК: C12N 15/70

Метки: echerichia, бактериофагами, защиты, культур, лизиса, обеспечивающая, плазмида, рекомбинантная, устойчивость, фаголизису

1. Способ защиты культур Escherichia coli от лизиса бактериофагами, включающий трансформацию клеток E.coli рекомбинантными плазмидами и культивирование клеток, отличающийся тем, что, с целью повышения устойчивости культур E. coli к различным колифагам, клетки E.coli трансформируют рекомбинантными плазмидами, содержащими Bgl II-фрагмент ДНК области иммунитета фага лямбда с интактными генами rex AB, ts 857, мутацией в гене cI и мутацией в структурной части гена cro и отбирают для последующего культивирования целевые клоны по способности к росту на селективных средах.2. Способ по п.1, отличающийся тем, что клетки E.coli трансформируют рекомбинантными плазмидами, содержащими фрагмент ДНК области иммунитета фага лямбда с интактными генами...

Номер патента: 1529277

Опубликовано: 15.12.1989

Авторы: Блинков, Габибов, Мухамеджанов, Таняшин

МПК: G09B 23/28

Метки: головного, извлечения, мозга, препарата, приготовления, ствола

...на уровне между верхними и нижними бугорками четверохолмия,П р и м е р. Больной В., 38 лет. Клинически был поставлен диагноз: 254) СПОСОБ ИЗВЛЕЧЕНИЯ СТВОЛА ГОЛОВОГО МОЗГА ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПРЕПАРАА 57) Изобретение относится к медицие, а именно к патологической анатомии. Способ позволяет сохранить сосудисто-тканевые взаимоотноше томоэжечкового угла, что дост эа счет вскрытия полости попе синусов, расслоения листков т мозговой оболочки, их рассече линии свободного края моэжечк намета и пересечения ствола м уровне между верхнцми и нижни горками четверохолмия. менингиома свободного края моэжечкового намета субтенториального расположения, На аутопсии произведеновскрытие полости черепа, мозг извлечен вместе с конвекситальной и базальной...

Номер патента: 1463759

Опубликовано: 07.03.1989

Авторы: Захарова, Солонин, Таняшин, Чернов

МПК: C12N 7/04

Метки: клеток, обеспечивающее, средство, устойчивость, фаголизису

...32, 38 С.Показано, что при 26 С на агариэованной среде падение титра фага Т 5составляет около 907., при 32 С падение титра достигает 99,9 Х, при 38 С 20культура полностью устойчива к фагу Т 5.Определение устойчивости клетокЕ,со 11 В 834/рЕЬКЧ 8 к бактериофагампри культивировании в жидкой среде. 25К культуре клеток Е.со 1 В 834,трансформированных плаэмидой рЕ 1.КЧ 8с плотностью 5 1 О кл./мл в ИПБ, до. бавляют фаг Т 5 с множественностью0,3 и инкубируют при 37 С в условиях 30интенсивной аэрации 5 ч. За это вре"мя культура .выходит в стационарнуюфазу, лизиса культуры не наблюдают,так как клетки устойчивы к бактерио фагу Т 5,Аналогично проводят определениеустойчивости клеток Е,со 11/рЕЬКЧ 8к фагу Т 4, ТЗ, Т 7, ф 80, Р 22, Л д 434.В случае...

Номер патента: 1275043

Опубликовано: 07.12.1986

Авторы: Баев, Семенова, Солонин, Таняшин

МПК: C12N 15/00

Метки: вектор, генов, клонирования, конструирования, обеспечивающий, регулируемую, транскрипцию, чужеродных

...в течение 10 мин во льду добавляют 50 мкл пан - креатической РНКазы (1 мг/мл), предварительно прогретой при 100 С в течение 5 мин, и 0,5 мл "лизирующей" смеси (0,3 мл 1 ОЕ тритон-Х, 7,5 мл М ЭДТА рН 8,0, 1,5 мл 1 М трис - НСЕ рН 8,0, 0,7 мл Н О). После инкубации2при постоянном помешивании стеклянной палочкой во льду в течение 10 мин получают осветленный лизат центрифугированием пробы в течение 1 ч при 17000 об/мин (КапегзЫ 2.). Полученный лизат разбавляют водой вдвое, обрабатывают равным объемом фенола, насыщенного 50 мМ тРис -НС 1, рН 8,0, при комнатной температуре в течение 10 мин, водную фазу собирают центриФугированием при 6000 об/мин. Остав - шийся в пробе Фенол удаляют эфирной экстракцией, а ДНК переосаждают 707. - ным спиртом.5...

Номер патента: 1122003

Опубликовано: 15.12.1985

Авторы: Баев, Солонин, Таняшин, Трояновский

МПК: C12N 15/00

Метки: в-1449-продуцент, вкм, днк, днк-лигазыфага, кодирующая, конструирования, лигазы, плазмидная, рекомбинантная, синтез, фага, штамм

...Е.со 1 С 600 с множественностью 1 в среде ЬВ (1 О г бактотриптона, 5 г дрожжевого экстракта, 10 г 11 аС 1 нал воды),зсодержащей 10 М МАЗО, Ливис клеток завершают добавлением в среду хлоро7 11 форма (1;100). После удаления обломков клеток центрифугированием (6000, 30 мин, 4 С) клеточные ДНК и РНК лизата гидролизуют одновременно панкреатическими ДНКазой и РНКазой (по 10 мкг/мл) при 20 С, 1 ч, Первичную очистку и концентрирование фага проводят с помощью полиэтиленгликоля 6000 (Зошашого К, Р ег а 1., Чт.го 1 огу, 40, 734-744, 1970). Окончательную очистку Фага проводят равновесным центрифугированием в 4 М СяС 1, 10 мМ трис-НС 1, рН 8,0, 0,01 М МяС 1 (И 1 яоп С. С. ег а 1., Мо 1 ес.Сеп.Сепег 156,203-214, 1977). Очищенный препарат фага АМ...

Номер патента: 1040791

Опубликовано: 07.02.1985

Авторы: Баев, Глатман, Кравец, Кузьмин, Мороз, Солонин, Таняшин

МПК: C12N 15/00

Метки: днк, конструирования, плазмидной, продуцент, рестрикции, штамм, эндонуклеазы

...Физической структурыплазмидную ДНК выделяют ускореннымметодом (К 1 е 1 п Р,1 ейа 1, 1980,Р 1 азтпЫ, 8, 88-93) .Рестрикционный анализ проводят спомощью эндонуклеаз Р-1, Вя 1 11,11, Отобранные. клоны проверяютна присутствие системы рестрикциимодификации Есо 87. Для этого сравнивают эффективность посева (э.п.)фага; 0 на клетках, содержащихрекомбинантные плазмиды, а такжештаммах С 5183 (гь. -где ) и ) С 5183( г т+ ) с плазмидой рЬ 13. Наличие в клетках модификации устанавливают при снижении э.п. методом(Т. Ага, А.Ао 1 с 1, 3.Васй. 5, 18,1962) . Полученные данные представлены в табл. 2,Как видно из табл. 2, штамм3 С 5183/С 113 на четыре порядка ограничивает размножение фага Ъ0по сравнению со штаммом 1 С 5183( ГО ), не несущем плазмидуу...

Номер патента: 1074139

Опубликовано: 30.12.1984

Авторы: Баев, Глатман, Кравец, Кузьмин, Мороз, Солонин, Таняшин

МПК: C12N 15/00

Метки: днк, конструирования, плазмидной, продуцент, рекомбинатной, рестрикции, штамм, эндонуклеазы

...1159-1166).Рестрикционный анализ выделеннойплазмиды р 1 ЬКЧ 7 проводят. с помощьюэндонуклеаз Р 11,ВфИ,Есор .На втором этапе в полученную плазмиду Р 1 йЧ 74 вводят область иммуни-,тета фагас промотором ранних генов Рг и термочувствительным репрессором. Для этого выделяют ДНК фагас 1857 по методу (А,Р. Ка 1 яег,Нояпея 0.8. 1960, /, Мо 1 В 1 о 1392-415),мкг ДНК плазмиды р 1 ЬКЧ 7 и4 мкг ДНК фага 3 с 1 857 инкубируют вбуфере А (2 О мМ Трис-НС 0 рН 7,6,10 мМ МС 12,10 мМ дитиотреитола) сэндонуклеазной рестрикции Вд 1 11Гидролиз проводят в течение часапри 37 С, после чего гидролизат проверяют электрофорезом в О,97 агарозе в ацетатном буфере. ФрагментыДНК фага Л с 1857 (2 мкг) смешивают с линейной ДНК плазмидыр 1 РЧ 7 й (О, 2 мкг), добавляют...

Номер патента: 1130602

Опубликовано: 23.12.1984

Авторы: Баев, Глатман, Кравец, Кузьмин, Мороз, Солонин, Таняшин

МПК: C12N 15/00

Метки: днк, конструирования, плазмидная, плазмидной, рекомбинантная, рестрикции, штамм-продуцент, эндонуклеазы

...цитритов. Желатцну не разжижают.Уреаэцая активность не обнаруживается. Ицдол не образуют.Устойчивость к антибиотикам. Проявляет устойчивость к ампициллину.Генетические признаки штамма:1 фЕсо НФ спи Есо цугес ВСэЪсВ,Г , гпу 1, 1 еп 6, рго А 2, Ьз 4,ГМ 1, агд Е, 1 ас 41, да 1 К 2, ага 14ху 1 5, шег, еэх.П р и м е р 1. Конструированиерекомбцнантной плаэмидцой ДНК р 1 ЬНЧ 86.Плазмцдную ДНК рЬКч 8 вьсцеляютиз штамма ВКИ ВД по методу(С 1 еюе 11, Не 1 пе 1 су, 1969, РНАЯ, 62,1159-1163) .2 мкг выделенной ДНК гидролиэуютрестриктазой Нжд 111 в 100 мкл раствора, содержащего 50 мИ трис-НС 1,рН 7,8, 10 мМ МИКСТ , 2 мМ 2-меркаптоэтанола, 20 мИ ИаС 1 при 37 ОС 1 ч.После прогревания реакционной смесипри 65 ОС в течение 10 мин проводятчкольцевание"...

Номер патента: 1114700

Опубликовано: 23.09.1984

Авторы: Беляева, Горовиц, Ежов, Крюкова, Ли, Лузина, Солонин, Таняшин

МПК: C12N 15/00

Метки: продуцент, рестрикции, штамм, эндонуклеазы

...а со 11, Бггар 1 ту 1 ососсцяацгецв, Ргогецв щ 1 даг 1 в),При исследовании некоторых мутантов Еясйег 1 сЫа со 11, устойчивых к Тр, показано два типа устойчивости, В одном случае устойчивость объясняз 11147ется повьппенным синтезом дигидрофолатредуктаэы мутантом по сравнению сдиким штаммом, в другом случае - несколько измененными свойствами дигидрофолатредуктазы у мутанта. 5В результате клонирования структурного гена, кодирующего дигидрофолатредуктазу фага Т 4 в плаэмидныйвектор рИК 322, получена рекомбинантная плазмидная ДНК рВК 322 Ггд. В 1 Оплазмиду рВК 322 интегрирован Нпд 111фрагмент фага Т 4 размером 1, 1 тыс.пар оснований, содержащий структурныйген дигидрофолатредуктазы. Введениеплазмидной ДНК рВК 322 Ггд в бактери альные клетки...

Номер патента: 912754

Опубликовано: 15.03.1982

Авторы: Баев, Кузьмин, Солонин, Таняшин

МПК: C12N 15/00

Метки: днк, микроорганизмов, молекулы, отбора, рекомбинантные, содержащих

...исходным вектором. Такие векторные молекулы ДНК называют векторами инсерционной инактивации. 4ганиэмов отбирают с того места контроля, где клетки опыта погибли,П р и м е р 1, Клоны клеток получают после трансформации компетентных клеток Е,сой НВ 101 .чесА смесью сшитых с помощью полинуклеотидлигазы фага Т 4, Гсо 1-Фрагментов ДНК Фага Т 4 с расщепленной эндонуклеазой Есор ДНК векторной молекулы рХ 13.Полученные клоны клеток пересевают на поверхность твердой питательной среды, содержащей 10 г бакто"трипто" на, 5 г дрожжевого экстракта, 10 г МаСВ, 15 г бакто-агара на 1000 мл воды, с помощью шаблона. Пересев де.лают одновременно на две чашки Петри, после чего поверхность питательной среды одной чашки облучаютУф-светом, (опыт)....

Номер патента: 659614

Опубликовано: 30.04.1979

Авторы: Баев, Глухов, Солонин, Таняшин

МПК: C12D 13/10

Метки: индуцируемой, клетках, полинуклеотидлигазы, фагом

...ДНК притра нсфек ции.П р и м е р . Е.со 1 В выращиваютдо титра 6-7 х 10 бактериальных телв мл при 37 С с интенсивной аэрацией на среде следующего состава (г на1 л): й Н 4 СЕ -1, МБО, - 0,13,КНР 04 - 3, М аНРО 4 - 6, глюкоза - 4,.казаминовые кйслоты - 2. Заражаютфагом Т 4 ае М 82 с множественностью 5 (5фаговых частиц на клетку и продолжают выращивание в течение 1,5-2 час,Зараженные клетки собирают центриФугированием. Все дальнейшие операции проводят на холоду (О +5 С), вовсех буферных растворах присутствует10 п М трис-НС 1 рН 7,5 и 10 п М-меркаптоэтанола (А), клетки (100 г)дезинтегрируют, белки экстрагируютбуфером Л и освобождают экстрактот разрушенных клеточных стенок центрифугированием. Экстракт осаждают0,6-0,73 сульфатом...