C12N 9/22 — рибонуклеазы

Номер патента: 1698286

Опубликовано: 15.12.1991

Авторы: Бойков, Бойкова, Дегтярев, Репин

МПК: C12N 1/20, C12N 9/22

Метки: sтuтzеri, в-4724, вкпм, культивирования, питательная, продуцента, рsеudомоnаs, рестриктазы, среда, штамма

...1 131 ВКПМ В - 4727 осуществляют насухом питательном агаре (сухой питательный агар 35,0 г/л; вода 1,0 л) в чашкахПетри. Инкубируют в термокамере при 28 Св течение 24 ч,30 С поверхности агара в чашках Петрикультуру переносят бактериологическойпетлей в качалачные колбы с. питательнойсредой данного состава, рН 7.,2.Выращивают посевной материал при35 28 С в течение 18 ч на качалке,.Ферментацию культуры проводят напитательной среде данного состава прирН 7,2, температуре 28 С, перемешивании200 об/мин, подаче воздуха: 2 сбъема ваз 40 духа на 1 обьем питательной среды, выращива от до достижения оптической плотностибактериальной суспензии 1,7 опт,ед, (ЗЭК,филь.гр М 6, кювета 0,5 см).Выход биомассы 13,0 г/л культуральной45 жидкости.Выход...

Номер патента: 1698289

Опубликовано: 15.12.1991

Авторы: Битинайте, Буткус, Вайткявичюс, Кюдулене, Пятрушите, Янулайтис

МПК: C12N 9/22

Метки: выделения, класса, рестриктаз

...100 В. Окрашенные этидийбромидом (1 мкг/мл) гели просматривают вУФ-свете, 10 20 зуют в течение 16 ч против 2 л буфера А,30 содержащего 0,1 М йаС 1, ростью 20 мл/ч наносят на колонку (1,5 х 35 40 50 55 За условную единицу активности принимается то количество фермента, которое в оптимальных условиях за 1 ч полностью расщепляет 1 мкг ДРК фаза А,Все операции по выделению и очистке ферментов проводят при +4 С,Для выделения рестриктаз ХЬа 1,йо 11, Есо 147используют биомассы клеток Хапйопопаз Ьабг 1, йосагса оОтЫ 1 зсач 1 агшп и ЕзсЬег 1 сЫа со 11 ВР 147 соответственно,Разрушение клеток: 20 г биомассы клеток суспендируют в 40 мл буфера А, содержащего 0,1 М йаО, обрабатывают ультразвуком на дезинтеграторе мощностью 100 Ю в течение 7 мин...

Номер патента: 1703688

Опубликовано: 07.01.1992

Авторы: Ковалева, Козлов, Мячин

МПК: C12N 9/22

Метки: нуклеазы, проростков, ячменя

...уравновешенным 50 мМ трис-НС буфером, рН 8,0,при 20 С, после чего колонку промывают20 мл того же буфера для удаления неспецифичной фосфатазы и 5-нуклеотидазы, Примесные белки с АТФ-азной активностьюустраняют раствором 0,1 М йаС (20 мл),нуклеазу с Зф-нуклеотидаэной активностьюэлюируют 20 мл 05 М раствора МаС. Скорость элюции 40 - 50 мл/ч.Этап 6. Концентрирование.Обьединение фракции с 3 -нуклеотидазной активностью диализуют против 50%-ного раствора глицерина. приготовленного на50 мМ Ма-ацетатном буфере рН 6 0 и хранятпри - 10 - 20 С,Определение активности ферментов/Определение 3 -нуклеотидазной активности нуклеазы.3 -Нуклеотидазную активность определяют по колориметрическому методу. Заединицу активности принимают количествоРн в...

Номер патента: 1721087

Опубликовано: 23.03.1992

Автор: Ямковой

МПК: C12N 9/22

Метки: кобры, концентрирования, эндонуклеазы, яда

...перед упариванием в добавляют альбумин до конечрации 0,05 - .0,5 мг/мл, а сконанную и отдиализованную у лиофилизуют,В раствор фермента перед упариванием в токе воздуха добавляют альбумин до конечной концентрации 0,05-0,5 мг/мл, а сконцентрированную и отдиализованную эндонуклеазу лиофилиэуют.П р и м е р, Концентрирование эндонуклеазы проводят при 4 - 6 С. Фермент, выделенный из 1,5 г сухого яда кобры путем последовательного фракционирования раствора яда гель-фильтрацией на сефадексе 6-75 (сверхмелком) и катионообмен ной хроматографией на ЯР-сефадексе С(объем 121 мл), помещают в целлофановый диализный мешок, вносят в него 20 мг(0,165 мг/мл) альбумина из сыворотки крови человека (99 ва, США) и упаривают до 8 мл в течение 3 сут в токе...

Номер патента: 1771484

Опубликовано: 23.10.1992

Автор: Ямковой

МПК: C12N 9/22

Метки: биокатализатора, выделения, двухферментного, нуклеозидов

...р и м е р 1. Выделение фосфодиэстеразы и 5-нуклеотидаэы проводят при 4-6 С.1,5 г сухого яда кобры растворяют в 20 млбуфера А (0,05 М трис-сукцинат, рН 5,6) инаносят на колонку.К 50/60 (Рйаппаса,Швеция), заполненную на 47 см(1:9,4) сефадексом 6-75 (сверхмелким), наслоенным на1 см "подушку" иэ сефадекса 0-75 с диаметром гранул 40-120 мкм, уравновешеннуюбуфером А. Элюцию осуществляют буферомА со скоростью 24 мл/час. Во фракциях,собираемых каждые 15 мин определяют,активность фосфодиэстеразы и 5-нукле. отизады по методу (1). Фракции 32-39, со;держащие элюирующиеся совместнофосфодиэстеразу и 5-нуклеотидазу, объе.диняют(объем 48 мл), измеряют в них содержание ферментов и белка (см. таблицу) иконцентрируют диалйзом против 50 ф...

Номер патента: 1780012

Опубликовано: 07.12.1992

Авторы: Булатов, Жабоева, Мороз

МПК: C12N 9/22, G01N 33/68

Метки: билиарного, детей, поражений, тракта

...Мп 504 и 1,3 мл 40 мМ веронолового буфера и рН 7,5, добавляют 0,2 мл 0.1 М раствора ЮС 12 и 0,2 мл АМФ, Реакцию останавливают 2 мл 10% ТХУ, отделяют осадок центрифугированием и в 1,5 мл супер натан та оп редел я ют Ф н (фотометрирование) против раствора сравнения при 1=660 нм). Различие в активности опытной и контрольной проб в единицах освобожденного Ф, дает активность 5-нуклеотидазы и вы1780012 3 Лк тгиснсть 5.нН 784 -1459411 Хронический холецистолангит (25)1 Диски незия желчевыводящихпутей по гипомоторному ти(су (РО)Дискинезия желчевыводящи 1 путей по гепермоторному типу 10),Здоровые дети 8+ 384+ Составитель С,РыбалкинТехред М,Моргентал едактор С,Кулакова Корректор Т.Палий аказ 4433 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета...

Номер патента: 1249935

Опубликовано: 30.05.1994

Авторы: Аникейчева, Вотрин, Колоша, Соколов, Фицнер, Фодор, Хорошутина

МПК: C12N 9/22

Метки: gcatg, нуклеотидную, последовательность, расщепляющей, рестрикции, узнающей, эндонуклеазы

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ РЕСТРИКЦИИ, УЗНАЮЩЕЙ И РАСЩЕПЛЯЮЩЕЙ НУКЛЕОТИДНУЮ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ - GCATG - C, включающий культивирование продуцирующего микроорганизма на питательной среде, содержащей источник азота, углерода, минеральные соли и воду, в условиях аэрации с последующим выделением из биомассы целевого продукта, отличающийся тем, что с целью повышения выхода биомассы продуцента и активности эндонуклеазы рестрикции Рае 1, в качестве продуцирующего микроорганизма используют штамм Pseudomonas aeruginosa BU 278.

Номер патента: 1262952

Опубликовано: 30.05.1994

Авторы: Ансберга, Баев, Бурьянов, Зилбере, Косых, Миериня, Филипченкова

МПК: C12N 9/22

Метки: рестрикции-модификации, системы, ферментов

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТОВ СИСТЕМЫ РЕСТРИКЦИИ-МОДИФИКАЦИИEco R 11 из бесклеточного экстракта штамма Escherichiacoli B 834 ( rв- , mв- ) /pSK 323, включающий получение биомассы, обработку клеток дезинтегрирующей смесью, содержащей фосфат калия, этилендиаминтетрауксусную кислоту, меркаптоэтанол и лизоцим, отделение экстракта, осаждение фермента полиэтиленимином, экстракцию фермента раствором хлористого калия или хлористого натрия, осаждение из экстракта сульфатом аммония, диализ, хроматографию диализата на диэтиламиноэтилцеллюлозе, ипользуя для элюции раствор с градиентом концентрацией хлористого калия или хлористого натрия, последующую хроматографию на фосфоцеллюлозе в градиенте концентрации того...

Номер патента: 1321060

Опубликовано: 15.11.1994

Авторы: Ансберга, Баев, Бурьянов, Косых, Филипченкова

МПК: C12N 9/22

Метки: 834psk, corii, escherichia, бактерий, рестриктазы, штамма

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РЕСТРИКТАЗЫ E.CORII ИЗ ШТАММА БАКТЕРИЙ ESCHERICHIA COLI B 834/pSK 323 путем дезинтеграции клеток в смеси, содержащей 10 мМ калий - фосфатного буфера, рН 7,0, 7 мМ 2-меркаптоэтанола и 1 мМ трилона Б, разрушения клеток ультразвуком, осаждение фермента из бесклеточного экстракта полиэтиленимином, который добавляют до концентрации 0,3 - 0,5%, экстракции фермента 0,4 М раствором хлористого калия, осаждения сульфатом аммония, очистку на ДЭАЭ-целлюлозе при элюировании фермента раствором хлористого калия с возрастающей концентрацией от 0 до 0,3 М и последующую очистку на фосфоцеллюлозе при элюировании раствором, хлористого калия с возрастающей концентрацией от 0,1 М до 0,5 М и концентрировании, отличающийся тем, что, с целью...

Номер патента: 1389292

Опубликовано: 20.07.1996

Авторы: Божко, Дегтярев, Репин, Щелкунов

МПК: C12N 9/22

Метки: рестриктазы

Способ получения рестриктазы Hgal, включающий приготовление посевной культуры Haemophillus gallinarum ВКПМ В-2203 на твердой питательной среде, содержащей питательную основу, никотинамидадениндинуклеотид, фактор роста, агар и воду, последующий засев ею жидкой питательной среды, выращивание в оптимальных условиях, отделение клеток и выделение из них целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения активности и чистоты ферментного препарата, при приготовлении посевной культуры в качестве питательной основы используют панкреатический гидролизат кильки, а в качестве фактора роста - донорскую кровь в количестве 3,0 10,0 г/л, в твердую питательную среду дополнительно вводят однозамещенный и двузамещенный фосфаты калия.

Номер патента: 1226840

Опубликовано: 27.07.2000

Авторы: Ансберга, Баев, Баумане, Глухов, Ежов, Крюкова, Николаева, Солонин, Таняшин, Троицкая, Трояновский

МПК: C12N 9/22

Метки: полинуклеотидлигазы, фага

Способ получения полинуклеотидлигазы фага Т4 из клеток E.coli, включающий выращивание продуцента фермента, дезинтеграцию клеток, отделение экстракта, хроматографию на последовательно соединенных колонках с ДЭАЭ-целлюлозой и фосфоцеллюлозой, концентрирование ферментного раствора, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода фермента и сокращения продолжительности процесса, хроматографию на ДЭАЭ-целлюлозе проводят при массовом отношении последней к биомассе клеток 1,5 - 1,8 : 1, концентрирование осуществляют путем ультрафильтрации.