Среда для культивирования продуцента -амилазы aspergillus cryzae 3-9-15

О П И С А Н И Е948999ИЗОБРЕТЕН ИЯ Союз Советск ихСоциалистическикРеспублик К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(51)М. Кл,С 12 Й 9/22 С 12 Й 9/32 с присоединением заявки3 ЬвуАарстванаиИ комитет СССР ае делам взабретеиик и еткрмтийДата опубликования описания 10.08.82 А. Ф. Лидере, В. Э. Шкинке, 3. А. Виестууе и .Г., ) 1. Квебитвдзе.,. 1,увф О 1,ц,Я(54) СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ПРОИУБЕНТА Ы, АМИЛАЗЫ Абрещ 4 Иив огЭае 3 9 151Изобретение относится к микробиоло-гической промышленности, а именно касается состава питательных сред для культивирования продуцентов ферментов К-вмилаэы и нуклеазы, применяемых в спиртовом, космическом, химическом производ 5 стве, в медицине и в молекулярной биологии, для расщепления полисахаридов в биологическом материале ( д-амилвза) и для изучения структур нуклеиновых кислот,1 О получения 5-нуклеотидов и лечения рака (нуклеаза Я).Известен способ получения е(,-амилаэы, предусматривающий культивирование продуцентв Аьрегср ВРцэ ОгЗюе 3-9-15 в15 течение 72 ч при 30 оС на птттательной среде, содержащей крахмал, квк источник углеродабиостимулятор - солодовый экстракт, минеральные соли, микроэлемент и воду при следующем соотношении компо о нентов; крахмал 8,0; солодовый экстакт1,0; фосфорнокислый одноэамещенный калий 0,01%, магний азотнокислый 0,08; натрий азотнокислый 1,2; калий хлорис 2алый 0,05; магний фосфорнокислый 0,07; магний сернокислый 0,1; железо серно- кислое 0,003. Выход активности сС-амилвзы в культурвльной жидкости 20.ед/мл фильтрата 1 ) .Недостатками известного способа являются высокий расход сырья и сложный состав питательной среды при возможности получения только одного фермента, сравнительно низкая активность К-вмилазы. Бель изобретения - повышение с-амилазной активности продуцента и одновременно продуцирование нуклеазы б: .Поставленная целЬ достигается тем, что известная среда для культивирования продуцента А-амилаэы ЛярЕгрЮР 05 ог 32 с 18 3-9-15, содержащая источник углерода- крахмал, биостимулятор - солодовый экстракт, минеральные соли: натрий азотнокислый, однозамещенный фосфорнокислый калий, сернокислый магний, микроэлемент и воду, в качестве микроэлемента содержит индуктор нуклеаэы 61 - цинк серно- l0,05 0,8-1,0 0,8 0,06 0,8 3 9489 кислый, при следующем соотношении компонентов, вес, %;Крахмал 5,5 -6,0Солодовый экстрактКалий фосфорнокислыйодноэа мещенный 0,1-0,2Натрий азотнокислый 0 8-10 10Калий хлористый 0,04-0,06Магний сернокислый 0,05-0,06Цинк сернокислый 0 005-0,007Вода твпъное 15Ионы динка играют существенную роль в активировании различных энзиматических процессов метаболизма клетки, стимулируя образование нуклевэ, Косвенно, через оксидативное фосфорироввние обеспечивается 20 полноценный обмен веществ, присутствие ионов цинка положительно влияет также нв образование Й-вмилазы. Соотношение в среде источников углерода, азота и фос-, фора обеспечивает оптимальное развитие 25 культуры и биосинтез с-амилазы а нуилеазы б., Максимум биосинтеза о-амилвзы и нуклеазыЗдостигается к 72 ч культи вирования при 30 оС в аэробных условиях.,30Результаты культивирования:Активность, ед/мл фильтрата с -амилаэы25-30, нуклеазы В 80- 100. П р и м е р 1. Культура ЛВрегсрИОЬ Огу Хсе 3-9-15 поддерживается на сусло-агаре, пересевается 1 раз за три месяца.1. Инокуляция посевного материала. Для подмолаживания культуры готовят косяки, которые выращивают в термостате40 при 30 оС 7 сут, после чего выдерживают при комнатной температуре Зсут, затем ставятся в холодильник при +4 ОС. Белесообразен возраст используемых культур 10- 20 сут. Культуру с косяка смывают 45 стерильной деминералиэованной водой н засевают по 1 мл в колбах с питательной средой и размножают нв качалке при 30 С 24 ч. Питательная среда содержит, вес.%:Крахмал 55 50Солодовыйакстракт 1,0Калий фосфорнокислыйодноэамещенный 0,1Натрий азотнокислый 99 4Калий хлористый 0,04Магний сернокислыйЦинк сернокислый 0,052. ферментвция культуры. ферментация культуры производится после добавления инокулята с расчетом 1 мл культурвльной суспенэии на 200 мл питательной среды. ферментацию производят в 20 мл ферментера при 30 фС в условиях принудительной аарации. Во время ферментации контролируется однородность культуры, рН, температура, степень аарации, сверх- давление в вппарате и динамика накопления ферментов. После ферментации на 72 ч отфильтровывают мицелий. Активность-амилазы в фильтрате составляет 25 ед/ /мл, нуклеазы 5. 100 ед/мл.П р и м е р 2. Питательная среда са держит, вес,%:Крахмал 6,0Солодовыйакс трактКалий фосфорнокислыйодноэамещенный 0,2Натрий азотнокислый 1,0Калий хлористыйМагний сернокислый 0,06Цинк сернокислый 0,007Инокуляшпо посевного материала и ферментацию культуры производят аналогично примеру 1. Активность с -амилвэы в филь- трате 30 ед/мл и нуклеазы Э 80 ед/мл,Таким образом, реализация предложенного изобретения позволяет повысить д -амилаэную активность продуцентв на 30% и добиться одновременного синтеза нуклеазы 81формула изобретения Среда для культивирования продуцента д,-амилвэы Ая реги Иоз, ог:паа 3-9-15, содержащая источник углерода - крахмал, биостимулятор - солодовый экстракт, минеральные соли: натрий азотнокислый, калий фосфорнокислый одноэвмещенный, магний сернокислый, микроэлемент и воду, о т л и ч а ю щ а я с я тем, что, с целью повьппения е-амилаэной актив948999 0,04-0,06 0,1-0,2 ности продуцента и одновременного продуцирования нукелазы 5 питательная среда в качестве микроэлемента содержит индуктор нуклеазы 51 цинк сернокислый и дополнительно включает калий хлорис".- З тый, при следующем соотношении компонентов, вес,%:Крахмал 5,5-6,0Солодовыйэкстракт 08-10 ОКалий фосфорнокислыйоднозамешен- ный 6Натрий азотнокислый 0,8-1,0Калий хлористыйМагний сернокислый 0,05-06бринк сернокислый , 0,005 0,007Вода ОстальноеИсточники информапии, принятые во внимание при экспертизе1. Авторское свидетельство СССР % 328746, кл. С 12 8 9/28, 1970 (прототип) .Заказ 5699/7 Тираж 505 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 3/5 филиал ППП "Патент", г, Ужгород, ул. Проектная, 4