Способ определения днк в клетках на цитологическом препарате

ОПИСАНИЕ.ИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик(22) Заявлено 040181 (21) 3232839/28-13с присоединением заявки М 2(23) Приоритет. -Опубликовано 23.02,83, Бюллетень йо 7 РЦМК з 6 01 0 1/28 А 61 В 10/00 Государственный комитет СССР но делам изобретений и открытий(088. 8,) Дата опубликования описания 230283 Серов, С,И. Иржанов и В.Н,(72) Авторыизобретения Ленинградский городской онкологическийисследовательский институт онкологии им 1) Заявител 54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДНК В КЛ ПРЕПАРАТЕКАХ ИТОЛОГИЧЕСКО о е разом.Соскоб готовя ности парафинов редварительно с инструментом, лу скальпелем. Длянапример с поверго тканевого блока, оченным в ксилоле ше всего глазным даления парафина ток и комп- считать ическими,скоба часть Изобретение относится к медицине и касается приготовления цитологических препаратов изолированных клеток из соскобов тканевых блоков.Известен способ определения ДНК в клетках на цитологическом препара.те включающий их фиксацию, заключение в,парафин и окрашивание реактивом фельгена 11.Однако известный способ не позволяет точно определить. ДНК в клетках.Цель изобретения - повышение точи сти способа при использовании длит льно хранящегося материала.Эта цель достигается тем, что.при осуществлении способа определения ДНК в клетках на цитологическом препарате, включающего их фиксацию, заключение в параФин и окрашивание реактивом фельгана, из парафиновых бло" ков готовят соскобы клеток, далее их депарафннируют, центрифугируюти готовят мазки из клеточной массы.Способ осуществляют следующим об. -материал соскоба помещают в пробиркус ксилолом .(три порции), где интенсивно размешивают тонкой стекляннойили металлической палочкой. Послеосаждения материала соскоба тонкойпипеткой осторожно отсасывают ксилоли добавляют абсолютный спирт, вновьвзбалтывают и так последовательнопроводят через 96, 70 Р спирты идистиллированную воду. Ксилол, спир.ты и воду добавляют в количестве,превем осадок тканевого соскобав "три раза. Иэ последней манипуляции с дистилированной водой водуудаляют не Всю, а часть ее оставляютна изготовление мазков иэ осадка,обработанного соскоба тканевых блоков.Подсушенные мазки окрашивают пофельгену (при необходимости другимиметодами ), заключают в бальзам ипокрывают покровными стеклами. В препаратах обнаруживаются в основномизолированные клетки, а иногда комплексы клеток или даже мелкие кусочкитканей.Наличие свободных кле лексов их дает основание. данные препараты цитологхотя при изготовлении со(20 случаев) 7,36 -0,20 Составитель С. МалютинаТехред А.Бабинец Корректор Ю. Макаренко Редактор В. Лазаренко Подписное Заказ 1143/65 Тираж 871ВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП фПатентф, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 клеток травмируется, остается достаточное количество их, чтобы судитьо структуре органа или ткани, а также для,количественного определениясодержания ДНК тех или иных компонентов в цятоплаэме и ядрах клеток.5Кроме того, данные препараты. можноподвергнуть гистохимическому, энзи-мохимическому и люминесцентному исследованиям,10П р и м е р 1. Больная Н., 56 лет,поступила в .клинику. Клинический диагноз: Киста правово яичника. По содержанию ДНК цитологического препарата,приготовленного предлагаемым .способом, диагноз должен быть как злока 15чественная цилиоэпителиальная кистомаяичника, Больная поступила в клиникучерез б месяцев с обширными метастазами опухоли в сальник н внутренниеорганы.20П р и м е р 2. Больная Б., 24 года,поступила в клинику, Клинический диагноз Пролиферирующая киста правогояичника. По содержанию ДНК цитологического препарата диагноз должен быть 25как злокачественная цилиоэпителиальная кистома яичника, Через 8,5 месяцев у больной обнаружен рецидив опухоли и несмотря на химиотерапию имелись обширные метастизированные опухо-.30ли.В обоих случаях по содержанию ДНКгистологических срезов имелись незначительные отклонения от доброкачественной опухоли, 35Была изучена группа больных из 20человек с доброкачественными кистамияичников и 20 человек со злокачестввнными кистами яичников, При выявлении ДНК (препараты получены предло женным способом) отмечено резкое увеличение содержания ДНК в группе созлокачественными кистами яичников посравнению с доброкачественными кистами,яичников статически достоверное. В таблице представлено содержание ДНК в доброкачественных и злокачественных кистах яичников в цитологических препаратах со злокачественнойопухолью(20 случаев) 16,61+ 0,61 Как видно из таблицы, предложеннымспособом удается более точно определить степень злокачественности серозных кист яичников.Предложенный способ позволяет повысить точность, а также использоватьархивный материал, проводить определение ДНК в самых различных тканяхи органах, полученных не только приоперациях, но и в эксперименте наживотных.формула изобретенияСпособ определения ДНК в клеткахна цитологическом препарате, включающий их фиксацию, заключение в.парафин и окрашивание реактивом фельгена,о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, сцелью поведения точности способа прииспользовании длительно хранящегосяматериала, из парафиновых блоков готовят соскобы клеток, далее их депарафинируют, центрифугируют и готовятмазки из клеточной массы.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Меркулов Г.Л, Курс патогистологической техники. М., Медицина,1969, с. 73.