Способ получения гаплоидов из микроспор злаков

(57) ПОСОВ ПОЛУЧЕНИЯ ГПОР ЗЛАКОВзобретение относии и может быть исссового получения ся к биотеользованорастенийог м ультуры. П ток со ной дидхЪ усилива в ре среду н о крахмалГОСУДАРСТВЕННЫИ НОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМПРИ ПНТ СССР(71) Всесоюзный селеческий институт(56) Авторское свР 1028288, кл. А Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано длямассового получения растений-регенерантов в культуре пыльников, дляразмножения ценных генотипов злаков,а также для выяснения механизмовФизиолого-биохимического регулирования процессов органогенеза.Целью изобретения является увеличение выхода гаплоидов за счет болееполной реализации тотипотентности ипотенциальной кустистости,Способ охватывает все этапы пыльниковой культуры, начиная с посадкипыльников на питательную среду. Присутствие растворимого крахмала ияблочной кислоты как компонентов кле ждающих процесс вторичиации в первичной среде, укцию новообразований,ЯО 1495373 регенерантов в культуре пыльниковдля размножения ценных генотиповзлаков, Целью изобретения являетсяувеличение выхода гаплоидов за счетболее полной реализации тотипотентно"сти и потенциальной кустистости.Способ заключается в том, что на начальном этапе новообразования помещаются в условия длинного дня и повышенной температуры, а на заключительном этапе растения-регенерантыпомещаются в условия короткого дняи пониженной температуры, при этомв питательные среды вносятся растворимый крахмал, яблочная и гибберелловая кислоты, 3 табл. регенерирующих в дальнейшем зеленые растения. Гибберелловая кислота как индуктор амилазной активности, крахмал и яблочная кислота в среде для регенерации позволяют и на втором этапе увеличить количество зеленых регенерантов, Перенос новообразований с зелеными растеньицами в жидкую питательную среду в условиях короткого дня и пониженной температуры обеспечивает полноценное развитие всех начавших регенерировать зеленых растений и размножить каждое за счет реализации потенциальной кустистости на заключительном этапе пыльниковой р. В первичную питатель 1 л вносят 1 г раствории 25 г яблочной кисТаблица 1 Прбцентот Количество новообразований Количество высаженныкпыпьников, шт,Генотип Пер- Первичнаявичная среда 4.среда + крахмал ++ яблочнаякислота Пер- вичконтроляя контроля наясреда Праг.46 хТр,пшеничный гибрид 6-78 144 148 18 26 37 1200 АДЗ/5 хТр.105/83 130 18 133 35 1200 31495373 лоты, На эту среду высаживают пыль- . ники.Полученные в процессе культивирования последних, новообразования переносят на регенерационную среду, содержащую 1 г растворимого крахмала, 25 мг яблочной и 0,5 мг гибберелловой кислот в 1 л. Новообразования, в которых появились зеленые регенеранты, переносят в колбы с жидкой питательной средой без гормонов и помещают в условия 10-часового дня и пониженной температуры, В дневные часы температура +12 С, ночью +9 С. Освещенностьо о2-2,5 тыс. люкс.Влияние растворимого крахмала (1 г/л) и яблочной кислоты (25 мг/л) на индукцию новообразований и зеленых регенерантов у тритикале и пшеницы 20 показано в табл, 1; влияние добавок растворимого крахмала (1 г/л), яблочной (25 мг/л) и гибберелловой (0,5 мг/л) кислот к регенерационной среде на выход зеленых растений три тикале и пшеницы - в табл.2; влияние короткого (10-часового) дня и пони- женной (9 С - ночью, 12 С - днем) температуры на выход зеленых растений в жидкой среде без гормонов - в 30 табл.З.На регенерационной среде многие новообразования слабо или совсем не регенерируют зеленые растения. При внесении в эту среду крахмала, яблочной и гибберелловой кислот количество зеленых регенерантов заметно возрастает (табл,2), В зависимости от генотипа увеличение составляет 117-225% от контроля. На заключительном этапе пыпьниковой культуры часть начавших регенерировать зеленых растений слабо развивается и гибнет. При пересадкевсех зеленых растений на жидкую среду без гормонов и помещение их в условИя 10-часового дня и пониженной(9 С - ночью, 12 С - днем) температуры количество их резко возрастает(табл.3). Условия короткого дня ипониженной температуры обеспечиваютхорошее развитие каждого растения и,особенно, проявление у них потенциальной кустистости, В результате увеличение количества растений по сравнению с контролем составляет в зависимости от генотипа 533-785 Х. Формула изобретения Способ получения гаплоидов из микроспор злаков, включающий холодовую предобработку срезанных на одноядерной стадии микроспор колосьев, выч" ленение и помещение пыльников на первичную питательную среду, пересадку новообразований на питательную среду для регенерации в условиях длинного дня и повышенной температуры с пересадкой на заключительном этапе на. жидкую питательную среду, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода гаплоидов за счет более полной реализации тотипотентности и потенциальной кустистости, в питательные среды вносят растворимый крахмал в концентрации 1-2 г/л, яблочную кислоту в концентрации 20-50 мг/л и гибберелловую кислоту в концентрации 0,5-1 мг/л, при этом гаплоидные растения в жидкой среде на заключительном этапе помещают в условия короткого дня и пониженной температуры.Ф Количество зеленых Прорегенерантов центот1495373 Количество новообразований Процентот Количество высаженныхпып ников, шт. Генотип Количество зеленых Процентот регенерантов Первичная Пер- вичконт -роля контроля ная среда среда кислота Тр.1137/Процентот Количество выГенотип саженныхновообСредадля регенерации Среда длярегенерации +крахмал + яблочная ++ гиббеконтроля разований релловая кислоты Тритикале213/5-80 хЛяскоеТр.137/1495373 8 Та блица 3 Количество растений Генотип контроля 134 744 1 О 18 Лан Составитель В.ДемкинРедактор Н.Гунько Техред М.дидык Корректор М,Иароши Заказ 4216/25 Тираж 500 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раущская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул, Гагарина,101 Тр,47/82 хТр,1137/82Тр,213/5 хх Ляско Количество высаженныхновообразований 10 20 О 5 26 С (16 часовойдень) 12 29 13 6