C12N 5/00 — Недифференцированные клетки человека, животных или растений, например, клеточные линии; ткани; культивирование или сохранение их; питательные среды для них
Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus мusсulus, используемый для получения моноклональных антител к гемагглютинину вируса гриппа а краснодар 10159(н n )
Номер патента: 1446156
Опубликовано: 23.12.1988
Авторы: Агеева, Анджапаридзе, Кузнецова, Кусельтан, Нагиева, Никулина, Эткинд
МПК: C12N 5/00
Метки: 10159(н, антител, вируса, гемагглютинину, гибридных, гриппа, животных, используемый, клеток, краснодар, культивируемых, мusсulus, моноклональных, штамм
...с помощью твердофазного варианта иммуноферментного анализа (ИФА), Антигены вирусов гриппа А для ИФА готовят путем инфицирования клеток почки собак (линия МДСК). В качестве контрольного антигена служат аналогичным образом приготовленные неинфицирован ные клетки МДСК. Антителопродуцирую" щие клоны гибридных клеток выращивают в пластиковых Флаконах площадью20 31446125 см со слоем - кормилкой из спленоцитов и после накопления клеток вдостаточном количестве (сплошное покрытие ростовой поверхности Флакона)проводят оценку МКА в культуральныхжидкостях (кж) на активность и специ-фичность. По данным проведенного исследования осуществляют выбор клоновдля их накопления в массовой культуре и криоконсервацииВ результате слияния получают коллекцию...
Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus мusсulus, используемый для получения моноклональных антител к мембранному белку еsснеriснiа coli в препарате рекомбинантного интерлейкина-2 человека
Номер патента: 1446157
Опубликовано: 23.12.1988
Авторы: Бундулис, Войтенок, Панютич, Скривелис, Циманис
МПК: C12N 5/00
Метки: антител, белку, гибридных, еsснеriснiа, животных, интерлейкина-2, используемый, клеток, культивируемых, мusсulus, мембранному, моноклональных, препарате, рекомбинантного, человека, штамм
...в препарате РИЛчеловека, Методы оценки сохранения специфичности: тест на связыва" ние МКА с иммобилизованным частично очищенным РИЛ(иммуноферментный анализ), Продукция МКА сохраняется как минимум до 10 пассажей 1 п чдС- то. В асцитной форме штамм не пассируется более одного раза,Контаминация. Бактерии и грибы в культуре не обнаружены при длительном наблюдении и посевах на питательные среды. Заражение микоплаэмой не выявлено по характеру включения тимидиновой метки.. Криоконсервирование. Для длительного хранения клетки штамма замораживают в эмбриональной телячьей сыворотке с добавлением 10 диметилсульфоксида, Режим замораживания;1 С в 1 мин до -70 С, После замораживания клетки переносят в жидкий . азот, Размораживание - на водяной...
Штамм гибридных культивируемых клеток животных мus мusсulus, используемый для получения моноклональных антител к j g человека и высших обезьян
Номер патента: 1454850
Опубликовано: 30.01.1989
Авторы: Воеводин, Зоделава, Клоц, Оганян, Размадзе
МПК: A61K 39/395, C12N 5/00
Метки: антител, высших, гибридных, животных, используемый, клеток, культивируемых, мusсulus, моноклональных, обезьян, человека, штамм
...около 10 мг/мл.Титры МКА при определении с помощьютвердофазного иммуноферментного метода: 210 (культуральная среда) и10 (асцит) при концентрации антигена 1 мкг/мл. Продукция МКА стабильна, по крайней мере, в течение 10пассажей п ч 1.го. Характеристика полезногопродукта;МКА относятся кклассу 1 яСд , они направлены противкласс-специФической детерминанты константного региона тяжелых цепей 18 Счеловека и высших обезьян; специфичность оценивается иммуноферментным,радиоиммунологическим и модифицированными иммунодиффузионными методами.МКА преципитируют 1 яС человека и высших обезьян в присутствии ПЭГ(реакция встречной и радиальной иммунодиффузии). Контаминация. Бактерии,грибы и микоплазмы отсутствуют. Родительская линия Х 63-Ая.8.653...
Штамм гибридных культивируемых клеток животных rаттus norvegicus, используемый для получения моноклональных антител к гликопротеиду базальных мембран ламинину
Номер патента: 1454851
Опубликовано: 30.01.1989
Авторы: Афанасьева, Литвинова, Любимов, Сенин, Трояновский
МПК: C12N 5/00
Метки: norvegicus, rаттus, антител, базальных, гибридных, гликопротеиду, животных, используемый, клеток, культивируемых, ламинину, мембран, моноклональных, штамм
...Положительная реакция проявляется присутствием на автографах двух меченых полос, соответствующих цепям ламииина 200 и 350-400 кД.Контаминация, Бактерии и грибы в культуре не обнаружены при длительном наблюдении и посевах на питательные среды.Криоконсервирование. Клетки штамма ресуспендируют в эмбриональной тельячей сыворотке, содержащей Одиметилсульфоксида, в концентрации 1-4 О кл. в 1 мл, разливают в стериль- . ные пластиковые ампулы при 4 С и эамораживают в жидком азоте по программе со .снижением температуры на 1 С/мин с последующим переносом в жидкий азот. Размораживание: 1 .мин при 37 фС;Клетки разводят в 5-10 млпол-. ной среды;центрифугируютпри комнатной температуре 5 мин при 000 об/мин, сливают среду; заливают 2 мл свежей...
Штамм культивируемых клеток крысы, используемый для получения гормона роста человека
Номер патента: 1454853
Опубликовано: 30.01.1989
Авторы: Прасолов, Рубцов, Серов, Скрябин, Чумаков
МПК: C12N 15/00, C12N 5/00
Метки: гормона, используемый, клеток, крысы, культивируемых, роста, человека, штамм
...клеток с 42 хромосомами (347) (2 п=42 для крысы) и 40 хромосомами ,32%). Дифференциальной окраски хромосом не проводят, маркерных хромосом не выявлено.Контроль штамма Ка-ЫН 14 на контаминацию. При обследовании клеток штамма на стерильность (наличие бактерий, грибов, микоплазм) были получены отрицательные результаты на уровнях 11, 20 и 3 пассажей.Устойчивость к антибиотикам, В результате генетической трансформации штамм приобрел устойчивость к антибиотику неомицинового ряда С 418 (до 500 мкг/мл ростовой среды).Продукция гормона роста человека штаммом ВСКК(П) 136 Д, Продукцию гормона роста человека клетками ВСКК(П) 136 Д тестируют методом радиоиммунопреципитации и .КТА с использованием кроличьей поликлональной сыворотки к 1 ъ".Н. Для...
Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus мusсulus, используемый для получения моноклональных антител к легумину бобовых
Номер патента: 1458384
Опубликовано: 15.02.1989
Авторы: Буларгина, Венгеров, Свешников, Северин, Фуралев
МПК: C12N 5/00
Метки: антител, бобовых, гибридных, животных, используемый, клеток, культивируемых, легумину, мusсulus, моноклональных, штамм
...жидкостей и ".1 О для асцитных жидкостей, концентрация моноклональных антител н культуре "100 мкг/мл, в асцитной жидкости -около 5-6 мг/мл.тамм продуцирует МКА в течение60 пассажей в культуре и 25 на животных,Характеристика полезного продукта,МКА относятся к классу Тдб, Ониспецифически реагируют с легумином(С-концевой частью субъединицы, локализованной на кислых полипептидахлегумина).Контаминация, Бактерии, грибы,дрожжи и микоплаэмы не обнаружены.Криоконсернирование.Культуральная среда с 30% эмбриональной сыворотки коровы и 10% диметилсульфоксида (криопротектор),ампулы с клетками охлаждают до -70 С 5 О 15 20 25 ЗО 35 40 45 50 со скоростью 1 град/мин, ампулы хранят при температуре жидкого азота, размораживание осуществляют,...
Штамм гибридных культивируемых клеток животных rаттus norvegicus, используемый для получения моноклональных антител к гликопротеиду базальных мембран энтактину
Номер патента: 1458385
Опубликовано: 15.02.1989
Авторы: Афанасьева, Литвинова, Любимов, Сенин
МПК: C12N 5/00
Метки: norvegicus, rаттus, антител, базальных, гибридных, гликопротеиду, животных, используемый, клеток, культивируемых, мембран, моноклональных, штамм, энтактину
...подвергают электрофорезу в градиентном полиак" риламидном геле (5-15%) в присутствии додецилсульфата натрия и высушенный гель подвергают авторадиографии. Положительная реакция проявляется присутствием на автографах меченой полосы 150 КД.Контаминация, Бактерии и грибы в культуре не обнаружены при длительном наблюдении и посевах на питательные среды.Криоконсервирование. Клетки штамма ресуспендируют в эмбриональной телячьей сыворотке, содержащей 10% диметилсульфоксида, в концентрации 1-,3 10 клеток в 1 мл, разливают вьстерильные пластиковые ампулы при 4 С и замораживают в жидком азоте по программе со снижением температуры на 1 С в минуту с последующим переносом в жидкий азот. Размораживание: 1 мин. при 37 С. Клетки разво" дят в 5-10...
Способ культивирования ткани пшеницы
Номер патента: 1458386
Опубликовано: 15.02.1989
Авторы: Гапоненко, Охрименко, Созинов
МПК: C12N 5/00
Метки: культивирования, пшеницы, ткани
...в теплице в 1 я сосудах с почвой, В момент цветения колоса каждое растение отмечают этикеткой с указанием даты :цветения. Через 5 дней после цветения в теплице проводят .обработку колосьев водным 20 раствором ПАБК, При этом ПАБК кон-. центрацией 0,17 вводят в стебель пшеницы под колос шприцем в дозе 1 л, т.е. в растение вводят 10 г ПАБК, Через 9 дней после цветения колосья 25 срезают, отделяют зерновки, стерили,зуют в ламинаре 70%-ным этанолом в ;течение 7 мин. После этого стерили,зованные эерновки трижды промывают стерильной дистиллированной водой. ЗО Затем из них стерильными препаровальными иглами вычленяют зародьппи и сажают щитком вверх на среду Линсмайер и Скуг с добавкой 2,4 0 в количестве 2 мг/л.35Через 35-40 дней выросший...
Штамм культивируемых клеток почки sаigататаriса, для вирусологических исследований
Номер патента: 1463756
Опубликовано: 07.03.1989
Авторы: Демченко, Кекух, Кирюхина, Стусь
МПК: C12N 5/00
Метки: sаigататаriса, вирусологических, исследований, клеток, культивируемых, почки, штамм
...активности приходится на 3-и сутки культивирования и составляет 40-457,.При посевной дозе клеток 10 /мл сплошной монослой Формируется в матрасах, флаконах и пробирках на 2- 3-и сутки культивирования.формирование клеточного монослоя возможно и при пересеве 1:6,1:8, при этом монослой образуется на 5-7-е сутки культивирования.Клетки снимают со стекла 0,02 Е- ным раствором версена, подогретого до 37 (25 ч.), с добавлением 0,257 трипсина (1 ч,). При этом предварительно старую питательную среду удаляют, клеточный монослой промывают раствором Хенкса и в сосуд добавляют версен с трипсином в укаэанномсоотношении, Сосуды оставляют в тер-; мостате при 37 С на 5-10 мин, После разобщения клеток монослоя (наблюдение ведут визуально или с помощью...
Способ получения изолированных клеток печени
Номер патента: 1463757
Опубликовано: 07.03.1989
Авторы: Андриенко, Кравченко, Петренко, Семенченко, Сукач
МПК: C12N 5/00
Метки: изолированных, клеток, печени
...(в суспензии).Результаты опытов по определению выхода гепатоцитов (п = 10) приведены в табл. 1. 30Данные, представленные в табл. 1, свидетельствуют о том, что предлагае.мый способ позволяет получить жизнеспособные клетки печени,:которые не теряют своей Функциональной активнос 35 ,ти и после культивирования в суспензии в среде 199.Клетки, получаемые по известному способу, прокрашиваются трипановым синим на начальных этапах культивирования.В табл. 2 представлены биохимические показатели Функциональной полноценности клеток (и = 10), полученных по известному и по предлагаемому способам.Из табл. 2 видно, что уже на этапе вьщеления клетки характеризуются высоким эндогенным дыханием (в 5,2 раза превышает данные известного спо соба)Дыхание...
Способ получения субкультуры клеток человека и животных
Номер патента: 1470765
Опубликовано: 07.04.1989
Автор: Архипов
МПК: C12N 5/00
Метки: животных, клеток, субкультуры, человека
...которая такжепересевается в соотношении 1;6 в среду Игла +20 . эмбриональной сывороткикоровы. Окрашивание пробы этих клетоктрипановым синим показывает, что коли чество жизнеспособных клеток не превышает 80 , а время прикрепления их кподложке и распластывания более 12 ч.Дальнейшее пассиров ание контрольной и опытной субкультур известным ипредлагаемым способом (т.е. без использования ферментов) показывает,что после четвертого пересева эндотелиальные клетки в контрольной культуре резко снижают скорость роста и сре ди них появляются аномальные гигантские клети, тогда как в опытной культуре изменений клеток по этим характеристикам не происходит, После пятогопересева клетки в контрольной культу-, ЗОре полностью дегенерируют, тогда какопытная...
Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus мusсulus, используемый для получения моноклональных антител к липополисахариду еsснеriснiа coli
Номер патента: 1472497
Опубликовано: 15.04.1989
Авторы: Бундулис, Войтенок, Панютич, Скривелис, Циманис
МПК: C12N 5/00
Метки: антител, гибридных, еsснеriснiа, животных, используемый, клеток, культивируемых, липополисахариду, мusсulus, моноклональных, штамм
...клетки пассировали один раз в 2-3 дня, кратностьрассева - 1:б - 1:8. Культура суспенэионная,Культивирование в организме животных. Для выращивания асцита пригоднымыши Ва 1 в/с. Мышам эа 7-30 дней доинъекции клетокштамма вводят внутрибрюшинно по 0,5 мл пристана, Клетки инъецируют внутрибрюшинно по 2-5 х 10 клеток в 1 мл среды 1 МДМ. Асцит формируется через 12-14 дней.Продуктивность штамма.Секреция моноклонального антитела(МкАТ) на 2-3 день культивированиясоставляет 40-45 мкг в 1 мл культуральной среды и 15-20 мг в 1 мл асцитной жидкости при определении иммуноферментным методом.Характеристика полученного продукта. Штамм продуцирует моноклональноеантитело с изотипом 1 Ы. Специфичность - антиген Е.со 1 небелковойприроды,.содержащийся в...
Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus мusсulus, используемый для получения моноклональных антител к интерлейкину-2 человека
Номер патента: 1472498
Опубликовано: 15.04.1989
Авторы: Беляев, Казенных, Лунев, Несмеянов, Овчинников
МПК: C12N 5/00
Метки: антител, гибридных, животных, интерлейкину-2, используемый, клеток, культивируемых, мusсulus, моноклональных, человека, штамм
...по 0,5 мл пристана. Осцит образуется через 10-14 дней после введения 2-5 млн. клеток,Продуктивность штамма,Концентрация специфических иммуно.глобулинов в культуральной жидкостиболее 75 мкг/мл, в асцитной жидкости 5-10 мг/мл.Характеристика полученного продукта, Штамм продуцирует иммуноглобулин О субкласса 1, В твердофазномиммуноферментном анализе антителавзаимодействуют с препаратами 1 Ь 2из линии 1 г 1 аС и рекомбинантного1 Ь 2.Стабильность продуцирования ан тител сохраняется на протяжении 25пассажей в культуре.Криоконсервирование.Среда для замораживания - 90 . ЗТС,10 . ДМСО. Плотность клеток 1-510 ь кл/мл. Ампулы с клетками в пенопластовой коробке выдерживают прио-70 С в течение 1 дня и переносят вдюары с жидким азотом. Режим...
Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus мusсulus, используемый для получения моноклональных антител к интерлейкину-2 человека
Номер патента: 1472499
Опубликовано: 15.04.1989
Авторы: Беляев, Казенных, Лунев, Михалева, Несмеянов, Овчинников, Оноприенко, Циманис
МПК: C12N 5/00
Метки: антител, гибридных, животных, интерлейкину-2, используемый, клеток, культивируемых, мusсulus, моноклональных, человека, штамм
...и вносят в лунку по 100 мкл препарата, содержащего антитела, После инкубации в течение одного часа при 37 С плашки отмывают ФСБТ и обрабатывают раствором антител к иммуноглобулинам мыши, конъюгированных с пероксидазой хрена (100 мкл на лунку, разведение 1:1000, 15 1 ч 37 С). Плашку еще раз отмывают и вносят 100 мкл раствора ортб-фенилендиамина (1 мг/мл) в 1%-ном цитратном буфере (рН 4,5), содержащем 0,05 НО. Реакцию останавливают через 15 мин добавлением 100 мкл на лунку раствора 2 М серной кислоты, Отрицательным контролем служат лунки плашки, не содержащие 1 Ь 2, а также лунки, в которые вместо антител к 1 Ь 2 25 вносят нормальный иммуноглобулин мыши.П р и м е р 2. Получение и очистка моноклональных антител.Получение и очистка...
Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus мusсulus продуцент моноклональных антител к гемагглютинину вируса гриппа аленинград38580 (h3n2)
Номер патента: 1479510
Опубликовано: 15.05.1989
Авторы: Криворутченко, Кривошеин, Попов, Червонский
МПК: C12N 5/00, C12N 5/02
Метки: h3n2, аленинград38580, антител, вируса, гемагглютинину, гибридных, гриппа, животных, клеток, культивируемых, мusсulus, моноклональных, продуцент, штамм
...в качестве конкурирующего агентаИспользование штамма АН-РСКНЯ иллюстрируется следующими примерами.П р и м е р 1. Моноклональные антитела используют в иммуноферментном анализе, Для этого полихлорниниловые 96-луцочные платы покрывают препа 1ратом гемагглютинина вируса гриппа А(Ленинград)385/80 (НЗМ 2) или вирусными концентратами в забуференномфосфатами изотоническом растворе натрия хлорида (ЗФР) в концентрации30 мкг/мл по 50 мкл на лунку, Спустя8 ч, лунки промывают в трех сменахЗФР н течение 10 мин, В дальнейшемотмывают аналогично, Инкубируют вездепри комнатной температуре. Свободные валентности платы насыщают в течениеодного часа 17-ньгм раствором человеческого сывороточного альбумина в ЗФР, после чего лунки отмывают и добавляют...
Способ получения гибридомы, продуцирующей моноклональные антитела к реассортанту вируса гриппа
Номер патента: 1482943
Опубликовано: 30.05.1989
Авторы: Вакин, Варавикова, Зазимко, Созина
МПК: A61K 39/42, C12N 5/00
Метки: антитела, вируса, гибридомы, гриппа, моноклональные, продуцирующей, реассортанту
...в воздухе 5%.Через 7 дней инкубирования из се-,лективной среды исключают аминоптерин. Для этого находящуюся над слоемклеток среду отсасывают и замещаютна среду КРМ 1 1640, содержащую сыворотку эмбрионов коров глюкозу гипокУ5сантин и тимидин в указанных концентрациях. Еще через 7 дней находящуюся над слоем клеток среду вторично отсасывают и замещают на среду КРМ 1 1640, содержащую сыворотку эмбрионов и глюкозу в указанных концентрациях, исключая тем самым гипоксантин и тимидин. В этой среде культивирование продолжают в течение 2 мес. 55По мере образования клонов гибридом, занимающих не менее 1/4 поверхности лунки, часть культуральной жидкости отбирают и тестируют, производя при этом отбор позитивных клонов.,Тестирование проводят в РТГА с...
Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus мusсulus продуцент моноклональных антител к тяжелым -цепям иммуноглобулина человека
Номер патента: 1493668
Опубликовано: 15.07.1989
Авторы: Арсеньева, Богачева, Ибрагимов, Лабазина, Рохлин, Черепахин
МПК: C12N 5/00
Метки: антител, гибридных, животных, иммуноглобулина, клеток, культивируемых, мusсulus, моноклональных, продуцент, тяжелым, цепям, человека, штамм
...антигенов используют иммуноглобулины человека, иммобилиэованные на пластике (твердофазный радиоиммунный или иммуноферментный анализ).Иммунохимические свойства МАТ 9 С 11 В 8-1. Для получения препарата МАТ в количестве, необходимом для проведения всех иммунохимических исследований, гибридомные клетки штамма-продуцента помещают в пластиковый флакон площадью 25 кв. см,%2 х 10 клеток в 5 мл среды КРМ 1-1640 с 10/ эмбриональной телячьей сывороткой, 4 мМ глютамина, 100 мкг-мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина, 0,05 мМ меркаптоэтанола. Клетки куль" тивируют 2-3 дня при 37 С в атмосфере 5/-ного СО. Полученный супернаТаким образом, приведенные примеры четко демонстрируют абсолютную специфичность ИЛТ 9 С 11 В 8-1, относящегося к 18 С...
Способ получения растений-регенерантов озимой ржи
Номер патента: 1495372
Опубликовано: 23.07.1989
МПК: C12N 5/00
Метки: озимой, растений-регенерантов, ржи
...для обеззараживанияна 2 ч в О, 1%-ный раствор КМпО изатем на 5 мин в 70%-ный этанол, Молодые соцветия извлекают из побегов 10и делят на эксплантаты в стерильныхусловиях (в ламинар-боксе). Эксплан таты соцветий, помещенные на каллусогенную среду,. культивируют в темноте при 25"26 С в течение 30-40 дней. 15Полученную каллусогенную ткань пе"реносят на органогенную среду Мурасиге и Скуга,.модифицированную снижением сахарозы до 0,6%, добавлением1,5 мг/л кинетина и 0,05 мг/л индолил-уксусной кислоты для регенерации растений. Через 15-20 дней йа 4 инается появление растений.Аналогично выполняют остальныепримеры, различие состоит в концентрациях сахарозы, кинетике и ИУК.Результаты примеров, подтверждающих выбор оптимальной среды для получения...
Способ получения гаплоидов из микроспор злаков
Номер патента: 1495373
Опубликовано: 23.07.1989
Авторы: Игнатова, Лукьянюк, Махновская
МПК: A01H 1/04, C12N 5/00
Метки: гаплоидов, злаков, микроспор
...в которых появились зеленые регенеранты, переносят в колбы с жидкой питательной средой без гормонов и помещают в условия 10-часового дня и пониженной температуры, В дневные часы температура +12 С, ночью +9 С. Освещенностьо о2-2,5 тыс. люкс.Влияние растворимого крахмала (1 г/л) и яблочной кислоты (25 мг/л) на индукцию новообразований и зеленых регенерантов у тритикале и пшеницы 20 показано в табл, 1; влияние добавок растворимого крахмала (1 г/л), яблочной (25 мг/л) и гибберелловой (0,5 мг/л) кислот к регенерационной среде на выход зеленых растений три тикале и пшеницы - в табл.2; влияние короткого (10-часового) дня и пони- женной (9 С - ночью, 12 С - днем) температуры на выход зеленых растений в жидкой среде без гормонов - в 30 табл.З.На...
Штамм культивируемых клеток животных mus мusсulus продуцент ростстимулирующих факторов гибридом
Номер патента: 1495374
Опубликовано: 23.07.1989
Авторы: Арцыбашева, Березкина, Игнатова, Кожухарова, Плескач, Тарунина
МПК: C12N 5/00
Метки: гибридом, животных, клеток, культивируемых, мusсulus, продуцент, ростстимулирующих, факторов, штамм
...кондиционированные клетками ЬеЬг 1/1-БГ, сохраняют полную ростстимулирующую активность по крайней мере в течение 3 мес храненияОпри - 20 С. Признак продукции фактора стабильно воспроизводится в течение более чем 100 генераций, Рост- стимулирующие факторы обнаруживают в культуральной среде. Концентрация общего белка через 2-3 сут в кондиционированной среде составляет 2-, 5 мкг/мл.Ростстимулирующую активность определяют в тестах: стимуляция включения Н-тимидина в стационарной культуре минимально трансформированных клеток И 1 Н ЗТЗ; индукция клонирования минимально трансформированных клеток МВК в среде с агаром; стимуляция размножения массовых культур гибридомнык клеток в среде с пониженным содержанием сыворотки крови и увеличение...
Штамм культивируемых клеток гепатокарциномы человека, дефектный по тимидинкиназе для гибридизации и трансфекции
Номер патента: 1495375
Опубликовано: 23.07.1989
МПК: C12N 5/00, C12N 5/02
Метки: гепатокарциномы, гибридизации, дефектный, клеток, культивируемых, тимидинкиназе, трансфекции, человека, штамм
...жидкость отсасывают, оставляя не более 50 мкл. Осадок разбива-,4 О ют поколачиванием по дну центрифужной пробирки. К осадку сразу же добавляют 0,5 мл 50 .-ного раствора полиэтиленгликоля (ПЭГ) с мол. массой 1550 и осторожно ресуспендируют клет ки пипеткой. Клетки выдерживают 1 мин без перемешивания, затем раствор ПЭГ быстро разводят, добавляя 10 мл среды без сыворотки.Суспензию клеток распределяют в чашки Петри по 2 10 кл/см . Через 30 мин осторожно отсасывают культуральную жидкость и, добавляют ростовую среду, содержащую 32 сыворотки . эмбриона коровы. Клеткиинкубируют при 37 С в атмосфере 7,5% СО. Через 24 ч среду заменяют на новую, содер- жащую 10 сыворотки эмбриона коровы. Еще через 24 ч клетки снимают: расту- . 5щие в суспензии -...
Способ получения гаплоидного каллуса исчезающих видов кедра
Номер патента: 1497212
Опубликовано: 30.07.1989
Авторы: Кожемякин, Кузнецов, Ругузов, Склонная
МПК: C12N 5/00
Метки: видов, гаплоидного, исчезающих, каллуса, кедра
...пыпьцевых. зерен),2 Ото формирование каллуса подавляетсяпыльцевыми зернами, которые образуютпыльцевые трубки, формируют базальностебельковый комплекс и гаметы.Закрытые микростробилы стерилизуют и после помещения аномальных пыльцевых зерен на питательную средуполучают гаплоидный каллус.П р и м е р 1. Приготовление препаратов-мазков включает фиксацию иобезвоживание объекта, насьшение егорастворителями бальзама, приклеивание белком, окрашивание и заключениев бальзам, Для фиксации используютфиксатор Карнуа, состоящий из 6 чабсолютного (100 Х) или 967.-ного эта 35нала, 3 ч. хлороформа и 1 ч ледянойуксусной кислоты, Затем готовят белок для наклеивания объекта. Зрелуюпыльцу или содержимое пыльника фикси 40руют непосредственно на...
Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus мusсulus продуцент моноклональных антител к са м зависимой эндонуклеазе клеточных ядер лимфоцитов селезенки человека
Номер патента: 1497213
Опубликовано: 30.07.1989
Авторы: Волгин, Волгина, Вотрин, Певницкий, Ходарев
МПК: A61K 39/395, C12N 5/00
Метки: антител, гибридных, животных, зависимой, клеток, клеточных, культивируемых, лимфоцитов, мusсulus, моноклональных, продуцент, селезенки, человека, штамм, эндонуклеазе, ядер
...скота,Для выращивания штамма используютстеклянную или пластиковую посуду,Во Флакон объемом 25 см в 5 мл средывносят 2 10 -10 клеток РИ, Пассажи б1 раз в 3-4 дня той же дозой клеток.Кратность рассева 1:4.Культивирование в организме животного.Для выращивания опухоли из штаммапригодны мыши линии ВАЬВ/с. Свежиммьппам за 7-30 (оптимально 14) днейдо инъекции штамма вводят внутрибрюшинно 0 5 мл пристана, Штамм инъециЭ6руют внутрибрюшинно по 3,2 х 10 клеток на мышь в 1 мл среды Игла. Асцитическую жидкость собирают по мерепоявления (на 10-15 день). Из асциташтамм перевивают на свежих мышей по1-5 х 10 клеток на мышь, 4-6 пассажей, 14972136Продуктивность штамма,Секреция монАТ на 4-й день культивирования 10-20 мкг в 1 мл среды и1-2 мг в 1 мл...
Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus мusсulus продуцент моноклональных антител к са mg зависимой эндонуклеазе клеточных ядер лимфоцитов селезенки человека
Номер патента: 1497214
Опубликовано: 30.07.1989
Авторы: Волгин, Волгина, Вотрин, Певницкий, Ходарев
МПК: A61K 39/395, C12N 5/00
Метки: антител, гибридных, животных, зависимой, клеток, клеточных, культивируемых, лимфоцитов, мusсulus, моноклональных, продуцент, селезенки, человека, штамм, эндонуклеазе, ядер
...иммунизации - 13 позитивных клонов из 200 первичных культур, Бсе стабильные позитивные линииклонированы и заморожены в жидкомазоте. Клон РЯ клонирован еще 5 раз.Для наработки антител клон Ы культивируют в условиях хп ч 1 чо в видеасцитной жидкости в брюшной полостисингенных мышей,Штамм депонирован под номеромВСКК (П) Р 117 Д и характеризуетсяследующими признаками.Культуральные признаки,Стандартные условия культивирования, Среда для культивирования - среда Дульбеко с добавлением 107. телячьей эмбриональной сыворотки., 4 ммЬ-глутамина. 80 мкг/мл гентамицинаОУ37 С. 57. СО, 967. влажности. Допустимо использование среды Игла.с добавлением 157 сыворотки крупного рогатого скота.Для выращивания штамма используютстеклянную или пластиковую...
Способ получения жизнеспособных поздних бластоцист лошадей in viтrо
Номер патента: 1497215
Опубликовано: 30.07.1989
МПК: C12N 5/00
Метки: viтrо, бластоцист, жизнеспособных, лошадей, поздних
...что бластоцисты развиваются какйри 12-часовом, так ипри 24-часо-вом культивировании, причем рост является стабильным. Наилучшие результатыполучают при культивировании эмбрионов в среде 14, которая содержит4 мл желтка куриного яйца 2 мл ФБСДюльбекко и 4 мл стерилизованногокобыльего молока.Таким образом, устанавливают, чтовосьмисуточные лощадиные эмбрионы впериод 12-24 часового пребывания в 40культуральных средах, состоящих изсмеси желтка с кобыльим молокоми/или. Фосфатно-солевым буферным раствором Дюльбекко, продолжают интенсивно увеличиваться в размерах, 11 ри 45просмотре под микроскопом у большинства прокультивированных в этих средах зародышей не отмечают каких-либоотклонений от нормы. Клетки трофобласта и эмбриобласта четко...
Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus мusсulus, используемый для получения моноклональных антител к дифференцировочному антигену в-лимфоцитов человека
Номер патента: 1389284
Опубликовано: 30.07.1989
МПК: A61K 39/00, C12N 5/00
Метки: антигену, антител, в-лимфоцитов, гибридных, дифференцировочному, животных, используемый, клеток, культивируемых, мusсulus, моноклональных, человека, штамм
...отношением, базофильной цитоплазмойФ грубой структурой хроматина. 84 4Культурдльлые призндки. Среда культивирования - среда КРАПб 40 или МЕМв модиФикации Дальбекко с 102 эмбриональной телячьей сыворотки, мК,-глутамина, 100 мгк/мл гентамицина при37 С в атмосфере 57, СО , оптимум рН2 зб, 8-7, 5.При росте на пластике клетки образуют плотный монослой, К стеклу клетки прикрепляются слабо и в стеклянных Флаконах ра.стут как в монослое,так и в суспензии. Посевная доза клеток 100 тыс,кл/мл, клетки пассируютодин раз в 3-4 дня, кратность рассева 1:7.Культивирование в организме животпьгл. Для получения асцита пригоднылишь мыши ВЛ 1.В/с. Мышам за 7-30 днейдо инъекции клеток штамма вводят внутрибрюшинно по 0,5 мл пристана....
Способ культивирования клеток человека и животных
Номер патента: 1507790
Опубликовано: 15.09.1989
Авторы: Бородина, Зеленин, Федорова
МПК: C12N 5/00
Метки: животных, клеток, культивирования, человека
...с сывороткой молока в качестве ростового фактора отмечают увеличение доли клеток, находящихся в Фазе С,+М, по сравнению с клетками, растущими в среде с сывороткой крови.ДНК-гистограмма культуры клеток миеломы, растущих н среде с сынороткой молока, существенно не отличается от гистограмм культур, растущих в среде с сывороткой крови в течение 9 сут инкубации. В более поздние сроки инкубации отмечают некоторое снижение доли клеток, находящихся в Фазах Б и С, +М клеточного цикла, и . увеличение - и фазе САвторадиографические исследованияаДля оценки пролифератинной активности и интенсивности синтеза ДНК- клеток культур, растущих в среде с сывороткой молока, проводят авторадиографическое исследование, С этой целью проводят импульсную (1 ч,...
Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus мusсulus продуцент моноклонального антитела к фактору некроза опухолей-альфа человека
Номер патента: 1507791
Опубликовано: 15.09.1989
Авторы: Войтенок, Добрынин, Коробко, Недоспасов, Панютич, Турецкая, Чувпило, Шахов, Шингарова
МПК: A61K 39/395, C12N 5/00
Метки: антитела, гибридных, животных, клеток, культивируемых, мusсulus, моноклонального, некроза, опухолей-альфа, продуцент, фактору, человека, штамм
...Для длительного хранения клетки штамма замораживаат в эмбриональной телячьей сыворотке с добавлением 10% диметилсульфоксида. Режим замораживания: 1 С/мин до -70 С. После замораживания клетки переносят в жидкий азот. Размораживание на водяоной бане при 37 С. Жизнеспособность клеток после размораживания 55-60% по окрашиванию трипановым синим.Контаминация, Бактерии и грибы в культуре. не обнаружены при длительном наблюдении и посевах на питательные среды. Заражение микоплазмой не выявлено при окрашивании красителями на ДНК и по характеру включения тимидиновой метки.П р и м е р 1, Тест на определение специфичности взаимодействия мои АТ с антигенами, иммобилизованными на пластине Р ФНО-с, Р ФНО- и БСА. в количестве...
Способ культивирования ткани кукурузы
Номер патента: 1507792
Опубликовано: 15.09.1989
Авторы: Моргун, Труханов, Чеченева
МПК: C12N 5/00
Метки: кукурузы, культивирования, ткани
...стерилизуют лабораторным детер.ентом, трижды промывают стерильной 25одой. Вычленяют из зерновок незрелыезародыши, удаляют эндосперм. ДалееНезрелые зародьппи переносят на тверю культуральную среду и размещаюттком вверх. Каллус инициируют исохраняют на модифицирОванной средеС, содержащей неорганические компо- . Общая величина каллусообраэованияненты по Мурасиге и Скугу, витаминыи аминокислоты по Штраусу, 20 г/лсахарозы, 8 г/л агара. Индукция каллу сообразования достигается при использовании в качестве стимулятора ростагербицида 2,4 Д в концентрации0,25 мг/л. Через 28 дней культивирования проводят учет,. Данные представ-щлены в табл.1. Каллусообразованиеотсутствует, наблюдается лишь прорастание зародьппей,П р и м е р 2. Условия...
Способ количественного определения микроорганизмов в тканях
Номер патента: 1507795
Опубликовано: 15.09.1989
Авторы: Бровко, Вартанян, Гостищев, Рябов, Титов, Толстых, Угарова
МПК: C12N 5/00, C12Q 1/04
Метки: количественного, микроорганизмов, тканях
...концентрации АТФ, Для этогов прозрачную пробирку объемом 1,5 млпомещают 0,9 мл биолюминесцентногореагента на основе иммобилизованнойлюциферазы светляков. Регистрируютфоновое свечение. реагента (1,), затем вводят 0,1 мл образца, полученного,;,как описано выше. и регистрируют свечение образца (1), Затем в ту же30 10 30-100 3 10 0-160 04-3 105 05-3 10 ь 60-250 40 250-400 400-630 10-33 10-3 108 Составитель Г.Смирноваедактор М,Петрова Техред М.Моргентал Корректор Н.Борисова 6/29 ираж 501 Зака Подписноекрытиям прид. 45 ВНИИ КНТ ССС сударственного комитета по изобретениям и 113035, Москва, Ж, Раушская наб Гагарина,Проиэво нно-издательскии комбина тентг,ужгоро 3 1507795 пробирку вводят 0,01 мл 10-микромолярного раствора АТФ и...