Штамм 80, используемый в качестве продуцента сайт специфической эндонуклеазы.

.И.М .В.С 53) 56)оЬег Мц 11 СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИН ВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНР 1 Т 3735472/28-1329.048430.12.86. Бюл. В 48Всесоюзный научно-исследовакий институт прикладной микро-.гии и Институт белка АН СССРЗ.Ф.Бунина, В,М.Крамаров,атвиенко, Д.М.Пачкунов,молянинов и А.Л.Мазанов615.779.94(088.8)Сдпаегаа Т.К., Мх 1 агго 1.К.,з К,1. Нис 1. АсЫз Кез. 5,р, 4105-4127, 1979. 1190642 З) 4 С 12 Н 15/00, 9/00,С 12 К(57) ШтаммК0 (коллтута биохимиорганизмовв качествеческой энд ВАСП.ЖВ ВКЕ 718-80, ИСВ КАЧЕСТВЕ ПРОДУЦЕНТА ФИЧЕСКОЙ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ Вас 11 ав ЬгечхвВ ВКИ екция Всесоюзного инстии и физиологии микро- АН СССР), используемый продуцента сайт-специфи нуклеазы Вв ч 11.1190642 5 10 5 20 25 30 35 40 45 50 ки. 490 Подписное Произв.-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Изобретение относится к биологической промышленности и представляет собой штамм, продуцирующий сайтспецифическую эндонуклеазу Вв ч 11,используемую как инструмент для получения фрагментов ДНК, картированиямолекул ДНК и конструирования векторных молекул ДНК.Целью изобретения является получение штамма Вас 11 цз Ькечз,продуцирующего сайт-специфическую эндонуклеазу Вв ч 11, которая необходимадля создания новых типов рекомбинантных молекул ДНК,Штамм Вас 11 цз Ьгечзхарактеризуется следующими признаками,Морфологические признаки.Пряьые палочки, подвижные, имеют2-4 жгутика, расположенные терминально и латерально. Величина клетокодносуточной культуры на мясо-пептоннам агаре 0,4-0,6 х 1-1,4 мкм, Споры эллипсовидные, имеют отчетливуюраздутость спорангия, расположенысубтерминально. Клетки хорошо окрашиваются основным фуксином. Грамположительные, каталазоположительные,Культуральные признаки,На тверцом пептоно-глюкозном агаре после 24 ч инкубации в термостате при 32 С образуются круглые колооиии 0,5-1,5 мм в диаметре, блестящиес ровными краями, гладкие, влажные,выпуклые, пастообразные, бесцветные,легко снимаются и размазываются потвердой поверхности. Рост на жидкойпитательной среде характеризуетсяравномерным помутнением. Хорошорастет на минеральной среде. Оптиомальная температура роста 30-37 С.При 3, 5, 10, 20 и 65 С культуране растет. При 25 и 50 С рост слабый.Физиолого-биохимические признаАэроб. Желатину разжижает,индол не образует, при росте вьщеляет сероводород. Хорошо усваивает глюкозу и ксилозу с образованием кислоты, Усваивает инозит, лактозу, фукозу, сорбит, мальтозу, дульфит, маннозу, маннит, рибозу Не усваивает саха- . розу и арабинозу, Минимальный рН 5,2, максимальный 12,0. Оптимум рН 7,5 ВНИИПИ Заказ 7141/4 тираж 8,0. Растет при 57.-ном ЫаС 1 и 0,001 Е-ном лизоциме, при 77.-ном ИаС 1 и 0,022-ном азиде Ма не растет, Культура хранится в пробирках на агаризованной среде под вазелиновыммаслом.штамм продуцирует сейт-специфическую эндонуклеазу Вв ч 11, узнающую на двухнитевой ДНК последовательность нуклеотидов 5 - СТАСТТС-З.)3 - САСААС П р и м е р. Получение сайт-специфической эндонуклеазы Вв ч 11.Ытамм Вас 11 цз Ьгеч 1 зхранится в пробирках на агаризованной среде под вазелиновым маслом. Для оживления Васг 11 цз Ькеч 1 зпересевается на скошенный агар со средой У 1, содержащей, г/л; (ИН)НРОд 1,0; КС 1 0,2; МАМБО 7 Н О 0,2, дрожжевой экстракт 0,2, агар 1,5, глюкоза 5 (добавляется после стерилизации).,рН 7,5 и инкубируют в термостате при 37 С в течение 24 ч, Затем делают второй пассаж на скошенный агар со средой Р 1. Для получения жидкого инокулята пробирку с 5 мл среды М 2, содержащей, г/л; пептон 5, дрожжевой экстракт 3, ИаС 1 3, (ИН ) НРО 1,0, МАМБО 7 Н О 0,2, глюкоза 10, рН 7,8- 8,0, вода дистиллированная, вносят петлей культуру после второго пассажа .на скошенном агаре и инкубируют 15-18 ч при 37 С. Оптическая плотность суспензии клеток составляет 0,6-0,8 о,е. Полученный инокулят засевают в круглую колбу общим объемом 4 л, содержащую 2 л питательной среды В 2, перемешивают среду на магнитной мешалке в термостате при 37 С, Культуру растят до средней логарифмической фазы, оптическая плотность суспензии клеток составляет 0,3 о.е. Культуральную жидкость охлаждают до 4 С, биомассу собирают центрифугированием при 10000. С 1 л жидкой питательной среды получают 0,4 г сырой биомассы. Из 1 г биомассы хроматографией на ультрагеле АсА игепарин-агарозе вьщелили 1000 ед. эндонуклеазы Вв ч 11.