Питательная среда для культивирования micrococcus luтеus вкпм в-2836 продуцента сайт-специфической эндонуклеазы mlu1

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 1 А 1 ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ ьскии тг 1 ст 1 отег 1 огпосео ерименты с жидкой лочных колбах Эрю 750 мл в 100 мл ем 200-220 об/мин, пределяют по оптиизмерения на пририметр КФКпри вете толщиной 5,05 О дуцента Сайт-с ы Мо 1 использ ный из Всесо енных микроо Москва, где хр В качестве пр ской зндонуклеаз М. Меоз, получен лекции промышл ВНИИ генетика, г номером В. пецифичеют штамм юзной колрганизмов нится под ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯПРИ ГКНТ СССР К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(71) Всесоюзный научно-исследоват институт прикладной микробиологи (72) 3. Ф, Бунина и В. В. Смолянино (53) 577.15(088.8)(56) Авторское свидетельство СССР М 1025725, кл. С 12 И 9/22, 1981.Яод 1 заМ Н., Капагацча Я, Нее ге епдопос 1 еазез 1 гоа Р 1 ачоЬас оКеапо 1 о 1 тез (ГоК 1) апб М 1 сгососсо (М о 1). Оепе. 1981, к 16, р. 73-78.(54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ М 1 СКОСОССОЯ ЮТЕОЯВКПМ В- ПРОДУЦЕНТА САЙТ-СПЕ- .ЦИФИЧЕСКОЙ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ М ОИзобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при получении сайт-специфической эндонуклеазы М о 1.Цель изобретения - повышение выхода биомассы и фермента.На фиг. 1 и 2 представлены графики, отображающие рост культур.Изобретение заключается в том, что в известной питательной среде для культивирования продуцента сайт-специфической эндонуклеазы М 1 ов качестве источника аминного азота используют гидролизат казеина. 51)5 С 12 й 1/20, 922//(С 12 й 1/20, С 12 й . 1:265)(57) Изобретение относится к биотехнологии и касается получения сайт-специфической эндонуклеазы М 1 о 1, С целью повышения выхода биомассы и фермента продуцента сайт-специфической эндонуклеазы М 1 о 1 - М 1 сгососсоз 1 о 1 еоз ВКПМ В культивируют на среде, содержащей следующие компоненты, мас. О(, гидоолизат казеина 1,8-2,0; дрожжевой экстракт 2,7-3,0; хлористый натрий 0,2-0,3; дистиллированная вода остальное. Преимущество предлагаемой среды заключается в увеличении выхода биомассы и фермента в 4 раза по сравнению с культивированием на известной питательной среде, при этом выход биомассы достигает 20-24 г сырой биомассы с 1 л среды, а активность фермента - 100-420 тыс. ед/г, 2 ил 1 табл.1 гПример 1.Экспсредой проводят в качаленмейера вместимостьсреды при 30 С с качаниКонцентрацию клеток оческой плотности путемборе фотоэлектроколодлине волн 540 нм в кюмм,Культуру выращивают на среде следующего состава, мас;: гидролизат казеина 1,8; дрожжевой экстракт 2,7; хлористый натрий 0,2; дистиллированная вода остальное. Данная среда соответствует минимальным концентрациям компонентов (фиг. 1, кривая 1).П р и м е р 2. Среда содержит мас.; гидролизат казеина 2,0; дрожжевой экстракт 3,0; хлористый натрий 0,3; дистилли 1693041рованная вода остальное, Данная среда соответствует максимальным концентрациям компонентов. Условия культивирования, как в примере 1. На фиг, 1 рост представлен кривой 2. Как видно по кривым 1 и 2 минимальные и максимальные значения содержания компонентов среды показывают идентичные результаты.П р и м е р 3, Среда с концентрацией компонейтов меньше предлагаемой, мас.ф. гидролизат казеина 1,5; дрожжевой экстракт 2,5; хлористый натрий 0,1; дистиллированная вода остальное, Условия культивирования, как в примере 1. На фиг.1 рост клеток представлен кривой 3. Как видно по характеру кривой 3, в сравнении с кривыми 1 и 2, снижение концентраций компонентов приводит к уменьшению плотности клеток в конце роста.П р и м е р 4. Среда с концентрацией компонентов выше предлагаемой, мас.: гидролизат казвина 2,5; дрожжевой экстракт 3,5; хлористый натрий 0,4; дистиллированная вода остальное. Условия культивирования, как в примере 1. На фиг, 1 рост клеток представлен кривой 4. По ха. рактеру кривой 4 видночто увеличение концентраций компонейтов среды выше предлагаемого значения к улучшению роста не приводит, но наблюдается торможение в фазе экспоненциального роста культуры.Таким образом, предложенные концентрации компонентов являются оптимальными,П р и м е р 5; Совокупность компонентов в предлагаемой среде подобрана по результатам двухэтапного эксперимента.В таблице представлены данные, подтверждающие, что штамм М. осецз предпочитает в своем развитии гидролизат казеина и дрожжевой экстракт(время культивирования 24 ч),П р и м е р 6, Культивирование проводят в ферментере вместимостью 30 л в 20 л питательной среды, снабженном автоматической системой регулирования рН среды,температуры 30 С, воздух 20 л/мин, скорость перемешивания 500 об/мин, на двух5 средах- предложенной и известной. Составпредложенной среды, мас.ф: гидролизатказеина 1,8; дрожжевой экстракт 2,7; хлористый натрий 0,2; дистиллированная вида остальное. Состав известной среды, мас, :10 триптон (ОИсо) 1,0; дрожжевой .экстракт(О 1 со) 0,5; хлористый натрий 0,5, Пробы отбирали, как указано на фиг. 2, АктивностьМоопределяли в грубом клеточном экстракте. Как видно по кривым фиг. 2, рост на15 предлагаемой среде (кривая 5) в 4,6 раз лучше, чем рост на среде прототипа (кривая 6),при этом получают 20-24 г сырой биомассыс 1 л среды в той точке (16 опт. ед.), котораясоответствует максимальной активности20 фермента 400-420 тыс. ед,/г, в то время каквыход биомассы на известной среде(кривая6) составляет 7-9 г с 1 л среды и максимальная активность фермента около 90 тыс.ед,/г.25 Преимущество предложенной среды заключается в повышении у продуцента выхода биомассы и фермента в 4 раза посравнению с культивированием на известной среде.30 Формула изобретенияПитательная среда для культивирования Мсгососсцз отевз ВКПМ В- продуцента сайт-специфической эндонуклеазыМц , включающая источник аминного азо 35 та, дрожжевой экстракт, хлористый натрийи дистиллированную воду, о т л и ч а ю щ ая с я тем, что, с целью повышения выходабиомассы и фермента, она содержит в качестве источника аминного азота гидролизат40 казеина при следующем соотношении компонентов, мас.ф : гидролизат казеина 1,82,0; дрожжевой экстракт 2,7-3,0; хлористыйнатрий 0,2-0,3; дистиллированная вода остальное,451693041 76 12 70 орректор Т,палий Редактор О,Юрковецкая оизводственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 аказ 4ВНИ ставитель В.Соихред М.Моргента Тираж Подписное Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5