Ансберга

Номер патента: 1226840

Опубликовано: 27.07.2000

Авторы: Ансберга, Баев, Баумане, Глухов, Ежов, Крюкова, Николаева, Солонин, Таняшин, Троицкая, Трояновский

МПК: C12N 9/22

Метки: полинуклеотидлигазы, фага

Способ получения полинуклеотидлигазы фага Т4 из клеток E.coli, включающий выращивание продуцента фермента, дезинтеграцию клеток, отделение экстракта, хроматографию на последовательно соединенных колонках с ДЭАЭ-целлюлозой и фосфоцеллюлозой, концентрирование ферментного раствора, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода фермента и сокращения продолжительности процесса, хроматографию на ДЭАЭ-целлюлозе проводят при массовом отношении последней к биомассе клеток 1,5 - 1,8 : 1, концентрирование осуществляют путем ультрафильтрации.

Номер патента: 1321060

Опубликовано: 15.11.1994

Авторы: Ансберга, Баев, Бурьянов, Косых, Филипченкова

МПК: C12N 9/22

Метки: 834psk, corii, escherichia, бактерий, рестриктазы, штамма

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РЕСТРИКТАЗЫ E.CORII ИЗ ШТАММА БАКТЕРИЙ ESCHERICHIA COLI B 834/pSK 323 путем дезинтеграции клеток в смеси, содержащей 10 мМ калий - фосфатного буфера, рН 7,0, 7 мМ 2-меркаптоэтанола и 1 мМ трилона Б, разрушения клеток ультразвуком, осаждение фермента из бесклеточного экстракта полиэтиленимином, который добавляют до концентрации 0,3 - 0,5%, экстракции фермента 0,4 М раствором хлористого калия, осаждения сульфатом аммония, очистку на ДЭАЭ-целлюлозе при элюировании фермента раствором хлористого калия с возрастающей концентрацией от 0 до 0,3 М и последующую очистку на фосфоцеллюлозе при элюировании раствором, хлористого калия с возрастающей концентрацией от 0,1 М до 0,5 М и концентрировании, отличающийся тем, что, с целью...

Номер патента: 1262952

Опубликовано: 30.05.1994

Авторы: Ансберга, Баев, Бурьянов, Зилбере, Косых, Миериня, Филипченкова

МПК: C12N 9/22

Метки: рестрикции-модификации, системы, ферментов

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТОВ СИСТЕМЫ РЕСТРИКЦИИ-МОДИФИКАЦИИEco R 11 из бесклеточного экстракта штамма Escherichiacoli B 834 ( rв- , mв- ) /pSK 323, включающий получение биомассы, обработку клеток дезинтегрирующей смесью, содержащей фосфат калия, этилендиаминтетрауксусную кислоту, меркаптоэтанол и лизоцим, отделение экстракта, осаждение фермента полиэтиленимином, экстракцию фермента раствором хлористого калия или хлористого натрия, осаждение из экстракта сульфатом аммония, диализ, хроматографию диализата на диэтиламиноэтилцеллюлозе, ипользуя для элюции раствор с градиентом концентрацией хлористого калия или хлористого натрия, последующую хроматографию на фосфоцеллюлозе в градиенте концентрации того...

Номер патента: 1124033

Опубликовано: 15.11.1984

Авторы: Ансберга, Зилбере, Камрадзе, Муйжниекс, Хартмане, Шафранский

МПК: C12N 15/00

Метки: днк, плазмидной

...следующим 55 образом.Повышение выхода обеспечивается эа счет сохранения суперспиральной структуры ДНК в процессе лиэиса.Понижение количества додецилсульфатанатрия и натра едкого, которые всреду вводятся в определенных соотно"шениях, т.е. в количествах, определяющих возможность регулирования лизисас целью сохранения ковалентно связанной кольцевой плазмидной ДНК, а условия инкубации обеспечивают разделение ковалентно-замкнутой кольцевой,плаэмидной ДНК от балластных веществ.Условия лизиса и инкубации предотвращают релаксацию ковалентно-замкнутойкольцевой плазмидной ДНК в линейнуюи открытую кольцевую ДНК.Предлагаемый способ обеспечиваетнакопление ковалентно-замкнутой кольцевой плазмидной ДНК 95-96 . Процессочистки от РНК проводят...

Номер патента: 1108106

Опубликовано: 15.08.1984

Авторы: Ансберга, Ничаев, Хейслере, Чикаев

МПК: C12N 9/16

Метки: рестрикции, эндонуклеазы

...фракционированиеполученного лизата центрифугированием, хроматографию и диализ, разрушение,клеток проводят смесью лизоцимаи тритона Х 100 (10:1), а клеточныекомпоненты фракционируют в двухфазной системе, содержащей 7,0-7,5-ный 45полиэтиленгликоль мол,в, 6000 и 2,02,1-ный декстран Т 500 при рН 6,06,5 в присутствии 0,50-0,52 М МаС 1.Способ осуществляют следующимобразом, 50Биомассу Могахе 11 а ярес 1 ея лизируют с помоцью лизоцима в присутствии тритона Х 100, затем фракционируют в двухфазной системе полиэтиленгликольдекстран (конечная концентрация в смеси полиэтиленгликоля557; декстрана 2," ИаС 1 0,5 М; рН 6,3)После тщательного перемешиваниясмеси и последующего центрифугирования отбирают верхнюю фазу, содержащую целевой продукт, наносят на...

Номер патента: 1002354

Опубликовано: 07.03.1983

Авторы: Ансберга, Грислис, Острова

МПК: C12N 1/18

Метки: биомассы, дрожжей, хлебопекарных

...и прибавляют комплекс ак- . тиваторовг 0,01 г магния хлористого 0,1 г гидролиэата казеина, 0,.02 г Фосфатов. Брожение проводят 8 дней при 5-8 ОСПиво после брожения декантируют. Получают 250-280 мл пивныхрожжей, которые 3 раза проьывают воопроводной водой.Изобретение иллюстрируется конкретными примерами.П р .и м е р 1. К 1 л пивного сус ла 1 экстрактивности в11,0 Пиво после брожения декантируют. Получают 260 мл биомассы. Дрожжи промывают 3 раза водопроводной водой при 35температуре от +21 С до 4 С. Оставляют осесть,Верхний слой мертвых клеток декантируют. Полученную биомассуиспользуют для синтеза рибонуклеозидпо лифосфатов.Активность ферментов, ед/мг белка:Гексокинаэа 0,11Мдф -АТФ-аза 81,0Целочная фосФатаза 11,0Кислая фосфатаза 13,0П...

Номер патента: 861399

Опубликовано: 07.09.1981

Авторы: Ансберга, Хейслере, Шмите, Ясюкевича

МПК: C12N 1/08

Метки: биомассы, днк, еsснеriснiа

...А, Ач Корректор Е. Рашко Редактор Г, Бельская РЗаказ 6456/7 Тираж 528ВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5 Подписное Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул, Проектная, 4 Очистку фага проводят в 33 мл градиентаСвС (д 1,4; д 1,5; О 1,3), Осадок центрифугируют.Полученную массу фага диализируют 2 раза. по часу против 2 л буфера, содержащего0,05 М йаС 1, 0,01 М трис, рН 7,9, 0,01 МЕДТА - йа. К массе фага прибавляют 3,5 мл10%.ного додецилсульфата натрия. Раствор нагревают до 48 С.Для удаления белка к раствору, содержащему 10фаговый ДНК, прибавляют. фенол. Осадокцентрифугируют, Операцию повторяют, к центрифугату прибавляют равный объем смесихлороформ-изоамиловый...

Номер патента: 834123

Опубликовано: 30.05.1981

Авторы: Ансберга, Витенберга, Хейслере, Шмите

МПК: C12N 1/00

Метки: биомассы, днк, обогащеннойфаговой

...аналогичныпримеру 1, После нагревания культу.оральной жидкости до 44-45 С глюкозудобавляют в количестве 1,0%, а лецитин 0,05%, Далее по примеру 1,Выход биомассымг/мл 5,220 Количество внутриклеточного вегетативного Фага,БОЕ/мг биомассы 2,8 ОфПредлагаемый способ обеспечивает25 получение Фаговой ДНК для нужд молекулярной биологии и исследований вгенной инженерии с высоким выходомбиомассы и целенаправленным накоплением в ней интактной ДНК фага лямбда. 3Глюкозу вводят в питательную средув виде стерильного раствора.Проводят термообработку биомассыпри 44-45 С в течение 2-3 мин с последующим выращиванием на среде, содержащей дополнительно 0,05-0,1% лецитина и 0,5-1,0% глюкозы.Выход биомассымг/мл 4,0-5,2Количество внутриклеточного вегетационного...

Номер патента: 810717

Опубликовано: 07.03.1981

Авторы: Ансберга, Гравите, Хейслере, Шмите

МПК: A61K 38/45

Метки: иммобилизован-ной, полирибонуклеотидфосфорилазы

...13 ы 1 Остцгястся за счет сохранения естественнойцс 1301 яч 11 л ьпой я ктпвпостп фс)мсцта.11 оситсль - гидроокись ал омиция3-Л 1(0 Н ) ., ха ра ктеризуется вь 1 сокой адсорбппоцпой способностью за счет возникцовсцп 51 водородных связей, я тякжс 00:и,ИОй п;Ощад 110 коптяктиру 10 щ 1 й ИОвсрхцостц, что способствует повышении) скорости и эффсктивностп адсорбции,Стаоильпость и устойчиВость с 13 язи ИОсптль-фермент повышается в процессепрс;1 варительпой обработки носителя вВодном растворе. Предварительная активация увеличивает адсорбционную способность гпдроокиси ялк)мипия за счег обраЗОВЯНИ 5 допОлцис,ьцых ВОдОродцых с 1351.зц.Короткий срок иммобилизации (10 мин)прсдотврашаст ицактивацик фермента.ТлИратурз 1 процесса 18- - 20 С также...

Номер патента: 744004

Опубликовано: 30.06.1980

Авторы: Ансберга, Баумане, Расса, Шмите

МПК: A61K 31/787, C07H 21/00

Метки: высокомолекулярных, полинуклеотидов

...30 мин при 6000 об/мини +4 С. Полиадениловую кислоту (поли-А) высаживают из водного слоядвухкратным объемом этилового спиртас кристалликами хлористого натрия.Полученный осадок растворяют в дистиллированной воде. Для освобожденияраствора от низкомолекулярных примесей раствор пропускают через ультрафильтрат (размеры пор 5000-10000 Х),Получают две фракции: низкомолекулярную и высокомолекулярную,Высокомолекулярную фракцию пропускают через колонку с гелем ЕД(размеры колонки 602). Получаютполи-А с мол.весом 70000"100000. Выход 49 мг.Ниэкомолекулярные нуклеотиды (5)используют вновь для синтеза полинуклеотидов. Низкомолекулярную фрак"цйю проЩсвйот через колонку с гелем ЕД(размеры колонки 60 ю 2). Получают непрореагировавший...

Номер патента: 644797

Опубликовано: 30.01.1979

Авторы: Ансберга, Гравите, Каула, Шмите

МПК: C07H 21/00

Метки: кислоты, полиинозиновой

...из Е,со 11 и содержащего 60 мг поли-А, 10 - М ацетата магния и 0,1 М трис-НС 1, после отделения, ферментативного белка прибавляют 0,12 мл ледяной уксусной кислоты, 0,1 М раствора этилендиамин-И,Х,Х,К - тетрауксусной кислоты (ЭДТА) до конечной концентрации 10 -(рН 2,5 - 2,55), При непрерывном перемешивании небольшими порциями в течение 3 ч прибавляют 0,12 г сухого нитрата натрия, Перемешивание продолжают до тех пор, когда отношение оптических плотностей Дзо,/Дм, достигает 1,6 - 1,7.Поли-И осаждают 20 об, 96% -ного этилового спирта и проводят очистку известным способом.Степень дезаминирования 98%, Яо,г 18, выход 56 мг поли-И.П р и м е р 2. 60 мг поли-А, полученных в процессе биосинтеза полинуклеотидфосфорилазой из Е.со 11, растворяют...

Номер патента: 631528

Опубликовано: 05.11.1978

Авторы: Ансберга, Кайсала, Каула

МПК: C12D 13/00

Метки: цитидин-5"-дифосфатхолина

...буфере и оттаявшую биомассу микроорганизмов, производный холина, источник сахара, сульфат магния,Фосфатный буфер и вОду,дополнительно вводят экстракт зеленых водорослей 0,05-0,1 мг/мл и аденозин-трифосфорную кислоту 7-:8 мг/млВ качестве источника сахара используют 1,б-дифосфатфруктозу 1030 мг/мл,Фосфорилирование фосфорилирующейсмеси проводят при рН,0 и 30 С споследующей очисткой целевого продукта.В качестве биомассы микроорганизмов используют пивные дрожжи 5 асспоосщсеа сеечмае.Экстракт зеленых водорослей используют в качестве источника Фосфорилирующих ферментов, необходимых дляпревращения цитидин-монофосфата в/цитидин-дифосфорную кислоту, ааденозин-трифосфорную кислоту - вкачестве источника макроэнергии и ввиде макрознергетических...

Номер патента: 619508

Опубликовано: 15.08.1978

Авторы: Ансберга, Гравите, Каула, Шмите

МПК: C12D 13/06

Метки: активностью, обладающих, полинуклеотидов, полирибонуклеотидфосфорилазной

...в соотношении 1:1 О, пэчогретой дэ 37 С, добавляют 20 г аденэзиндифосфат (АДф), инкубируют с перемешиванием в течение 18 ч.Поли- А выделяют известным способом, Выход поли-А 58%,П р и м е р 2. 50 г интактных клеток суспендируют в 1 л реакционной среды, (рН)сэдержашей 1,2 г трисэснэвания, 0,5 гМСбо; 2 г гипрэлизата казеина, 2 г лизина, глютатион и глюкозу, взятых в соотношении 1;10, попо619508 Составитель С, Малютинаедактор д, Емельянова Техред А, Алатырев Корректор Н. Тупица Заказ 4378/21 Тираж 568 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-З 5, Раушская набд. 4/5,взятых в соотношении 1:1. Выход поли-Ц65%.П р и м е р 5, 50 г интактных кле.ток суспендируют в 1 л...

Номер патента: 601287

Опубликовано: 05.04.1978

Авторы: Ансберга, Гравите, Хейслере, Шмите

МПК: C07H 21/02

Метки: полирибонуклеотидов

...накопиения фосфатов до50-60% обеспечивает стабииизацию равновесия реакции, устраняет обратный процесс 20деконденсацни с одновременной адсорбциейна поверхности геля ферментных белков,Предваритеиьная обработка геия 0,01 Мтрис-НС-буфером повышает специфическуюадсорбцнонную сйособность геля и ускоряет Ипроцесс адсорбции до 5-10 мин, Адсорбированные на геие ферментные белки удаияютцентрнфугированием,Использование ионообменной смоиы, содержащей группу - Й -(СН) позволяет 30выдеиить не вступившие в реакцию рибокнукиеоизид-дифосфаты и повторно вернутьих в процесс, что повышает выход цеиевогопродукта на 12-14%.1 аП р и м е р 1, 125 мг адеиозин- 35дифосфата (А-Дф) растворяют в 5 мпводы, к раствору прииивают 1,5 ми 1 М тряс-НС 1 (рН 8,1), 0,15 ми...

Номер патента: 584247

Опубликовано: 15.12.1977

Авторы: Ансберга, Брод, Ирген, Каула, Кестере, Лудрика

МПК: G01N 33/16

Метки: рибонуклеозид-5триофосфатов, сахарофосфатов

...температура 37 С.Время ферментации 0,5 - 1,0 ч. Для прекращения реакции прибавляют 20 г трихлоруксусной кислоты при 0 С. Степень фосфорилирования - 95%, чистота препарата 97%.П р и м е р 3. 110 г сахарозы, 330 г неорганических фосфатов (калий фосфорнокислый однозамещенный КНгР 04, натрий фосфорно- кислый двузамещенный ХагНРО 412 Н,О = 1: 4), 5 г МдС 1 г 6 НгО, 5 г КС 1 растворяют в 60 мл воды, прибавляют 200 г пивных дрожжей и 27 мл толуола, 300 ед, кислой фосфатазы прибавляют к среде биосинтеза на 25-ой минуте проведения процесса.Биофосфорилированис проводят при 37 С и рН 6,9 - 7,0. Для прекращения реакции привляют 200 г трихлоруксусной кислоты. Стень фосфорилирования 96%.584247 Составитель С. МалютинаРедактор В. Блохина Техред И,...

Номер патента: 522190

Опубликовано: 25.07.1976

Авторы: Ансберга, Брод, Ирген, Каула, Кестере

МПК: A61K 31/7105, C07H 19/00

Метки: рибонуклеозид-5-три, сахарофосфатов, фосфатов

...прибавляют 074 кг неорганических фосфатовКН РО:(рН среды 7,0 при 37 оС),За ходом фосфорилирования следят по изменению рН автоматической регистрациейрН-ме тром., Реакцию фосфорилирования прекращают при рН среды 6,75,Для прекращения реакции прибавляют 2 кг трихлоруксусной кислоты при остановке повышеьия рН.Степень биофосфорилирования 98%. Выход 200 г аденозин-трифосфата.П р и м е р 2. 20 г натриевой соли цитидинмонофосфорной кислоты растворяют в 760 мл воды. К раствору прибавляют 63,8 г неорганических фосфатов КНРО 4.йй Н 7 ОР Н., О в соотношении 1:4, 1,44 г М С " б Я, О, 40 г сахарозы, 1 л пивных дрожжейи 60 млтолУола (РН сРеды 7,0 пРи 37 оС).За ходом фосфорилирования следят по изменению рН автоматической регистрацией рН=метром,...

Номер патента: 521310

Опубликовано: 15.07.1976

Авторы: Ансберга, Ирген, Каула

МПК: C12D 13/00

Метки: трифосфатов, цитидин-5-дии

...повышение выхода целевого продукта и расширение сырьевой базы.Для достижения этой цели, в качестве ,исходного сырья используют нуклеозидци.тидин, а в качестве катализатора - ферментативную систему пивных дрожжей первой генерации.Пример 1. 20творяюг в 7,6 мл воды.лают 1,0 г неорганическ 0,014 г, КС 1, 0,0144 МдС 1пивных дрожжей первой генератолуола, 0,4 г сахара.Время ферментации 30-60 мин при 37 Си рН 6,9-7,0. Йля прекращения реакциийибавляют 2 г трихлоруксусной кислоты приО С. Осадок отцентрифугируют. К фильтрату прибавляют 10-кратный объем Ьтилового спирта, Осадок разделяют на ионообменной ко лонке. Степень фосфорилирования 97%. Выход 0,1 г ЦДФ и 0,15 г ЦТФ.П р и м е р 2, 200 мг цитидина рас-. .творяют в 7,6 мл водыК раствору...