Способ получения биомассы, обогащеннойфаговой днк

С ею э СоветскихСоциалистическихреспублик ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН ИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 11 834123)М. Кл.С 12 й С 12 М С 12 Р 413 28-13 ОЮ присоединениент заявки РЙ23) Приоритет -рстввнньй квинтетСССРвлвм нзвбрвтввккн вткритвй публиковано 30. 05. 81. Бюллетень Ле 20 53) УДК 576,8. .093.1(088.1 ата опубликования описания 30,05. 8 1 Я. Хейсл ите, С. Ансберга, Витенберг 2) Авторы изобретен 71) Заявитель 4) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОМАССЫ Е 5 СНЕРСН 1 А С 01.1 М( Л с 1857 5 ), ОБОГАЩЕННОЙ фАГОВОЙ ДНК пептид0,2; глюнокислыйлий фос0,2-0,3га пров3 мин,присутс1 Х глюкСпособразом получ з Езс ой биотем ис- М ваютеде ия микробиальнг 1 с 111 а Со 1 пус 1 тег 1 с 111 а со 1 1культуру выращиой питательной сртававес.й:25-300,5-11,0-1,5О-,г,30,1-0,27,4-7,6. Дл ссы дольз( Х сна сиследующ ания857 5 ич его сонопептидоза /ро Ами Глюк йа Н КН 2 Р нн 4,С рН(61). Дополнительное к авт. свид- (22) Заявлено 19. 10. 79 (21) 28 1Изобретение относится к микробиологической промьппленности и касается получения биомассы, обогащенной,биологически активными веществами.Известен способ получения биомассы Езс 1 тег 1 сЫа со 11 М(Лс 1857 57) обогащенной фаговой ДИК путем выращи. вания на питательной среде с последующей индукцией фага и внутриклеточным накоплением 111.Однако известный способ не обес.10 дечивает высокого выхода биомассы (3,4-4,1 мг/мл) и количества .внутри Л клеточного фаза (0,910 -1,518 ВОЕ/мг).Цель изобретения - повышение выко"13 да биомассы и количества внутриклеточного фага.Указанная цель достигается тем, что в. способе получения биомассыЕзсттег 1- с 111 а со 11 М( Лс 1857 57), обогащенной фаговой ДНК, путем выращивания на питательной среде с последующей индукцией фага и внутриклеточным накоплением, выращивание культуры ведут е, содержащей, вес.Х: амино-301 хлористый аммоний 0,1 козу 0,5-1,0; натрий Фосфордвухзамещенный 1-1,5; кафорнокислый однозамещенныйиводу остальное,)индукцию фаодят прй 44-45 ОС в течение 2- а накопление фага проводят в твин 0,05"0,1 Х лецитина и 0,5- озы,об осуществляется следующим,риклеточногофага, БОЕ/мгбиомассы, 4,4 104П р и м е р 2. Питательная средасодержит, вес.%: аминопептид 30,глюкозу 1,О, йа НРО 1,0, КНО 0,2;ННС 0,2,Остальные операции аналогичныпримеру 1, После нагревания культу.оральной жидкости до 44-45 С глюкозудобавляют в количестве 1,0%, а лецитин 0,05%, Далее по примеру 1,Выход биомассымг/мл 5,220 Количество внутриклеточного вегетативного Фага,БОЕ/мг биомассы 2,8 ОфПредлагаемый способ обеспечивает25 получение Фаговой ДНК для нужд молекулярной биологии и исследований вгенной инженерии с высоким выходомбиомассы и целенаправленным накоплением в ней интактной ДНК фага лямбда. 3Глюкозу вводят в питательную средув виде стерильного раствора.Проводят термообработку биомассыпри 44-45 С в течение 2-3 мин с последующим выращиванием на среде, содержащей дополнительно 0,05-0,1% лецитина и 0,5-1,0% глюкозы.Выход биомассымг/мл 4,0-5,2Количество внутриклеточного вегетационного фага,БОЕ/мг биомассы 2,8 10 -4,410иликоличество внутриклеточных молекулДНК фага, мол/мгбиомассы 2,8 10 -4,410И НП р и м е р 1. Питательная средасодержит, вес.%; аминопептид 25;глюкоза 0,5; ЙаНРО1,5; КН РО 0,3ИНЕС .0,1, рН 7,4-7,6,Глюкозу вводят в питательную средв виде стерильного раствора в началеФерментации.Выращивание микробиальной биомассы из ЕзсЬег сйа соМ(1 с 18575.7).Инокуляция посевного материала.Культуру Езсйег 1 сЬ 1 а со 1 М30(3. с 1857 Б) поддерживают на столбиках МПА под вазелиновым маслом, пересевают 1 раз в 6 мес. Для подновлениякультуру засевают в мясо-пептонныйбульон, инкубируют 10-12 ч при 30 С,О 35Инокулят готовят, пересевая 10-2 ча"совую культуру на 1 л свежей средыиз расчета 115 и размножают стационарно при 302 С,ферМентацию культуры Езс 1 егсй 1 а40соИ(с 1857 5.) производят после добавления инокулята 1:20 по отношению к объему среды. ферментациюпроводят при 30 + 2 С в условиях при 45нудительной аэрации (0,5 л воздухана 1 л питательной среды ).На ранней логарифмической стадииразвития (по калибровочной кривой )проводят быстрое нагревание культуральной жидкости до 44-45 С в течение 23 мин, после чего быстро охлаждают до37 1 1 фС, добавляют 0,5% глюкозы и0,1% лецитина, Если необходимо, проводят подщелачивание культуральной55жидкости раствором МаОН. до рН 7,47,6. Устанавливают аэроцию 3 л воздухаВНИИПИ Заказ 4128/47филиал ППП "Патент", г,формула изобретенияЮ Способ получения биомассы Гзс 1 ег с 6 а соМ(Хс 1857 51), обогащенной фаговой ДНК, путем выращивания на питательной среде с последующей индукцией Фага и внутриклеточным накоплением, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения выхода биомассы и количества внутриклеточного фага, выращивание культуры ведут на среде, содержащей, вес.%аминопептид 20-30; хлористый аммоний0,1-0,2.; глюкозу 0,5-1,0; натрий Фосорнокислый двухзамещенный 1-1,5; калий Фосфорнокисльй однозамещенный0,2-0,3 и воду остальное, индукциюФага проводят при 44-45 фС в течение2-3 мин, а накопление Фага проводятв присутствии 0,05-0,1% лецитина и0,5-1% глюкозы.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Патент США В 389482,кл. 195-28, опублик, 1974.Тираж 528 Подписное Ужгород, ул. Проектная, 4