Манялене
Способ получения эндонуклеаз-рестриктаз, обладающих способностью узнавать и расщеплять последовательности нуклеотидов 5 -gpucgpyc-3 и 5 -catg-3
Номер патента: 1458388
Опубликовано: 15.02.1989
Авторы: Битинайте, Буткус, Горбачев, Грубер, Кюдулене, Лазарявичюте, Лаучис, Манялене, Поляченко, Янулайтис
МПК: C12N 9/22
Метки: catg-3, gpucgpyc-3, нуклеотидов, обладающих, последовательности, расщеплять, способностью, узнавать, эндонуклеаз-рестриктаз
...буфером В, содержащим 0,1 М ИаС 1. Колонку промывают 150 мл того же буфераи элюируют линейным градиентом ИаС 1 от 0,1 до 1,0 М в 500 мл буфера В. Отдельно собирают фракции, элюируемые при 0,25-0,36 М НаС 1, содержащиеосновную часть активности рестриктазы Нхп 1 1, и фракции, элюируемыепри 0,58-0,7 М, содержащие активностьрестриктазы Н 1.п 1 11. Далее очисткурестриктаз Нп 1 1 и Нп 1 11 провоАктивность рестриктаз тестируют методом гидролиза ДНК фага лямбда с последующим . разделением полученных фрагментов электрофорезом в агарозном геле. Реакционная смесь для гидролиза ДНК фага лямбда рестриктазой Ндп 1 1 содержит 10 мМ трис-НС 1 рН 8,5, 25 мМ НаС 1, 5 мМ МяС 1 100 мкг/мл альбумина бычьей сыворотки, 2 мкг ДНК фага лямбда в 40 мкл...