Патенты с меткой «рестриктазы»

Номер патента: 1689400

Опубликовано: 07.11.1991

Авторы: Дегтярев, Пучкова, Речкунова, Серов, Терещенко

МПК: C12N 9/14

Метки: flаvовастеriuм, бактерий, ваlusтinuм, продуцент, рестриктазы, штамм

...неутилизирует. Лизин, аргинин, орнитин и фенилаланин не ферментирует,Отношение к антибиотикам.Культура устойчива к пенициллину, ампициллину,мономицину, неомицину, канамицину, оксациллину, чувствительна ктетрацикливу, стрептомицину, олеандомицину, левомицетину, эритромицину, карбенициллину, линкомицину, гентамицину,.рифампицину.Штамм хранят в лиофильно-высушенном состоянии и на питательном агаре подваэелиновым маслом,Для культивирования Е.Ьацзтпцпч 324применяют питательную среду следующегосостава, дистиллированная вода 1000,0; сухой дрожжевой экстракт 20,0; уксуснокислый натрий 2,0, сернокислый магний 0,2,фосфор н окисл ый калий 2,0. Готовая средаимеет рН 7 Культивирование проводят при 30 С со скоростью вращения качалки 200 об/мин до...

Номер патента: 1694647

Опубликовано: 30.11.1991

Авторы: Африкян, Дегтярев, Репин, Речкунова, Хачатурян, Читчян

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: bacillus, бактерий, вrеvis, продуцент, рестриктазы, штамм

...качалках при 30 С.Недостатками данного штамма (по литературным данным) являются низкий выход фермента, составляющий 3000 ед/г сырой биомассы, а также требовательность к богатым и дорогостоящим питательным средам (выход биомассы не указан). Цель изобретения - выявление штамма ВасИоз Ьгечз - продуцента, синтезирующего рестриктаэу ВЬч 121, способную узнавать и расщеплять последовательность нуклеотидов 56(А/Т)6 С(А/Т)Сс более высоким выходом фермента.Штамм выделен из бурой окультуренной почвы в результате систематического поиска штаммов - продуцентов эндонуклеаз рестрикции в роде ВэсИоз и хранится в ВКПМ под регистрационным номером В,Рестриктаза иэ ВасИоз Ьгечз Вследующими признаками.Кул ьтурал ьно-морфологические и ризнаки. На МПА...

Номер патента: 1698286

Опубликовано: 15.12.1991

Авторы: Бойков, Бойкова, Дегтярев, Репин

МПК: C12N 1/20, C12N 9/22

Метки: sтuтzеri, в-4724, вкпм, культивирования, питательная, продуцента, рsеudомоnаs, рестриктазы, среда, штамма

...1 131 ВКПМ В - 4727 осуществляют насухом питательном агаре (сухой питательный агар 35,0 г/л; вода 1,0 л) в чашкахПетри. Инкубируют в термокамере при 28 Св течение 24 ч,30 С поверхности агара в чашках Петрикультуру переносят бактериологическойпетлей в качалачные колбы с. питательнойсредой данного состава, рН 7.,2.Выращивают посевной материал при35 28 С в течение 18 ч на качалке,.Ферментацию культуры проводят напитательной среде данного состава прирН 7,2, температуре 28 С, перемешивании200 об/мин, подаче воздуха: 2 сбъема ваз 40 духа на 1 обьем питательной среды, выращива от до достижения оптической плотностибактериальной суспензии 1,7 опт,ед, (ЗЭК,филь.гр М 6, кювета 0,5 см).Выход биомассы 13,0 г/л культуральной45 жидкости.Выход...

Номер патента: 1703687

Опубликовано: 07.01.1992

Авторы: Богданова, Дегтярев, Речкунова, Цаплина

МПК: C12N 9/14

Метки: рестриктазы

...также относится крайне низкий выход целевого продукта - около 100 ед,/г биомассы (4000 ед. из 30 г),Целью изобретения является упрощение процесса и повышение выхода целевого п родукта.Способ заключается в том, что используют штамм термофильной бактерии ТЬегацз гцЬег ВКМ В(ВС), продуцирующий единственную рестриктазу Тгц 201 Г с повышенным ее содержанием, Штамм культивируют на питательной среде, клетки разрушают ультразвуком и проводят очистку фермента путем хроматографий на фосфоцеллюлоэе и гепарин-сефарозе.П р и м е р, Культивирование штамма и получение биомассы.Клетки ТЬеггпцв гцЬег ВСвысевают из ампулы на твердую среду, содержащую 207 О картофельного отвара, 0,57 ь пептона и 0,02 дрожжевого экстракта, инкубируют в течение 1 сут при 60...

Номер патента: 1707077

Опубликовано: 23.01.1992

Авторы: Аникейчева, Калугин, Либрик, Самко, Соколов, Фицнер, Хорошутина

МПК: C12N 9/14

Метки: рестриктазы

...после добавления в ферментер инокулята в соотношении 1:10 к объему среды,Рабочие культуры пересев: от на среду Хоттингерэ один раз в 8 - 10 дней, Хранят культуру в полужидком агаре под вазелиновым маслом или в лиофилизиронэнном виде в ампулах.Выделение рестриктазы Взр 01 производят фракционированием полиэтиленимином и хроматографией на колонках с аффинным сорбентом и ионообменниками. 5 10 1 Г, 20 25 30 35 40 45 50 55 Инкубационная смесь дпя определения активности рестриктэзы ВзрОобьемом 50 мкп содержит 0,01 М трис-НС 1 буфер(рН 7,4) 0,01 М гх 9 С 12, 0,001 М дитиотреитолэ (или .,007 М 2-меркэптоэтанолэ) и 2 мкг ДНК фага Л . Инкубацию проводят при 37 С в течение 60 мин, Продукты расщепления Д 11 К фага Л рестриктэзой ВзрО 1...

Номер патента: 1712415

Опубликовано: 15.02.1992

Авторы: Аникейчева, Калугин, Либрик, Самко, Соколов, Фицнер, Хорошутина

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: рестриктазы

...аэрации при 370 С на бульоне Хоттингера с добавлением 2 глюкозы, а также на среде, содержащей в 1 л, г: дрожжевой экстракт 5; пептон 10; глюкоза 5; МагНРО 12 НгО 2,2; МаС 3; Мд 804 0,5; СаО 2 0,25, рН 7,2-7,5. Ферментацию культуры проводят после добавления в ферментер инокулята в соотношении 1:10 к объему среды. Рабочие культуры пересевают на бульон Хоттингера один раз в 7-10 дней. Храняткультуру в полужидком агаре под вазелиновым маслом или в лиофилизированном виде5 в ампулах,Культура непатогенна для мышей.Инкубационная смесь для определенияактивности рестриктазы ВЬчА 1 объемом 40 -50 мкл содержит 0,05 М трис-НО, рН 7,5,10 0,01МдСг, 0,001 М, дитиотреитола, 0,1 ММаС 1,2 мкгДНКфагаЛи 0,5-10 мкл фермента, Инкубацию проводят при 37 С в...

Номер патента: 1738853

Опубликовано: 07.06.1992

Авторы: Корсун, Лебедев

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: luтеns, micrococcus, биомассы, в-2836, вкпм, продуцента, рестриктазы

...клеточного лизата с 0,5 мкг ДНК фага лямбда);анализ клонов на содеркание рестриктазы Ма 1 при пассировании на среде без ДНК (контроль, первая дорожка - 5 мин инкубации, вторая - 60 мин инкубации одинакового количества клеточного лизата с 0,5 мкг ДНК фага ламбда);анализ биомасс М. 1 цсеоз на содержание рестриктазы Мв 1, полученных с пассираванием на среде без ДНК, с пассированием на среде с ДНК. В пробы добавляли соответственно клеточного лизата 0,5(а); 1,0(б); 2,0(в); 3,0(г); 5,0(д); 10,0(е);0,025(ж); 0,05(з); 0,1(и); 0,15(к); 0,25(л) и 0,75(м) мкл, инкубировали с 0,5 мкг ДНК фага лямбда в течение 1 ч при 37 С.Из полученных данных установлена, что картина полного специфического гидролиза ДНК рестриктазой наблюдается в первой...

Номер патента: 1752769

Опубликовано: 07.08.1992

Авторы: Андреева, Афиногенова, Гордиенко, Лебедев, Майстренко, Пустошилова

МПК: C12N 9/14

Метки: gtcgac, нуклеотидов, последовательность, расщеплять, рестриктазы, способной, узнавать

...в 6 - 8 раз больше, чем в известном способе, Полученная рестриктаза характеризуется следующими свойствами;узнает и гидролизует последовательностьнуклеотидов 6 ТС 6 АС, оптимальное значе 10 ние рН для действия рестриктазы 8,0; оптимальная температура 37 С; для проявленияактивности рестриктазы требуются ионыМц (оптимальная концентрация Мц 1015 мМ); оптимальная концентрация йаС в15 реакционной смеси 100-120 мМ.Полученный ферментный препарат свободен от значительных количеств неспеци-фицеских нуклеаз и фосфатаз, Приинкубации 200 ед,акт. фермента с 1 мкг ДНК20 фага в течение 2 ч при 37 С наблюдаетсястандартный набор фрагментов ДНК, Фрагменты ДК, полученные при инкубации 10ед.акт, фермента с 1 мкг ДНК фага в течение2 ч при 37 С, сшиваются...

Номер патента: 1761803

Опубликовано: 15.09.1992

Авторы: Аникейчева, Калугин, Либрик, Самко, Соколов, Фицнер, Хорошутина

МПК: C12N 1/20, C12N 9/16

Метки: alvei, bacillus, бактерий, продуцент, рестриктазы, штамм

...споры. Грамположительны (признак непостоянный, варьирует Гр - Гр).+ 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Утилизация углеводов - на глюкозе, лактозе, сахарозе образуют кислоту; на арабинозе, ксилозе и манните кислоту необразуют,Крахмал - гидрол изуют.Лакмусовое молоко - свертывание, пептонизация,Индол и диоксиацетон - образуют,Казеин - расщепляют,Тирозин - не расщепляют,Фенилаланин - не дезаминируют.Оптимальные условия выращивания ихранения культуры,Культура В.а 1 че ВКМ Вхорошо растет на жидких и твердых полноценных питательных средах - бульоне Хоттингера, среде1 В,мясопептонном бульоне,Максимальная и минимальная температура роста культуры соответственно 35 - 45С и 15 - 20 С, а оптимальная температура -37 С. Оптимум роста рН 7,0 - 7 - 2,...

Номер патента: 1761804

Опубликовано: 15.09.1992

Авторы: Аникейчева, Калугин, Карпычев, Либрик, Самко, Соколов, Фицнер, Хорошутина, Эльдаров

МПК: C12N 1/20, C12N 9/16

Метки: bacillus, coagulans, бактерий, всо, продуцент, рестриктазы, штамм

...в 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 ферментере при 37 С в аэробных условияхна питательной среде Хоттингера, котораясодержит в 1 л, 250 мл основного перевараХоттингера; 5 г КаС; 1 г К 2 НР 04 и до 1 лводы. Выращивание прекращают в концелогарифмической фазы роста, когда ростдостигает Аббе=1,5 - 1,7, Выход биомассы 7 - 8г/л,На рыбной среде культура растет плохо(при 18-часовой ферментации на качалкеА 650=0,3).Ферментацию культуры проводят последобавления в ферментер инокулята в соотношении 1:10 к объему среды.Рабочие культуры пересевают на мясопептонный бульон или среду Хоттингераодин раз в 8-10 дней,Хранят культуру в полужидком мясопептонном агаре под вазелиновым масломили в лиофилизированном виде в ампулах,Выделение...

Номер патента: 1784642

Опубликовано: 30.12.1992

Авторы: Верхозина, Дегтярев, Дедков, Жилкин, Колыхалов, Речкунова

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: bacillus, sрнаеriсus-продуцент, бактерий, рестриктазы, штамм

...(1 6-18 ч) клетки подвижные, палочковидные, 0,6 мкм в поперечнике и 1,5-3мкм в длину. Располагаются поодиночке,иногда короткими цепочками, Грамположительные. Клетка способна образовыватьсферическую спору, расположенную терминально и раздувающую спорангий,Физиолого-биохимические признаки.Штамм - строгий аэроб. Каталазоположительный. Не образует кислоту, газ и ацетоиниз глюкозы. Кислоту не образует также изарабинозы, сорбита, рамнозы, сахарозы,. мальтозы, лактозы, глицерина, маннита,этанола. Гидролизует желатин, но не крахмал и твин, Не восстанавливает нитрат внитрит, Не образует сероводород и индол.В аэробных условиях растет на среде изгидролизата кильки при температуре от 4 до40 С (оптимум 37 С), концентрации йаС от0 до 3%...

Номер патента: 1806191

Опубликовано: 30.03.1993

Авторы: Андреева, Беличенко, Дегтярев, Зернов, Репин, Речкунова

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: micrococcus, species, бактерий, продуцент, рестриктазы, штамм

...округлые, край ровный.Физиолого-биохимические свойства. Аэроб, отрицателен по оксидазе, амилазе, аргининдегидролазе и реакции с метиловым красным, не выделяет сероводород и индол, каталазоположителен, не утилизирует малонат, цитрат, мочевину, не восстанавливает нитраты,Содержание ГЦ пар в ДНК - 77 мол. ф, Хранение штамма осуществляют под вазелиновым маслом или в 30 глицерине приС,Выходрестриктазы Мзр 201 3000 ед/г сырой биомассы,На чертеже представлена злектрофореграмма продуктов гидролиза ДНК фага лямбда ферментами Ваи Мзр 201,1-ая дорожка - гидролиз Ва 12-ая дорожка - совместный гидролиз Ва 1 1 и Мзр 20 13-ая дорожка - гидролиз Мзр 201 П р и м е р 1. Получение биомассы и выделение фермента,Перед началом работы клетки штамма...

Номер патента: 1806192

Опубликовано: 30.03.1993

Авторы: Воробьева, Дегтярев, Кривопалова, Репин, Речкунова, Фиш

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: viвriо, vна, бактерий, наrvеyi, продуцент, рестриктазы, штамм

...При исследовании разрушенной биомассы в ней обнаружена и выделена эндонуклеазарестрикции ЧЬа 464 , споСобная узнавать и "0расщеплять последовательность нуклеотидо в 5-СТТААО,Определяющими отличиями предлагаемого штамма ЧЬго Ьагчеу являются:штамм содержит одну рестриктаэу ЧЬа 15464вместо трех в прототипе,продуктивность штамма составляет5000 ед/г (более чем в 15 раз выше, чем уштамма-прототипа).На чертеже представлена электрофореграмма продуктов гидролиза ДНК фагаферментами А 1и ЧЬа 464 .1-ая дорожка - гидролиз Ат2-ая дорожка - совместный гидролиз АЛи ЧЬа 464253-ая дорожка - гидролиз ЧЬа 464 ,П р и м е р 1. Получение биомассы ивыделение фермента.Перед началом работы клетки штаммапродуцента пересевают бактериологической петлей на...

Номер патента: 1822877

Опубликовано: 23.06.1993

Авторы: Арутюнян, Громова, Грубер, Кубарева, Левченко, Никольская-Санович, Упорова

МПК: C12N 9/14

Метки: рестриктазы

...1,5 мл/ч. Объем промывочного буфера 12 мл, объем градиента 60 мл, объем одной фракции 1 мл (см,фиг,1)На фиг, 1 обозначены; Н - оттекающая жидкость П - промывочный буфер, Г - градиент, По оси абсцисс - номера фракций, по оси ординат слева - активность фермента (ед/мл), справа - молярность элюирующего раствора чаС (М),Облучен препарат К Явоза 36 ч с удельной активностью 10 тыс,ед/мг белка, однако целевой продукт содержит нуклеазные примеси, Потери активности фермент- ного препарата составляют 25 .П р и м е р 2, Фракции градиента с ФЦ Р, содержащие рестриктазную активность, диализуют против РБ содержащего 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 10 мМ фосфата калия, и проводят аффинную хроматографию на денатурированной ДЕК- целлюлозе,...

Номер патента: 1832129

Опубликовано: 07.08.1993

Авторы: Аникейчева, Калугин, Карпычев, Либрик, Самко, Соколов, Фицнер, Хорошутина, Эльдаров

МПК: C12N 1/20, C12N 9/16

Метки: bacillus, бактерий, вrеvis-продуцент, рестриктазы, штамм

...33(3;," л"(ТОН(3 О 3 б)гГЛ 3 )г 3 Е 33 гГг 3 г 3 о3,1 , г,3.О 3 Л Е Р Н ОП О М В Г 3Г 3И З О " Г -, ;Отное.ие 3 к 3 спрол.)э,".,Ти)3 иэа 33 ИЛ УГП/),)г",)33 а г.г 33,):,;" 3 СЛота . Гаэ + 3) 3 Л;31,Индол и сероводрд;: О 3)з г,ъ 3(033 Т 3)МДЛЬ 33 ЫО УС(С) .л:,(3,:)3 ,;:Х 3)ДНЕ).33 л 3 К(13 ГУОЫ,Куль;ура В. Ьг)чг) ВКгЛ В9 хо,)(;)3 сРЭСТЕт ВУСПОВИЛХ )ЭРДЦ 313 33,3; Г (, 3-, Гг,г)3,ОНО )ОТТИНГ3, сг)ле)3(а 3 е 3 ) "г 1 Г(33(Г)Э 3,без Гл)окозь), на (,раде с 3)д)гллиэз)ок 3 пК)Л И Срвдц .В. П)3 Л ВЫГ)л.; г Ч ".: ": (П,гг;1И г С на каОй,.е 3 а )аз 3 3 и.,; )Тег(Е)33" 10: 133 пгг(3 И- Г "-); "глюкозь 3 1,(; срг:313;) 3- 1,.), (;3 к. :;.,:,(г(лд:)0333 лззто 33 2,31,(3)Е3)Е 3)ТЛГцн 3 Г, ГГ:. гдобавлен)я в фе) 3 пт,.ношении 3 10 к Обьему с)Оп) И...

Номер патента: 2001952

Опубликовано: 30.10.1993

Авторы: Андреева, Гордиенко, Лебедев, Майстренко, Пустошилова, Репин

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: leguminosarum-продуцент, rhizobium, бактерий, рестриктазы, штамм

...Мц ц В 1 е 69 1, дорожки: А - совместный гидролиз Мц + йе 69 1, Б - гидролиз Й 1 е 69 1, В - гидролиз М 1 ц 1; на фиг, 3 - построение рестрикционной карты ДНК фага А с использованием ферментов Н 1 пб 111, М 1 ц 1 ц Й 1 е 69 1; на фиг, 4 - электрофореграммэ гидролизэДНК плаэмиды рВВ 322 рестриктазами Вва 1, В(е 69 1 о Нпб, дорожки: А - обработка Вза 1, Б - обработка Ве 69 1, В - совместный гидролиз Ве 69 1 о Нпб , цифрами указано количество пар нуклеотидов в ферментах ДНК,П р и м е р 1. Культивирование штамма и получение биомассы.Культуру В.едогппозагогп выращивают на питательном бульоне следующего состава, г/л: пептон 10; дрожжевой экстракт 5; хлористый натрий 5; глюкоза 10 ( -бульон),Для получения инокулята суточную культуру...

Номер патента: 1314669

Опубликовано: 30.05.1994

Авторы: Аникейчева, Колоша, Самко, Соколов, Фицнер, Фодор, Хорошутина

МПК: C12N 9/14

Метки: aeruginosa-18, pseudomonas, продуцент, рестриктазы, штамм, эндонуклеазы

Штамм Pseudomonas aeruginosa-18 - (коллекция Государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л. А. Тарасевича МЗ СССР, коллекционный номер 134) - продуцент эндонуклеазы рестриктазы Рае 11.

Номер патента: 1321060

Опубликовано: 15.11.1994

Авторы: Ансберга, Баев, Бурьянов, Косых, Филипченкова

МПК: C12N 9/22

Метки: 834psk, corii, escherichia, бактерий, рестриктазы, штамма

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РЕСТРИКТАЗЫ E.CORII ИЗ ШТАММА БАКТЕРИЙ ESCHERICHIA COLI B 834/pSK 323 путем дезинтеграции клеток в смеси, содержащей 10 мМ калий - фосфатного буфера, рН 7,0, 7 мМ 2-меркаптоэтанола и 1 мМ трилона Б, разрушения клеток ультразвуком, осаждение фермента из бесклеточного экстракта полиэтиленимином, который добавляют до концентрации 0,3 - 0,5%, экстракции фермента 0,4 М раствором хлористого калия, осаждения сульфатом аммония, очистку на ДЭАЭ-целлюлозе при элюировании фермента раствором хлористого калия с возрастающей концентрацией от 0 до 0,3 М и последующую очистку на фосфоцеллюлозе при элюировании раствором, хлористого калия с возрастающей концентрацией от 0,1 М до 0,5 М и концентрировании, отличающийся тем, что, с целью...

Номер патента: 1389292

Опубликовано: 20.07.1996

Авторы: Божко, Дегтярев, Репин, Щелкунов

МПК: C12N 9/22

Метки: рестриктазы

Способ получения рестриктазы Hgal, включающий приготовление посевной культуры Haemophillus gallinarum ВКПМ В-2203 на твердой питательной среде, содержащей питательную основу, никотинамидадениндинуклеотид, фактор роста, агар и воду, последующий засев ею жидкой питательной среды, выращивание в оптимальных условиях, отделение клеток и выделение из них целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения активности и чистоты ферментного препарата, при приготовлении посевной культуры в качестве питательной основы используют панкреатический гидролизат кильки, а в качестве фактора роста - донорскую кровь в количестве 3,0 10,0 г/л, в твердую питательную среду дополнительно вводят однозамещенный и двузамещенный фосфаты калия.

Номер патента: 1026407

Опубликовано: 10.06.2000

Авторы: Баев, Бурьянов, Косых

МПК: C12N 1/20

Метки: escherichia, mb-)psk, метилазы, продуцент, рестриктазы, штамм, •рб

Штамм Escherichia coli B 834 (rB-, mB-)/pSK 323 (Всесоюзная коллекция микроорганизмов при Институте биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР, коллекционный номер ВКМ В-1445Д)-продуцент рестриктазы и метилазы Eco RII.