C12N 15/15 — ингибиторы протеаз, например антитромбин, антитрипсин, гирудин

Номер патента: 1630616

Опубликовано: 23.02.1991

Авторы: Альберт, Бернд

МПК: C12N 15/15

Метки: десульфатогирудина

...гена, обозначен как рМЬ 3101 11, Слияние РН 05 сигнальной последовательности десульфатогирудинового структурного гена.а) Выделение десульфатогирудинового фрагмента. 12 мкг ДНК-плаэмиды рЬ 310 Ь исчерпывающе расщепляют эндонуклеазами БашН 1 и Руи 1, После экстракции ДНК два укаэанных ограничительных фрагмента отделяют. в 1,27. - ном агарозном геле в трис-борат-ЕДТА буфере, рН 8,3, Из геля выделяют Руц 1- ВашН 1-фрагмент размером 0,84 п,о, ДНК элюируют;-Руц-ВашН 1-фрагмент рМ 131 01, дополнительно расщепляют с помощью эндонуклеаэы Няа 1. В результате расщепления образовывается Няа 1-ВашН 1-фраг" мент размером 198 п.о., который содержит полную кодирующую последовательность для зрелого десульфатогирудина. Дополнительное расщепление...

Номер патента: 1687032

Опубликовано: 23.10.1991

Авторы: Жерар, Ив, Майкл, Эрик

МПК: C12N 15/15

Метки: гирудина, мутеинов

...В течение 2 мин проводят преинкубацию для тромбина и гирудина, потом реакцию запускают в ход с счбстоатом,В табл, 1 приведены величины, определенного экспериментально, количества гирудина, необходимого для ингибирования95 такого же. количества человеческого 10тромбина (5,5 10 9 М).Таким образом, ясно, что требуется примерно в четыре 7 оаза меньше гирудина Г 2 - .арг и Г 2 - лиз, чтобы ингибировать то же47 4количество человеческого тромбина, в сравнении с гирудином Г 2,Следовательно, предлагаемые варианты обладают значительно улучшенными ингибирующими свойствами по отношению ктромбину. 20П р и м е р 5, Фармакологическое изучение двух вариантов гитоудина - рекомбинантных Г 2 и Г 2 - Лиз в сравнении со4стандартным гепарином.Цель изучения,...

Номер патента: 1774950

Опубликовано: 07.11.1992

Авторы: Жан-Пьер, Жерар, Ив, Поль

МПК: C12N 15/15, C12N 15/81

Метки: cerevisiae, sасснаrомyсеs, гирудина, дрожжей, полипептида, предшественник, свойствами, штаммы, экспрессирующие

...р и м е р 3. ДНК рТ 6897 служит длятрансформации дрожжей Т 6 Узр 4 (Маб,цга 3-251-373-328, Ьз,-15) в цга+.Трансформированную колонию реплицируют и используют для посева не менее10 мл питательной среды и 0,5% казаминокислот. После 20 ч культивирования клеткиподвергают центрифугированию, надосадочную часть подвергают диализу дистиллированной водой и концентрируютвыпариванием (центрифу ирование в вакууме),Параллельно обрабатывают таким же"образом культуру Р 6 У 1 зр 4, трансформированную рТ 6886, и культуру Т 6 Узр 4, трансформированную плазмидой не несущейпослецовательность гирудина (Т 6 У 1 зр 4РТ 6856). Сухие остатки поглощают 50 мклводы и 20 мкл кипятят в присутствии 2,8%ЯОЯ и 100 ммоль меркаптоэтанола, затемпомещают на гель...

Номер патента: 1776276

Опубликовано: 15.11.1992

Авторы: Алэн, Жерар, Ив, Натали

МПК: C12N 15/15

Метки: гирудина, полипептида, свойствами

...действии ДНК лигазы фага Т 4. Плазмида рТ 6883 имеет только один сайт Вце 11, расположенный выше промотора гена феромона. Плазмиду рТ 6883 (20 мг) обрабатывают Вд 1, потом подвергают гидролизу нуклеазой Ва 131 (1,4 единицы, 10 минут). Обработанную таким образом ДНК очищают последовательными экстракциями фенолом и хлороформом - изоамиловым спиртом, за.тем фракцию 5 мг) подвергают действию полимеразы Кленова, чтобы получить максимальное количество свободных концов. Обработанную таким образом ДНК лигируют с нефосфорилированными линкерами ВавН 1 /5,С 66 АТССС 6/ в присутствии лигазы фага Т 4. После трансформации Е.со 1106 и селекции на устойчивость к ампициллину выделяют плэзмиду рТ 6892, делецированную в области 5, располагающейся сбоку...

Номер патента: 1838411

Опубликовано: 30.08.1993

Авторы: Бриан, Брус

МПК: C12N 15/09, C12N 15/15, C12P 21/02 ...

Метки: белка, днк, зимогенной, плазмидной, рекомбинантной, формы, человека

...типичных эукариотических клеток, включая клетки линии АУ 12, и к векторам экспрессиинастоящего изобретения,30 Клетки 293 были получены из АТСС (подномером СР 1573) в 25-мм -колбе, содер 2жащей сплошной монослой около 5,5 х 10клеток в минимальной поддерживающейсреде Игла (ОЬсо) с 10; термо-инактивиро 35 ванной лошадиной сывороткой, Колбу инкубировали при 37 С, а среду меняли два разав неделю. Среда состояла из ОМЕМ (ОЬсо),дополненной 10 оь околоплодной сывороткой,.теленка, 50 мкг/мл гентамициа, и 1040 мкг/мл витамина К 1, фитонадиона АкваМефитон В Мегс: ЯЬагр В ОоЬпе, Мегс В СоЗлс., ЧЧезт Ропс, РА, 19486). Клетки суб культивировали путем удаления среды, промывания сбалансированным голевым45 раствором Хэнкса (ОЬсо), добавления в течение...