C12N 15/81 — для дрожжей

Номер патента: 1643610

Опубликовано: 23.04.1991

Авторы: Аак, Галактионов, Демин, Кашкин, Конев, Корчагина, Лазебник

МПК: C12N 15/81

Метки: sтrертомyсеs, белка, биотинсвязывающего, продуцент, снrомоfusсus, стрептомицета, штамм

...в течение 48 ч при28+2 С11 о окончании ферментации культуральную жидкость фильтруют, нативыай раствор, освобожденный от мицелия, концентрируют примерно в 10 разна ультрафильтрациониой установке сиспользованием мембраны Рипор 4-120.Далее 0,56 л концентрата используютдля выделения биотинсвязывающего белка (БСБ).На первой стадии проводят высаливанне 70%-ным сульфатом аммония, выпавший осадок отделяют оч надосадочной жидкости центрифугированием 15000 я при 4 С и ресуспендируют в 60 мп дистиллированной воды, 1 олученный раствор днализуют против дистиллированной воды, Диализат центрифугируют при 15000 я 30 мин, Супер натант используют дпя окончательной очистки биотинсвязывающего белка методом аффинной хроматографии на имн...

Номер патента: 1741610

Опубликовано: 15.06.1992

Авторы: Андреас, Вальтер, Ингрид, Конрад, Кристиан, Мария, Рудольф, Эдельтрауд, Элинборг

МПК: C12N 15/52, C12N 15/81

Метки: дисмутазы, человеческой

...мИ, рН 5,5) .в) Катионообменная хроматография.Содержащий МпО-дисмутазу диали"зат со стадии "б" подают на колонкус СИ"сефарозой; уравновешенную 60 мИтрис-уксусной кислотой, рН 5,5,злюируют линейным градиентом (15объемов колонки) от 60 мИ трис-уксус,.ной кислоты до 0,12 И ацетата натрия,г) Гельпроникающая хроматография,фракции с активностью МпО-дисму 35тазы со.стадии "в" собирают и подаютна колонку, содержащуюсефакрил Б300 НК или суперозу 12, уравновешенную 0,1 И фосфатным буфером, рН=7,8. 10 . 38Элюцию проводят тем же буфером.Получают 20 мг (1,1 мг/г клетки) чИпО-дисмутазы. формула иэобретения Способ получения человеческой МпО"дисмутазы, заключающийся в том, что из плацентарной или печеночной ткани человека выделяют мРНК, получают...

Номер патента: 1774950

Опубликовано: 07.11.1992

Авторы: Жан-Пьер, Жерар, Ив, Поль

МПК: C12N 15/15, C12N 15/81

Метки: cerevisiae, sасснаrомyсеs, гирудина, дрожжей, полипептида, предшественник, свойствами, штаммы, экспрессирующие

...р и м е р 3. ДНК рТ 6897 служит длятрансформации дрожжей Т 6 Узр 4 (Маб,цга 3-251-373-328, Ьз,-15) в цга+.Трансформированную колонию реплицируют и используют для посева не менее10 мл питательной среды и 0,5% казаминокислот. После 20 ч культивирования клеткиподвергают центрифугированию, надосадочную часть подвергают диализу дистиллированной водой и концентрируютвыпариванием (центрифу ирование в вакууме),Параллельно обрабатывают таким же"образом культуру Р 6 У 1 зр 4, трансформированную рТ 6886, и культуру Т 6 Узр 4, трансформированную плазмидой не несущейпослецовательность гирудина (Т 6 У 1 зр 4РТ 6856). Сухие остатки поглощают 50 мклводы и 20 мкл кипятят в присутствии 2,8%ЯОЯ и 100 ммоль меркаптоэтанола, затемпомещают на гель...

Номер патента: 1692151

Опубликовано: 27.10.1995

Авторы: Белогуров, Бибилашвили, Горюнова, Дельвер, Домкин, Ефимова, Рыбалкин, Савочкина, Сидоров, Скамров, Ченчик, Шевелев, Южаков

МПК: C12N 15/52, C12N 15/81, C12N 9/72 ...

Метки: escherichia, активатор, активатора, бактерий, днк, кодирующая, конструирования, плазмидная, плазминогена, продуцент, рuавс, рекомбинантная, типа, урокиназного, штамм

1. Рекомбинантная плазмидная ДНК рUАВС, кодирующая активатор плазминогена урокиназного типа размером 4,11 тпо, содержащая: Xba I Bgl I фрагмент ДНК вектора рUС19 размером 1,39 тпо; Bgl I Pst I фрагмент ДНК вектора рUС18 размером 1,28 тпо; Pst I Xba I фрагмент кДНК урокиназы человека размером 1,44 тпо; по три сайта рестрикции Асе I, Pst I; по два сайта рестрикции Bgl I, Hind III, EcoR I; по одному сайту рестрикции BamH I, Xba I; участок инициации репликации и промоторно-операторную область lac-оперона; генетические маркеры; Amp ген устойчивости к ампициллину.2. Способ конструирования рекомбинантной плазмидной ДНК рUАВС, заключающийся в том, что ЕсоR I Pst I фрагмент кДНК урокиназы человека размером 0,60 тпо, полученный в результате...

Номер патента: 1830945

Опубликовано: 10.08.1999

Авторы: Авот, Грен, Мясникова, Останин, Романчикова, Смирнов, Циманис

МПК: C12N 15/26, C12N 15/81

Метки: alphoil, cerevisiae, saccharomyces, биосинтез, днк, дрожжах, дрожжей, интерлейкина-2, конструирования, обеспечивающая, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, секреторный, секрецию, человеческого, штамм

1. Рекомбинантная плазмидная ДНК plDB(ALPHOIL), обеспечивающая биосинтез и секрецию человеческого интерлейкина-2 в дрожжах, мол.м. 5,3 мДа и размером -8,1 т.п.о., содержащая: - Hind III - Sal I - фрагмент плазмидной ДНК бифункционального бактериально-дрожжевого вектора plDB 207 размером 6,3 т.п. о. , включающий бактериальный ген устойчивости к ампициллину, бактериальную область инициации репликации, дрожжевой ген LEU2, а также фрагмент дрожжевой двумикронной плазмиды, обеспечивающий репликацию плазмиды в клетках дрожжей; - Sal I - Bam H1 - фрагмент полилинкера плазмиды pUC 19 размером 20 п.о.; - Bam H1 - Sau 3A - фрагмент промотора гена PHO5 дрожжей плазмиды pVY 18 размером 0,35 т.п.о. с...