Способ получения растений-регенерантов озимой ржи

(71) . Науч тут сельс ка им. Н (72) Е.А (5 следовательскхозяйства Севницкогои Т.В,Худяк3 (088.8),М., Киссельридиэация ячка, 1986, т,ии инст еро-Ьос но-икогоВ,РудРоди085.ков 3) 578 6) Сур жродов Н.И,меня и и ХХ 11, Р я г енет ни 3,модифиы до 0,6етина икислоты иге и Скуга нием сахароз 5-2 мг/л ки -3-уксусной зуют среду Мура цированную сниж и добавлением 1 0,5 мг/л индолил ся к биотехноелекции зернои может быть Из бретение относ в частности к аковых культур зовано для уск вых. огни,ых зл нного создапол я вели- тений ения является фертильных р эксплантата о вия стерилизующихью изобретколичестваохранениещего дейст ве режда агент Спчае раз куль цию калпри этом ы исполь усо лусов в кач ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯПРИ ГКНТ СССР в.соб состоит в том, что вклюсебя стерилизацию в этанэле, ание соцветий на эксплантаты, вирование эксплантатов на кал иной среде и регенерана органогенной среде, стве органогенной сред.(5;) Изобретение относитея к биотехнологии. в частности к селекции зерновых злакокультур, и может быть использовано для ускоренного созданияновых сортов. Целью изобретения является увеличение количества фертильных растений-регенерантов. Способсостоит в там, что культивированиеосуществляется в два этапа; получают каллус на каллусогенной среде ирегенеранты на органогенной среде.Используется среда Мурасиге-Скуга,причем в органогенной среде содержание сахарозы снижено до 0,6 Х идобавлено 0,05 мг/л ИУК и 1,5-2 мг/лкинетина, 1 з.п. ф-лы, 2 табл.(ИУК)Причем, с целью предохранения тканей соцветий от повреждающего действия стерилизующих агентов, стерилизу" ют не молодое соцветие а побегзаключающий в себе, с последующим извлечением молодого соцветия в асептических условиях.Стерилизация молодых соцветий в 703-ном этаноле не обеспечивает полного обеззараживания и зачастую при,водит к отмиранию поврежденных спиртом тканей.-Вонга звестн 3 14953П р и м е р 1. У отобранных растений озимой ржи (сорт Дымка) отрезают побеги, содержащие молодые соцветия длиной 2,5-3,5 см, и проводятих стерилизацию. Побеги моют мыльной .водой, помещают для обеззараживанияна 2 ч в О, 1%-ный раствор КМпО изатем на 5 мин в 70%-ный этанол, Молодые соцветия извлекают из побегов 10и делят на эксплантаты в стерильныхусловиях (в ламинар-боксе). Эксплан таты соцветий, помещенные на каллусогенную среду,. культивируют в темноте при 25"26 С в течение 30-40 дней. 15Полученную каллусогенную ткань пе"реносят на органогенную среду Мурасиге и Скуга,.модифицированную снижением сахарозы до 0,6%, добавлением1,5 мг/л кинетина и 0,05 мг/л индолил-уксусной кислоты для регенерации растений. Через 15-20 дней йа 4 инается появление растений.Аналогично выполняют остальныепримеры, различие состоит в концентрациях сахарозы, кинетике и ИУК.Результаты примеров, подтверждающих выбор оптимальной среды для получения регенерантов ржи, сведены втабл.1 и 2. 30Как видно из табл.1 и 2, фертильные растения-регенеранты получены насреде Мурасиге и Скуга, модифицированной снижением сахарозы до 0,6%,добавлением 1,5-2 мг/л кинетина и0,05 мг/л индолил-уксусной кислоты. На контрольной среде Чу-Вонгарастения не образовались,Использование предлагаемого способа регенерации зерновых злаковых Щ 0 культур п Сго обеспечивает, посравнению с прототипом, получениебольшого количества фертильных растений регенерантов озимой ржи (выходрегенерантов из каллусов составляет24,6-30,3%), снижение затрат за счетуменьшения количества сахарозы наприготовление питательных сред, сте-релизацию побега, заключающего в себе соцветие, исключает отмираниетканей молодого соцветия, что увеличивает выход каллусной ткани изэксплантатов. Формула и з о б р е т е н и я 1. Способ получения растений-регенерантов озимой ржи, включающий культивирование стерилизованных в этаноле эксплантатов, полученных иэ разрезанных соцветий на каллусогенной среде Мурасиге и Скуга, регенерацию иэ каллусов фертильных растений на Ьрганогенной среде Мурасиге и Скуга, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью увеличения количества фертильных растений-регенерантов, в органогенной среде снижают сахараэу до 0,6% и вносят в нее 1,5-2 мг/л ки. нетина и 0,05 мг/л индолил-уксусной кислоты.2. Способ по и. 1, о т л и ч а ю - щ и й с я тем, что, с целью предохранения эксплантата от повреждающего действия стерилизующих агентов, стерилизуют побег, заключающий в себе молодое соцветие, с последующим извлечением его в асептических ус1495372 Таблица 2 Среда Иурасиге и Скуга Высажено Получено растений каллусовозимой Сахароза, Кинетин ИУК, мг/л 7. мг/л лит,0,6 1 ф 4 0,05 7 0,6 2,1 0,05 19 0,049 0,049 0,051 0,6 1,5 20 0,6 2,0 16 2 0,6 0,6 2,0 0,05 23 Составитель В.ДемкинТехред М.Дидык Корректор М,Шароши Редактор Н.Гунько Заказ 4216/25 Тираж 500 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям нри ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,10