Патенты с меткой «еsснеriснiа»

Номер патента: 1744110

Опубликовано: 30.06.1992

Авторы: Грен, Дрейлиня, Козловская, Озолс, Платцер, Пумпен, Пушко, Розенталь, Сиаккоу, Соминская, Ульрих

МПК: C12N 1/21, C12N 15/33, C12N 15/70 ...

Метки: frblv, бактерий, бактериофага, белок, вируса, днк, еsснеriснiа, кодирующая, конструирования, крупного, лейкоза, оболочки, плазмидная, прод, рекомбинантная, рогатого, скота, слитый, штамм

...50 мМ трис-НС, рН 7,5; 10 мММдС 2, 10 мМ дитиотрейтол, 50 Ы АТР и 10ед, Т 4 ДНК-лигазы, в течение 12 ч при 4 С,Фрагмент инактивируют нагреванием при650 С в течение 15 мин, К реакционной смесидобавляют 100 мкл клеток Е,соИ ВВ 1, обработанных 100 мМ СаС 2 (конечная концентрация - 5 х 10 клеток/мл), длятрансформации клеток,Отбор клонов осуществляют путем экспресс - выделения ДНК и ее рестрикционного анализа, а также секвенирования.Плазмида с ожидаемой последовательностью получает наименование рГРВ Ч-Р 6,Конструирование рекомбинантнойплазмидной ДНК рЕРВ ЧзР 6,2 мкг плазмиды рРРВ Ч-Г 6, выделенной стандартным методом, расщепляют 3.ед, растриктазы Есо 781 и 3 ед, рестриктазыЗзр 1 в 25 мкл раствора А, содержащего100 мМ трис-НС, рН 7,5; 50 мМ...

Номер патента: 1744111

Опубликовано: 30.06.1992

Авторы: Епифанова, Ксензенко, Кулаков, Новикова, Носкова

МПК: C12N 15/33, C12N 15/70

Метки: rv7-ii, бактерий, выявления, днк, еsснеriснiа, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, ротавирусов, содержащая, фрагмент, фрагмента, человека, штамм

...мк КиН; АТФ и 1/10 объема поли-А-полимеразы (0,5 мкг,Степень аденилирования определяют по известной методике, Определяют время реакции, необходимое для присоединения 15 - 20 остатков АМФ. Полученный препарат экстрагируют фенолом и осаждают 2,5 объемами спирта.К препарату полиаденилированной РН К в буфере ТЕ добавляют 5 мкг олиго-ОТ 2-в денатурируют 3 мин при 100 С и охлаждают во льду. Синтез кДНК проводят в буфере, содержащем 50 мМ трис-НС 1, рН 8,3, 50 мМ КС 1, 10 мМ МдС 2, 10 мМ ДТТ, 4 мМ пирофосфата натрия, по 0,5 мМ б АТР, б СТР, б 6 ТР, б ТТР, 10 мк Ки Р АТР в объеме реакционной смеси 100 мкл. Добавляют 25 ед,обратной транскриптазы из вируса миелобластоза птиц и инкубируют 2 ч при 42 С,Цепи РНК удаляют щелочным гидролизом (0,25 М...

Номер патента: 1747481

Опубликовано: 15.07.1992

Авторы: Зинченко, Попов

МПК: A61K 39/108, C12N 1/20

Метки: адгезии, антигена, еsснеriснiа, питательная, среда, энтеропатогенных

...Таким образом проведено 10 пассажей. Результаты свидетельствуют о том, что 100% исследуемых колоний сохраняютмаксимальное выражение признака в течение 10 пересевав.П р и м е р 2. Для приготовления среды, содержащей 025 г Ка 2 СОз, 0,1 г иноэита и 0,1 г КС 1, стерильно смешивают 2,5 мл 10%ного раствора Ка 2 СОз 1 мл 10%-ного раствора инозита и 1 мл 10%-ного раствора КС 1.Затем обьем среды доводят расплавленным мясо-пептонным агаром до 100 мл, перемешивают и разливают по 20 мл на чашки Петри. Анализ пилеобраэовэния выполняется аналогично примеру 1, Результаты тестировэния пятидесяти колоний антиР-сывороткой показывают, что, используя среду предлагаемого состава, можно добиться 100% экспрессии признака на протяжении 10...

Номер патента: 1750690

Опубликовано: 30.07.1992

Авторы: Гнатенко, Сухарев

МПК: A61K 39/108

Метки: еsснеriснiа, конъюгированного, энтеротоксина

...в конъюгате определяют посредством суммирования возрастания количества белка (по Лаури), присутствующего в диализате сверх количества термолабильного энтеротоксина, первоначально добавленного в конъюгат. Для увеличения15069 Р 10 20 30 7иммуногенной активности полученногоконъюгата к нему добавляют раствор трисНС буфера, содержащего бычий сцвороточный альбумин из расчета 10 г/л, рН 8,0.Полученный конъюгат при необходимости концентрируют до 1/10 объема противПЭГ;Контроль стерильности и безвредностийолученного препарата осуществляют пообщепринятой методике.Иммуногенность препарата вместе садъювантом (раствор гидроокиси алюминия) проверяют на белых мышах массой 16г. Вакцинирующий материал вводят двукратно, подкожно в дозе 0,3 и 0,5 мл с...

Номер патента: 1751206

Опубликовано: 30.07.1992

Авторы: Булгакова, Попов

МПК: C12N 15/12

Метки: yersinia, бактерий, днк, еsснеriснiа, кодирующая, конструирования, плазмидная, продуцент, реsтis, рек, рекомбинантная, фибринолизин, фибринолизина, штамм

...и подсушивают, Осадок растворяют в буфере для лигировдния (0,066 М трис-НС 1, рН 7,5; 5 мМ МЫС 2, 5 мМ дитиотрейтола и 1 мМ АТФ) с добавлением ДНК лигэзы фага Т(5 ед). Лигировдние проводят 10-12 ч при 16 С.1751206В, Анализ рекомбиыантыых плазмид и форм (ЗДТА) лиэоцим, Обломки клетоквыделение клона, несущего рекомбинанг- осаждают. Супернэтант, содержащийагоную плаэмиду рЕК 4, вые частицы, используют для заражения.Полученную смесь ДНК испольэуютдля Культуру Е, соИ К 802 (110 кл/мл) сметрвнсформации клеток Е. соИ К 802. Транс шиваот с 0,1 мл фаголиэата и инкубируот 1формировайные клетки подраи 1 иваот 1 чэс ч при 28 С, полученную смесь разводятв бульоне СВ и высевают на агэризировэн-бульоном 1.В в 10 раз и 0,1 мл высевают наную среду 1,В с...

Номер патента: 1751208

Опубликовано: 30.07.1992

Авторы: Бреде, Грен, Дрейлиня, Козловская, Озолс, Платцер, Пумпен, Пушко, Розенталь, Сиаккоу, Соминская, Ульрих

МПК: C12N 15/33, C12N 15/70

Метки: pfrblv, бактерий, бактериофага, белка, белок, вируса, днк, еsснеriснiа, кодирующая, конструирования, крупного, лейкоза, обо, оболочки, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, рогатого, скота, штамм

...при фильтрыинкубируютсмоноклональны 65 С. После очистки ДНК В 9 И 1 - ВагпН фраг- ми анти- др 51 антителами глАК 14 в развемента на агарозном геле ДНК растворяют в дении 1:500 на буфере ТВЯ, содержащем20 мкл воды, Заполнейие концов проводят 55 50 мМ трис-НС 1, рН 7,5, 0,15 М МаС 1, 0,1%в 100 мкл раствора Б, содержащего 0,05 М тритон Х 100, 1% БСА, в течение 15 ч притрис-НС 1, рН 7,5, 0,01 М 9 С 12, 0,01 М дитиот С, После трехкратной отмывки буферомрейтол,0,025 М МаС 1, 100 мкМ сАТР, ОСТР, ТВЯ фильтры инкубируют 2 ч при 200 С снТТ 1- и ОСТР и 10 ед, ДНК-полимеразы Е. коньюгатом пероксидазы с антителами просоИ (фрагмент Кленова, в течение 1 ч при тив иммуноглобулинов мыши в разведении1:500. Фильтры отмывают буфером ТВЯ (3 - но. Иньекции...

Номер патента: 1751209

Опубликовано: 30.07.1992

Авторы: Берзин, Борисова, Грен, Дрейлиня, Лосева, Лэтч, Меринг, Озолс, Осе, Петцольд, Порстман, Пумпен, Розенталь, Ульрих, Цибиногин

МПК: C12N 15/33, C12N 15/51, C12N 15/70 ...

Метки: 24-5, бактерий, белка, белок, вируса, гепатита, днк, еsснеriснiа, иммунодефицита, кодирующая, кор-ант, кор-антигена, оболочки, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, слитого, слитый, человека, штамм

...клеток к реакци-онной смеси добавляют 100 мкл клеток Е.соП ЯВ 1, обработанных 0,1 М СаС 12 (конечная концентрация - 5 х 10 клеток/мл).9Отбор клоновосуществляют путем рестрикционного анализа плазмидной ДНК,выделенной экспресс-методом. Плаэмида сожидаембй рестрикционной картой получает наименование рНИ 24-5,2. Штамм-продуцент Е. соИ К 802 (рН24 - 5),Штамм-продуцейт получают трансформацией клеток Е. со 11 К 802 рекомбинантнойплазмидной рНИ 24-5, Клетки выращиваютдо оптической плотности ОП 65 о 4-5 в солевой среде М 9 с добавкой, г/л: каэаминовыекислоты 10; глюкоза 2; ампициллин. 0,02,Клетки собирают центрифугированием и лизируют в четырехкратном обьеме буфера,содержащего 0,05 М трис-НС 1, рН 8,0; 0,15М ИаС 1, 0,1% тритон Х 100,...

Номер патента: 1761805

Опубликовано: 15.09.1992

Авторы: Данилюк, Кравченко, Кьамынина, Сандахчиев, Синяков

МПК: C12N 1/21, C12N 15/26

Метки: pil-221, бактерий, днк, еsснеriснiа, интерлейкин-2, интерлейкина-2, кодирующая, конструирования, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, человеческий, человеческого, штамм

...ДНК-полимеразы (фрагмент Кленова) и выдерживают еще 10 мин при 10 С. 10мкл смеси используют для трансформациикомпетентных клеток Е.со 3 М 10 . Из колоний, имеющих фенотип Ар, Тс, выделяютплазмидную ДНК, обозначенную рВ, ипроводят Маги (Есор -ЯаО )-рестрикционный анализ, Правильность структуры нуклеотидов в области сайтов Есори ЯаОподтверждают методом Максама-Гилберта.П р и м е р 2, Конструирование рекомбинантной плазмиды рВ 1:2,20 мкг репликативной формы ДНК фагаМ 1 з гра гидролизуют в 100 мкл буфера 2 50ед, рестриктазы Есор1 ч при 37 С. Есор-Есор-фрагмент (198 п,о,) выделяют в 6%ПААГ,1 мкг ДНК плазмиды рВ -2 гидролизуют в 20 мкл буфера 2 рестриктазой Есогвописанных выше условиях, Смесь 0,25пкмоль линейной формы рВ:2,пкмоль(Есор -Есор...

Номер патента: 1761807

Опубликовано: 15.09.1992

Авторы: Вакуленко, Навашин, Фомина, Энтина

МПК: C12N 15/31

Метки: бактерий, еsснеriснiа, штамм

...фермент ААС(3)- а, выращивают в :бульоне в течение ночи при 37 С, Иэ бактериальной суспензии изолируют ДН К Я-плазмиды, имеющую мол.м. 70 Мд и содержащую детерминанту резистентности к гентамицину, тобрамицину, сизомицину и нетилмицину. Выделенную ДНК гидролизуют эндонуклеазой рестрикции Нпб и лигируют с ДНК векторной плазмиды рОС 19, гидролизованной эндонуклеазой Нпб, Смесью, содержащей лигированные молекулы, трансформируют реципиентный штамм Е,со ЗМ 101, Трансформанты, содержащие рекомбинантные плазмиды, отбирают на агаризованных средах, содержащих гентамицин в концентрации 10 мкг/мл, Отобранные трансформанты рассевают до отдельных колоний на агаризованной средеВ, содержащей 10 мкг/мл гентамицина. Отдельную колонию выращивают в...

Номер патента: 1768639

Опубликовано: 15.10.1992

Авторы: Каримова, Михайлова, Панферцев, Степаншина, Черепанов

МПК: C12N 15/31

Метки: g824, j-антиген, j-антигена, бактерий, днк, еsснеriснiа, кодирующая, конструирования, микроба, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, чумного, штамм

...100 мкг/мл,Из сконструированного таким образом банка генов У.ремз отбирают клон, дающий положительную реакцию диффузионной преципитации с моновалентной анти- сывороткой (4), Рекомбинантная плазмидная ДНК, выделенная из этого клона, получает наименование р 67 (фиг. 1),Рекомбинантную плазмидную ДНК р 07 используют в качестве донора при создании плазмиды р 682. В качестве вектора при этом используют предварительно созданную плазмиду рР - делеционнь 1 й вариант малой плазмиды рРа 1 У,резбв, в которой фрагмент ЕсоВ - Нпб заменен на фрагмент ДНК, кодирующий ген сас (устойчивости к хлорамфениколу) из плазмиды рВВ 325, 1 мкг ДНК плазмиды р 67 смешивают с 1 мкг ДНК плазмиды рР 1 и инкубируют с рестриктазой Крп (5 ед.) в буфере 1 (трис-НС....

Номер патента: 1773938

Опубликовано: 07.11.1992

Авторы: Кенжебулатов, Муканов, Мукантаев, Соколова, Сырманов, Шегидевич

МПК: C12N 5/00

Метки: адгезивному, антигену, антител, гибридных, еsснеriснiа, животных, клеток, культивируемых, мusсulus, моноклональных, продуцент, штамм

...35 продуцировали антитела к К 99 адгезивномуантигену ЕзсЬегсЫа со, Штамм гибридных клеток продуцирует антитела в культуральную среду и в асцитную жидкость.Штамм гибридных клеток ЗР 60 хранит ся в специализированной коллекции перевиваемых соматических клеток позвоночных Института цитологии АН СССР под номером ВСКК(П) 519 Д. Штамм характеризуется следующими свойствами.45 Морфологические свойства, Гибридныеклетки представляют собой слабоприкрепляющиеся к носителю округлые клетки размером с исходную миеломную клетку, Ядро занимает большую часть клетки. Цитоплаз ма имеет вид тонкого ободка.Культуральные свойства. Гибридныеклетки выращивают в среде ЙРМ 1-1640, содержащей инактивированную нагреванием сыворотку эмбрионал коров (10-20%), -...

Номер патента: 1804480

Опубликовано: 23.03.1993

Авторы: Вилльям, Вильсон, Майкл, Томас

МПК: C12N 15/24, C12N 15/74

Метки: белка, еsснеriснiа, клеток, митогенного, человека, экспрессии, эндотелиальных

...альфа-ФРЭК, Вместо созда. ния смеси иэ олигонуклеотидов, охватывающих все возможные кодирующие последовательности (вследствие деградации генетического кода), конструируют длинный уникальный олигонуклеотид, Такие олигонуклеотид-затравки, кэк показано ранее, являются эффективными зондами при скриннинге комплекс-ДН К.При конструировании ФРЭК-зонда используют три критерия: (1) исключают динуклеотидную пару Сб, Данный подход основан на недостаточной встречаемости СО-пар динуклеотида в ДНК прокариота, В тех случаях, когда возможно, используют данные о предпочтительной утилизации кодона. Когда обэ эти подхода не информативны, возможно необычное связывание пар оснований, Этот подход основан на природной частотности пар оснований 6:Т, 1;Т, 1:А...

Номер патента: 1807081

Опубликовано: 07.04.1993

Авторы: Власов, Вуцан, Монахова, Седых

МПК: C12N 15/31, C12Q 1/68

Метки: pes78vcs, pes78vcs-источник, бактерий, вибрионов, днк, еsснеriснiа, зонда, идентификации, плазмидная, плазмидной, продуцент, рекомбинантная, рекомбинантной, холерных, штамм

...отбирали по признакуАр Тес,Из 12 различных по размерам встроенных фрагментов ДНК вибриона рекомби 40 нантных плазмид (случайная выборка) спомощью эндонуклеазы Нпб В были получены соответствующие фрагменты и испытаны на видоспецифичность в качествемолекулярных зондов, Радиоактивную мет 45 ку (32 Р-АТР или 32 Р-СТРг. Ташкент, межреспубликанское объединение В/О"Изотоп") вводили с помощью ник-трансляции,Гибридизацию проводили на нитроцел 50 люлозных фильтрах после получения на нихотпечатков колоний Ч.стоегае 01 ине 01(150 штаммов), и 12 других видов рода Ч 1 Ьг 1 о(всего 37 штаммов), а также шигелл, сальмонелл, аэромонад, алломонад, псевдомонэд55 и Е,соИ (всего 25 штаммов) и их соответствующей обработки с использованием модифицированного...

Номер патента: 1816797

Опубликовано: 23.05.1993

Авторы: Бобков, Гараев, Шуленин

МПК: C12N 1/21, C12N 15/48

Метки: антигенными, бактерий, белка,обладающего, вируса, гибридного, днк, еsснеriснiа, иммунодефицита, конструирования, определяющая, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, рр1, свойствами, синтез, человека, штамм

...ДНК проводят методом равновесного центрифугирования в градиенте плотности СзС 1 с бромистым этидием (1 мкг/мл),Для получения плазмиды рР 1 фрагмент Н 1 пб 111 - Е.сой 1 плазмиды рйТЗ переклонируют в вектор рцй 290 по сайту Нпб 111, С этой целью 10 мкг ДНК плазмиды инкубируют с 30 ед. эндонуклеазы Е.соЯ в буфере, содержащем 100 мМ йаС 1, 10 тМ МдМ 12, 10 аМ трис-НС 1 рН 7,5, 1 щМ ДТТ, в течение 1 ч при 37 С. Затем добавляют 1/10 объема ЗМ ацетата йэ и осаждают ДНК 2,5 объемами этилового спирта на ценрифуге (10000 д, 10 мин, 4 С). Осадок высушивают и растворяют в буфере 10 мМ трис-НС 1 рН 8,0 и 5 мМ ЭДТА. Полученный препарат лигируют с 50 мМ адаптора Е.сой-Нпд 11 с помощью ДНК-лигазы фага Т 4 (30000 единиц/мл),из расчета 1 мкл...

Номер патента: 1835294

Опубликовано: 23.08.1993

Авторы: Гнатенко, Сухарев

МПК: A61K 39/108

Метки: еsснеriснiа, энтеротоксина

...области признаки, отличающие заявленное изобретение от прототипа, не были выявлены и потому они обеспечивают заявляемому техническому решению соответствие критерию "существенные отличия",Способ осуществляется следующим образом,П р и м е р, Культуру кишечной палочки выделенную от павшего животного, продуцирующую термостабильный энтеротоксин высевают на питательную среду Альдерете и культивируют в течение 24 часов при 37 С в условиях аэрации. Жидкую культуру центрифугируют при 6000 об/мин в течение 30 мин при 2 С и получают надосадочную жидкость содержащую энтеротоксин. Надосадочную жидкость сливают в стерильную посуду и подвергают концентрации и очистке.К 1 мл раствора нативного термостабильного энтеротоксина приливают 4 мл метанола,...

Номер патента: 1838413

Опубликовано: 30.08.1993

Авторы: Поль, Стефен, Сьюллен, Томас

МПК: C12N 15/52

Метки: dacsdaocs, активности, еsснеriснiа, клетках, экспрессии

...в 2,8 л колбы ГогпЬасЬ и дополнительно инкубировались в течение часа при 30 С в тех же условиях выращивания, Температура воздушного встряхивателя затем повышалась до 42 С, инкубация продолжалась дополнительно в течение 6,5 ч. Чувствительный к температуре репрессор с 1857 лямбда р промотора, установленный таким образом, что обеспечивалась экспрессия ОАСЯ/ОАОСЯ на плазмиде рТ 507, был инактивирован при 42 С и, таким образом, допускал экспрессию ОАСЗ/ОАОСЗ. После инкубации клетки собирались путем центрифугирования и использовались как предпочтительный источник продуцирования активности ОАСЯ/ОАОСЗ.В. Иллюстрация активностей экспандазы и гидроксилазы в клетках Е.со 1 К 12 1 М 109/р 1 Т 507, выращенных при 42 С,Пример 14 г (сырая масса)...