Способ получения днк из биомассы еsснеriснiа coli

О П И С А Н И Е (1861399ИЗОВРЕТИНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз СоветскихСоцнапнстнчесннкРеспублик(23) Приоритет(51)М. Кл. С 12 И 1/08 3 Ьеударстееие кемитет СССР де делам иеебретениа и еткрмтий(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДНК ИЗ БИОМАССЫ ЕЯСНЕВСНАСО.1Йзобретение относится к химикофармацевтической промышленности и касается полученияДНК, применяемой в исследовательской работемолекулярной биологии.Известен способ получения дезокснрибонук 5леиновой кислоты нэ биомассы Е, соП путемобработки ее хлороформом с последующимудалением осадка, выделением нз супернатаитафагов в градиенте концентраций хлористого.цезия, освобождением иэ ннх ДНК с последую.тещей очисткой и осаждением .целевого продукта (1.Однако известный способ длителен (40 ч)и выход целевого продукта незначителен(0,32 м ДНК/1 г биомассы),Целью изобретения является повышение выхода целевого продукта и ускорение способа,Эта цель достигается тем, что по способуполучения ДНК иэ биомассы Е. оо путем:обработки ее хлороформом с последующимудалением осадка, выделения из супернатантафатов в градиенте концентраций хлористогоцезия, освобождения нз них ДНК и очисткицелевого продукта, фагн после выделения очи.шают диализом против трис-буфера, содержащего 0,05 М чаС и 0,01 М. ЕДТА, нрирН 7,9, освобождение ДНК проводят додецилсульфатом, а очистку осуществляют феноломн смесью хлороформа с амиловым спиртом,вэитьтк в соотношении 24:1,Способ осуществляют следующим образом.Полученный осадок суспендируют в 0,01 Мтряс-буфере, рН 7,9 - 8,0+10% хлороформа,Очистку фага лямбда проводят в градиентеСеС 1, Полученную фракцию фага диализируют2 ч против раствора, состоящего из 0,05 МИаС, 0,01 М раствора трис, рН 7,9, 0,01 МЕДТА. Лизне клеток: фага проводят додеципсульфатом натрия. Депротеинизацию ДНКпроводят феиолом со смесью хлороформ -изоамиловый спирт (24:1), ДНК осаждаютспиртом.П р и м е р 1. 13 г биомассы еуспен.днруют в 45 мл 0,01 М трис-буфере, рН 7,9 -8613 Формула изобретения Составитель С. МалютинаТехред А, Ач Корректор Е. Рашко Редактор Г, Бельская РЗаказ 6456/7 Тираж 528ВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5 Подписное Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул, Проектная, 4 Очистку фага проводят в 33 мл градиентаСвС (д 1,4; д 1,5; О 1,3), Осадок центрифугируют.Полученную массу фага диализируют 2 раза. по часу против 2 л буфера, содержащего0,05 М йаС 1, 0,01 М трис, рН 7,9, 0,01 МЕДТА - йа. К массе фага прибавляют 3,5 мл10%.ного додецилсульфата натрия. Раствор нагревают до 48 С.Для удаления белка к раствору, содержащему 10фаговый ДНК, прибавляют. фенол. Осадокцентрифугируют, Операцию повторяют, к центрифугату прибавляют равный объем смесихлороформ-изоамиловый спирт (24:1). Осадокцентрифугируют. К раствору прибавляют 52 объема этилового спирта,Выход 0,4 мг лямбда ДНК/1 г биомассы.Качество: Д 260/Д 280 1,8.П р и м е р 2, 10 г биомассы суспендируют в 45 мл 0,01 М трис-буфере, рН 7,9 - 8,0,добавляют 4,5 мл хлороформа, выдерживают20 мин при 37 С, потом охлаждают до 4 С,Центрифутируют 15 мин. при 15000 об/мин.Очистку фага проводят в 33 мл градиентаСвС (д 1,4; д 1,5; д 1,3), Осадок центрифу- д 5гируют,Полученную массу фага диализируют 2 разапо часу против 2 л буфера, содержащего0,05 М йаС 1, 0,01 М трис, рН 7,9, 0,01 МЕДТА-йа.К массе фага прибавляют 3,5 мл 10 о.ногододецилсульфата натрия. Раствор нагреваютдо 48 С.Для удаления белка к раствору, содержащему фаговый 11 НК, прибавляют фенол, Осадокцентрифугируют. Операцию повторяют, К центри- З 5 99 4фугату прибавляют равный объем смеси хлороформ.изомиловый спирт (24:1), Осадок центрифугируют. К раствору прибавляют 2 объема этилового спирта.Выход 04 мг лямбда ДНК/1 г биомассы, Качество: Д 260/Д 2801,8.Предложенный способ позволяет увеличить выход ДНК на 20% и сократить длительность процесса до 9 ч по сравнению с известным (40 ч). Ожидаемый экономический эффект 200000 руб/на 1 кг ДНК. Способ получения ДНК из биомассы ЕвсЬегсЬа со путем обработки ее хлороформом споследующим удалением осадка, выделенияиз супернатанта фагов в градиенте концентрацийхлористого цезия, освобождения из них ДНКи очистки целевого продукта, о т л и ч а юш и й с я тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта и ускорения способа,фаги после выделения очищают диализом противтрис-буфера, содержащего 0,05 М йаС и 0,01 МЕДТА, при рН 7,9, освобождение ДНК проводят додецилсульфатом, а очистку осуществляютфенолом и смесью хлороформа с амиловымспиртом, взятых в соотношении 24:1,Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. М,ТЬоаав апд В. В, Оачев. Ятцдев оптпе свачаде о 1 ЬастегорЬаде агпЬда ОччаччИЬ Е, сот Йевтгстоп Епсопцсеаве 6. Мд,Во. 1975, ч. 91, р. 315 - 328,