Способ определения гомеостатичности форм ярового ячменя

С 0103 СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕ СКИХРЕспуБлик 64846 А 51)5 С 1 ТЕН ОБ ИСАНИЕ К АВТОРСКОМ ИДЕТ Т ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИРМПРИ ГКНТ СССР(71) Всесоюзный селекционно генетическийинститут(56) Володин В.Г. Изучение активности пероксидазы у растений с разной степеньюгомеостаза. - В с 5. Экологическая генетикарастений и животных. Тез.докл, Всесоюзной конф. Кишинев, 1981, ч. И, с, 38.(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГОМЕОСТАТИЧНОСТИ ФОРМ ЯРОВОГО ЯЧМЕНЯ(57) Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к селекции растений.Цель изобретения является повышение точности определения, Способ прогнозирования гомеостатичности форм ярового ячменявключает выращивание растений до молочно-восковой спелости зерен в контрастныхпочвенных условиях, выделение ДНК, обраИзобретение относится к сельскому хству, в частности к селекции сельскохственных растений,Целью изобретения является повышение точности определения.Предлагаемый способ прогнозирования.гомеостатичности сортов, основан на оценке по показателю, который характеризут изменчивость самого генома, а именно рибосомальной ДН К (рДН К) - участка, количественные характеристики которого тесно связаны с состоянием внешней и внутренней среды организма,ботку Вал Н 1 рестриктазой и блат- гибридизацию по Саузерну с меченым зондом рибосомал ь ной ДН К (рДН К), который представляет собой последовательность размером 4,1 т,п,н, включающую часть 255 и 183 рДНК. Сканирование радиоавтографа производят на денситометре. В качестве наиболее гомеостатичных генотипов отбирают те формы, у образцов которых, выращенных в сосудах с песком при недостатке почвенного азота, зафиксированы наименьшие изменения количественного содержания участков рестриктированной рДНК по сравнению с образцами, выращенными в сосудах с черноземом при подкормке азотно-фосфорно-калийными удобрениями. Способ может найти применение в селекционно-генетических исследованиях, при изучении молекулярных основ гомеостатичности растений, в селекции ярового ячменя для отбора гомеостатичных форм. 1 табл. П р и м е р. Семена (контрольного гомеостатичного) и испытываемых сортов (форм) высевают по двум вариантам опыта в сосуды (10 сосудов на вариант): благоприятные условия - чернозем, ЯРК по 17 Д; неблагоприятные - песок, среда Прянишникова с 1/8 содержания азота, Растения выращивают до получения зерен молочно-восковой спелости, выделяют из них тотальную ДНК, которую разрезают рестриктазой Вагп Н. Фрагменты ДНК фракционируют с помощью электрофореза в агарозном геле, переносят на нитроцеллюлозные фильтры . Эти фильтры с иммобилизованными на них1664846 Хп х-хг хг- 1,7 + 0,2 - 0,5 - 0,5 - 0,4 +1,5 - 0,8 - 0,4 + 0,4 - 0,1 + 1,5 10,2 7,0 4,4 5,4 9,2 2,1 10,2 13,1 2,0 1 1,9 23,7 8,5 7,2 3,9 4,9 8,8 3,6 9,4 12,7 2,4 1 1,8 25,2 9,9 8,8 7,8 7,1 6,0 5;5 4,8 4,0 3,4 3,0 2,0 - 1,7 Южный гомеостатичный Донецкий - 4 гомеостатичный+ 2,5 + 3,1 15,18,8 12,6 5,7 9,9 8,8 фрагментами ДНК гибридизируют с меченым фрагментом рДНК, который представляет собой последовательность размером 4,1 т.п,н., включающую часть 255 - 185 блат-гибридизация по Саузерну) и экспонируют с рентгенографической пленкой. Для оценки различий по количеству фрагментов рестрикции рДНК между вариантами опыта определяют площадь полос рДНК с помощью радиоавтографа при сканировании на денситометре. Сравнение рДНК образцов, выращенных в разных почвенных условиях; делают в 5 повторных опытах по рестрикции ДНК, электрофорезу, блот-гибридизации и сканированию радиоавтограмм,Площадь полос фрагментов рДНК образцов, выращенных на черноземе (Хг) и на песке Х), представлена в таблице.Из таблицы видно, что образцы сортов Южный и Донецкий, выращенные в контрастных условиях, практически не различаются по содержанию фрагментов рДНК, исключение составляет фрагмент размером 6,0 т.п.н, сорта Южный, Выявлены достоверные различия между образцами сорта Магнифпо количеству фрагментов размером 8,8, 6,0, 4,0, 3,0 и.2,0 - 1,7 т.п.н и Сорт и его гоме- Мол. масса.фрагостатичность мента т.п.н,между образцами сорта Карат, фрагменты8,8, 7,8, 6,0 и 2,0-1,7 т,п,н. Таким образомрДНК гомеостатичных сортов (Южный, Донецкий) не претерпевает изменений под5 воздействием неблагоприятных почвенныхусловий, в то время как у негомеостатичныхсортов (Карат, Магниф) зафиксированыизменения количества некоторых фрагментов рДНК,10 Формула изобретенияСпособ определения гомеостатичностиформ ярового ячменя, предусматривающийвыращивание растений до молочно-восковой спелости зерен, выделение и коли 15 чественный анализ биохимическогокомпонента, о т л и ч а ю щ и й с;я тем, что,с целью повышения точности определения,растения выращивают в контрастных почвенных условиях, а выделению и анализу20 подвергают тотальную ДНК из зерен, путемобработки ее рестриктазой, блот-гибридизации с зондом рДНК, сканирования радиоавтографов на денситометре и определенияразмеров фрагментов ДНК образцов, при25 этом форму считают гомеостатичной в случае отсутствия достоверных различий между размерами фрагментов у растений,выращенных в контрастных условиях,Пло а ь полос агментов Р НК, ф1664846 Продолжение таблицыРазличия достоверны ( Составитель Е.КузнецоваТехред М,Моргентал Корректор М.Кучерява дактор Н.Рогулич аказ 2366 Тираж 364 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при Г 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101