Способ количественного определения микроорганизмов в тканях

(504 С ОЧИТЕТОТНРЫТИЯМ ГОСУДАРСТВЕННЫПО ИЗОБРЕТЕНИЯПРИ ГКНТ СССР АНИЕ ИЗОБРЕТЕИОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ОП АВТОРС ретени кробио ится к медицин- может быть исостике гнойных и ги ко оль н диаий,тени раневых инфекЦель изобрба- ускорен п ту(56) Авторское свидетельство СССРР 1041568, кл. С 12 Я 1/04, 1982.(54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ В ТКАНЯХ(57) Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть исползовано при диагностике гнойных и ране П р и м е р 1. Образец ткани ом 1 г переносят в стерильную ку, размельчают стерильными ножницами, добавляют 9 мл стерильного физио логического раствора 0,5 г толченого стекла, тщательно растирают пестиком и переносят гомогенат ткани в стерильную пробирку, Гомогенаг ткани, содержащий 10 микробных клеток в 1 помЕщают в воздушный термостат с тем пературой 37 С и выдерживают 5 ч. Отбирают пробу объемом 1 мл и добаввых инфекций. Цель изобретения - ускорение способа. Дпя определения концентрации микроорганизмов исследуемый образец ткани гомогенизируют вфизиологическом растворе, инкубируютв воздушном термостате. Затем гомогенат последовательно обрабатывают смесью растворов тритона Хв концентрации 0,05-0,083 и периодата натрия в концентрации 1-5 мМ на объемгомогената и диметилсульфоксидом йриобъемном соотношении 1;4-9, Далее вгомогенате биолюминесцентнйм методомопределяют концентрацию АТФ, на основании которой выносят суждение околичестве микроорганизмов в анализируемом образце ткани. 1 табл,ляют 0,01 мл 100 мМ раствора периодатанатрия в 57-. ном тритоне Хдляполучения окончательных концентраций1 мМ и 0,05 Е соответственно, выдерживают при комнатной температуре 3 мин,Затем из полученной смеси отбираютпробу объемом 0,2 мл и добавляют к0,8 мл диметилсульфоксида (ДМСО). Полученный препарат используют для определения концентрации АТФ, Для этогов прозрачную пробирку объемом 1,5 млпомещают 0,9 мл биолюминесцентногореагента на основе иммобилизованнойлюциферазы светляков. Регистрируютфоновое свечение. реагента (1,), затем вводят 0,1 мл образца, полученного,;,как описано выше. и регистрируют свечение образца (1), Затем в ту же30 10 30-100 3 10 0-160 04-3 105 05-3 10 ь 60-250 40 250-400 400-630 10-33 10-3 108 Составитель Г.Смирноваедактор М,Петрова Техред М.Моргентал Корректор Н.Борисова 6/29 ираж 501 Зака Подписноекрытиям прид. 45 ВНИИ КНТ ССС сударственного комитета по изобретениям и 113035, Москва, Ж, Раушская наб Гагарина,Проиэво нно-издательскии комбина тентг,ужгоро 3 1507795 пробирку вводят 0,01 мл 10-микромолярного раствора АТФ и регистрируютприращение интенсивности свечения (Тст)Концентрацию АТФ в образце рассчитывают по формуле:5000 (1 оброн)АТФ 3 нМ - ,11 ст П р и м е р 2. Готовят суспенэии 10 ,микроорганизмов, наиболее часто встречающихся в медицинской практике (Ряецдошопая аег 8 хпояа, ЕясЬеггсЬ 1 а со 11, Ргогеця чц 1 яаггя, ВсарЬ 11 ососсця ацгеця 8. ерЫегйгя, К 1 еЬя 1 е 11 а, Еп ,гегоЬасгег, АспегоЬасгег, Р.ща 1 горЬд 11 а) в физиологическом растворе с3различной концентрацией (от 10 до 10 клеток в 1 мл). Приготовление стерильного образца ткани ведут сог ласно примеру 1, используя вместо физиологического раствора суспензию " микроорганизмов. Инкубацию (5 ч) и последующую обработку и измерение АТФ ведут по примеру 1, В таблице приве дена зависимость концентрации АТФ от содержания микроорганизмов в образце. Данные, приведенные в таблице, соответствуют прямолинейной зависимости с коэффициентом корреляции 0,93.Таким образом, предлагаемый способ позволяет в 5-10 раз сократить время анализа, упростить процесс, исключив три наиболее трудоемких операции на стадии культивирования, увеличить точность за счет создания специфической среды роста. Способ обладает высокой надежностью и экономичностью. Формула из обретений Способ количественного определения микроорганизмов в тканях путемгомогениэации исследуемого образца вфизиологическом растворе с последующим инкубированием и учетом результатов, о т л и ч а ю щ и й с я тем,что, с целью ускорения способа, послинкубирования гомогенат последовательно обрабатывают смесью растворов тритона Хв концентрации0,05-0,08% и периодата натрия в концентрации 1-5 мМ на объем гомогенатаи диметилсульфоксидом при объемномсоотношении 1:4-9, затем в гомогенатопределяют к личество АТФ биолюминесцентным мета ом и по ее величинеопределяют. концентрацию микроорганизмов в образце,