Способ получения 5 3 2-(2, 2, 2-трифторэтил)-гуанидино пиразол-1-ил -валерамида и его фармацевтически приемлемых кислотно-аддитивных солей

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Н ПАТЕНТУ ГОСУДАРСТВЕННЪЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ(72) Тобиас Орегон Еллин (118)и Дэвид Джон Гилман (СВ)(54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 5-13-1 2-(2,2,2-ТРИФТОРЭТИЛ)-ГУАНИДИНО ПИРАЗОЛ-ИЛ 1 ВАЛЕРА 11 ИДА И ЕГО ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ ПРИЕМЛЕМЫХ КИСЛОТНО-ЯДИТИВНЫХ СОЛЕЙ, о т л и ч а ю щ и й с ятем, что 5-13-1 3-(2,2,2-трифторэтил)тиоуреидо 1 пиразол-илвалерамид,подвергают взаимодействию с аммиакомв среде этанола в присутствии окисиртути и, в случае необходимости, полученньй продукт переводят в кислотно-аддитивпую соль.12877Изобретение относится к производным гуанидина, являющихся антагонистами гистамина Ни ингибиторами секреции желудочного сока, а именно к способу получения 5-1 3- Г 2- (2,2,2- трифторэтил)гуанидино)пиразол-ил)- валерамида и егофармацевтически приемлемых кислотно-аддитивных солей.Цель изобретения - способ получения гуанидинового производного, являющегося более сильным антагонистом гистамина Нпо сравнению со структурным, аналогом - 3-2-гуанидинотиазол-илметил - тио 1 пропионамидом. П р и м е р 1. К раствору 0,5 г5-ГЗ-ГЗ,2,2-трифторэтил-тиоуреидо 1 пиразол-илвалерамида в 6-мо-лярном растворе аммиака в этиловомспирте (6 мл) добавляют 0,56 г окиси 20ртути в течение 5 мин, Смесь перемешивают 1 ч и Фильтруют,фильтрат выпаривают в вакууме до получения в остатке масла, которое растворяют вэтилацетате, к раствору прибавляютпетролейный эфир (с т. кип. 60-80 С),выделившийся осадок отфильтровывают,сушат, Получают 5-3-2-(2,2,2-трифторэтил) -гуанидино 1 пиразол-ил валерамид в виде кристаллического твердого вещества с т,пл. 128-132 С.Выход 76%,ЯМР-спектр (ДМЬО), м.д.: 7,4(д.1 Н), 5,65 (8. 1 Н), 4,0 (м, 1 н),2,1 (ш, 2 н), 2,6 (ч, 4 н). 35 47 2лаждения льдомПо прошествии 4 ч водород больше не абсорбируется.Смесь Фильтруют и фильтрат выпаривают в вакууме, Получают 5-(3-аминопиразол-ил)-валерамид в виде масла, которое кристаллизуется. Этот продукт (2,5 г) перемешивают в 25 мл ацетонитрила и добавляют к нему 2,17 г 2,2,2- трифторэтилизотиоцианат, Через 18 ч смесь фильтруют и осадок на Фильтре промывают ацетонитрилом, затем диэтиловым эфиром. Получают 5-13-3-(2,2,2-трифторэтил)тиоуреидопиразол-,илвалерамид с т.пл, 172 в 174. 5-3- 2-(2,2,2-трифтор - этил)гуанидино"1 пиразол - 1-илвалерамид является антагонистом рецептора Нгистамина (или просто гистамина Н), ингибирует секрецию кислоты желудочного сока у теплокровных животных и в связи с этим находит ценное применение для лечения пептических язв (язвы желудка и двенадцатиперстой кишки) и других заболеваний, вызванных или обостряемых кислотностью желудочного сока, в том числе стрессовых язв и желудочно-кишечных кровотечений, вызванных травмами,Активность антагониста гистамина Нможет быть продемонстрирована посредством стандартных испытаний, например, по способности соединения ингибировать вызванную гистамином положительную хронотропную ответную реакцию при спонтанном биении правого45 Исходный материал может быть получен следующим образом.Раствор 0,2 г 5-(3-нитропиразол- -1-ил)валеронитрила в 1 мл концентрированной серной кислоте выдерживают при 20 С в течение 19 ч, Смесь разбавляют 4 мл воды, подщелачивают 10,8 нормальной гидроокисью натрия до рН = 10 и экстрагируют этилацетатом (Зх 5 мл), Экстракты высушивают (над МяБО ) и выпаривают в вакууме до получения в остатке твердого белого вещества, которое перекристаллизовывают из этанола, в результате чего получается 5-(3-нитропиразол-ил)валерамид с т,пл.129-131 С,Смесь 3,6 г 5-(3-нитропиразол- ил)валерамида и 3%-ного (вес/вес) палладия на угле (0,54 г) перемешивают в 20 мл изопропанола в атмосФере водорода, Температуру поддерживают ниже 40 С за счет внешнего ох-предсердия морских свинок или по способности этого соединения ингибировать вызванное гистамином поглощение аминопирина в кислотное пространство париетальных клеток (т,е. обкладочных клеток желез желудка),.Испытания на морских свинках осуществляются следующим образом, Правое предсердие морской свинки подвешивают с натяжением 1 г (изометрическое натяжение) в тканевой ванне с термостатическим регулированием (30 С), емкостью 25 мм, содержащей насыщенный кислородом (95% О, 5% СО ) буфер КгеЬз НеЬзеТе.г. (рН=7,4). Ткань стабилизируется в течение одного часа и в течение этого времени она промывается 2-4 раза, Отдельные сокращения регистрируются посредством датчика силового смещения, с использованием измерителя деформации и мгновенные частоты сокращения регистрируются посредством кардиотахометра, Получают значение контрольнойответной реакции на 1 мкмоль гистамина, после чего ткань промывают три раза и снова приводят в равновесное состояние до основного показателя частоты. После установления равнове сия, длящегося 15 мин,вводят испы - тываемое соединение до желаемой конечной концентрации. Через 10 мин после введения соединения снова вводят гистамин (1 мкМоль) и ответную реакцию на гистамин в присутствии антагониста сравнивают с контрольной ответной реакцией на гистамин. Результат выражают в процентах от контрольной реакции на Гистамин.После этого стандартными методами определяют кажущуюся константу диссоциации антагониста гистамина Н,Испытание с аминопирином осуще ствляют следующим образом, Удаляют слизистую оболочку желудка из мышцы дна желудка и пролтывают ее в Буфере 1 (содержащем на 1 л раствора 8,007 г 11 аС 1; 0,201 г КС 1, 0,113 г Иа НРО, 0,204 г КНРО, 0,132 г СаС 1 2 НО, 0,101 г МЕС 1 и 1 г глюкозы, с регулированием величины рН до.7,4 посредством МаОН). Ткань тонко измельчают, суспензируют в Буфере 1 и промывают 30 три раза Буфером 1, Затем ткань суспензируют в диспергирующей среде Коллагеназа (81.рпа СЬетп 1.са 1 о Тип У, 100 мг) и альбумин коровьей сыворотки (М 11 ез 1 аЬогаог 1 ез 1 гс 1 фракция - У, 35 100 мг) в Буфере 1 (100 мл), 50 мл на 10 г чистого веса ткани - и термостатируют при 30 С и величине рН рН 7,4 (поддерживаемой путем непрерывного регулирования) при перемеши вании в атмосфере кислорода. По прошествии 30 мин ткани дают возможность осесть и поверхностный жидкостный слой удаляют, Вводят свежую порцию диспергирующей среды и продолжают45 термостатирование с использованием ткани, которая в большей своей части диспергируется в железы и целые клетки по прошествии 40-60 мин, Любые оставшиеся большие кусочки ткани 50 удаляют путем фильтрации через нейлоновую сетку. Смесь желез и клеток извлекают путем центрифугирования при 200 г и суспензируют в Буфере 1, содержащем 1 Х альбумина коровьей сы воротки (М 1 ез Т,аЪогаоггез Ьгс 1; фракция У), Железы и клетки промывают три раза Буфером 1 и суспензируют в Буфере 2(содержащем Еа 1 ев МЕМ (500 мл) Лпротин (81.8 та СЬеш 1 са 1Со, 10 мг) и Перез (т,е. 2-4-(2-оксиэтил)пиперазин-илэтансульфокислоты, 1500 ммолн; 20 мл), при поддер.жанни величины рН 7,4, посредствомИаОН, 150 мл на 10 г чистого весаткани). Эту тканевую суспензию перемешивают в атмосфере кислорода притемпературе 32"С в течение по меньшей мере одного часа, после чего ееможно использовать. Тканевую суспензию термостатируют вместе с испытываемым соединением и аминопирином(10 мкмоль) меченым С в диметиламиновой группе (О,1 мк дюйм /мл), втечение 20 мин. Затем поглощение аминопирина стимулируют путем добавления гпстамина и ингибитора Фосфодиэстеразы ТСТ 63197 (В 1 осЬеш Бос.Брес 1 а 1 РпЬ 11.сагхоп 1, 1973, с. 127-э132) до конечных концентраций 10 моля-7и 5 х 10 моля соответственно. Попрошествии 18 мин клетки (железы) извлекают из термостатированной средыпутем Фильтрации суспензии черезстеклянный микрофибрильный фильтр,Клетки (железы) быстро (в течениеменее чем 10 с) промывают три разаохлажденным льдом Буфером 1, Лминопирин, меченый С, удерживаемый тканью, измеряют с помощью сцинтилляционного счетчика и степень ингибирования поглощения испытываемым соединением рассчитывают путем сопоставленияс контрольным образцом, Затем с помощью графиков, полученных в ряде испытаний, проводимых при различных концентрациях, рассчитывают концентрацию испытываемого соединения, дающуюингибирование на 501,5-3-1 2-(2,2,2-трифторэтил) -гуанидинопиразол-илвалерамид испытывался в экспериментах с аминопирином.Оно активно в концентрации0,0036 мкмоль, Структурный аналог -3-(2-гуанидинотиазол-илметилтиопропионамид в данном тесте активенв концентрации 0,29 мкмоль, т.е. менее активен, чем 5-3-2-(2,2,2 триФторэтил) гуанипино пираэ ил-ил) -валерамид приблизительно в 100 раз.Ингибирование секреции кислоты желудочного сока может быть продемонстрировано стандартными испытаниями,например, по способности соединения,при вводе его путем внутривеннойинъекции через желудок или черезрот ингибировать секрецию кислотногожелудочного сока, например, у крыс или у собак, у которых имеется желудочный свищ или денервированные углубления дна желудка и у которых секреция желудочного сока стимулирует ся путем ввода секретогенного агента например, гистамина, пентагастрина, бетанехола или пищи.Испытание на крысах проводится следующим образом,10Самок крыс (весом 200-230 г) анестезируют путем внутримышечного ввода уретана (1,5 г/кг) и в трахею вводят полую хирургическую иглу. Гиб. кую трубку пропускают через пищевод в желудок и укрепляют ее путем стягивания в области шеи, Многодырчатую пластмассовую трубку (диаметрам 3 мм) пропускают в полостную зону желудка через надрез в двенадцатиперсной кишке и закрепляют, привязывая ее посредством хирургической нити к привратнику желудка. Солевой раствор (9 г/л ИаС 1) пропускают через25 желудЬк, посредством вставленной в пищевод полой иглы, со скоростью 7 мл/мин и извлекают его из пилорического отвода через каждые 10 мин и собирают в химических стаканах.30Секреция кислоты стимулируется путем подкожного ввода специфическогоагониста Ндимаприта, вводимогодозой 10 мг/кг, с последующим вливанием 30 мг/кг/ч. Выделение кислотырассчитывается путем титрования20 ммоль гидрата окиси натрия 10 минутных образцов до конечного значения рН 6,4 (выделяемых в течение10 мин),40.Когда секреция достигает постоянного значения (плато на кривой, трипоследовательных показания с расхождением в пределах 5%), испытываемоесоединение вводится путем внутривенной инъекции через полую иглу, введенную в левую наружную яремную вену,Затем измеряют секрецию в течение последующих двух часов. Приготавливаютосновной раствор каждого испытываемого соединения (10 мг/мл в диметилсульфоксиде) и разбавляют соответствующим образом солевым растворомтак, чтобы обеспечивалась возможностьввода в организм дозы 1 мг/кг (диметилсульфоксид (2%).Испытание на собаках с хроническим свищем осуществляют следующимобразом. Испытания проводят на самках собак коротконогой гончей породы весом9-12 кг, имеющих хронический желудочный свищ. В течение ночи их не кормят, но дают воду сколько требуется.В ходе эксперимента собаки находятсяв стоячем положении.При вводе испытываемого соединения путем внутривенной инъекции свищоткрывается и после полного убеждения в том, что базальная секреция непроисходит в течение 30 мин, начинаютосуществлять непрерывное внутривенное вливание секретогенного агента(гистамина, 0,5 мкмоль/кг/ч или пентагастрина, 2 мкг/кг/ч) в солевомрастворе (15 мл/ч). Пробы желудочнойкислоты собирают каждые 15 мин. Измеряют объем каждой пробы, 1-миллиметровую аликвотную пробу титруют донейтральной 100 млмоль ИаОН с цельюопределения концентрации кислоты.Когда достигается постоянная секреция (плато кривой, 1-2 ч), путемвнутривенной инъекции испытываемоесоединение в солевом растворе и пробы кислоты желудочного сока собирают .в течение дальнейших 2-3 ч, в ходечего непрерывно продолжается вливание секретогенного агента,При исследовании испытываемого соединения путем внутрижелудочного ввода после полной убежденности в отсутствии базальной секреции в течение 30 мин испытываемое соединение,содержащееся в 25 мл 0,5%-ной (вес/об)оксипропилметилцеллюлозы и 0,1%-ного (вес/об) Твина 80 в воде (Твин -торговая марка), вливается по каплямв желудок через дозирующую пробку,вставленную в свищ, Спустя один чассвищ снова открывается, и тотчас начинают вливание секретогенного агента, как описано выше. Пробы кислотыжелудочного сока измеряют, как описано выше, и приближение секрециикислоты к постоянному значению сравнивают с приближением секреции кислоты к постоянному значению для контрольного животного, в организм которого вводят путем внутрижелудочноговливания лишь один носитель. При изучении испытываемого соединения, вводимого через рот, это соединение используется в форме желатиновых капсул вместе с 15 мл воды, Через час после ввода свищ открывается и тотчас начинают внутривенное вли 1287747вание секретогенного агента. Пробыжелудочной кислоты измеряют так же,как указано выше, и приближениесекреции кислоты к постоянному значению (к плато кривой) сравнивают с 5приближением секреции для контрольного животного, в которое не вводилось испытываемое соединение,Испытание на собаках с денервированным углублением дна желудка осу 1ществляют следующим образом, Испытания проводят на самцах собак коротконогой гончей породы весом 14-22 кг,Денервированные углубления в областижелезы дна желудка у этих собак получают обычным способом, В течение6 недель животные поправляются отоперации, и в дальнейший период втечение 2-3 мес до обычного использования проводится подготовка таблици нормализация секреторных реакций.Собак не кормят втечение 23 ч передэкспериментом (по желанию, дают воду)и в процессе эксперимента повязку,25которой они перевязаны, расслабляют.После промывки углубления теплой водой нутем подкожной инъекции вливаютгистамин со скоростью 10 мкг/мин.Такая доза агониста приводит к менее,чем максимальному (60-902 от максимального) увеличению выделения кислоты при всех используемых дозах. Выделения желудочного сока из углубления собирают через каждые 15 мин вградуированные стеклянные пробирки 35и измеряют объем секреторных выделений, приближающийся к 0,1 мл, Пробув количестве 500 мкл разбавляют 5 млсолевого раствора и величину рН доводят до 7,0 посредством 100 ммоль 40ИаОН. Общее выделение кислоты рассчитывают как произведение концентрации кислоты на объем выделенного желудочного сока, Испытываемые соединения вводятся внутривенно (0,1 мл/кг)45через лучевую подкожную вену или через рот в виде желатиновой капсулыпосле достижения постоянной секреции(расхождение в трех последовательных показаниях в пределах 10%). Секрецию измеряют в течение трех часовпосле ввода испытываемого соединения.5-13-1 2-(2,2,2-трифторэтил)гуанидино 1 пиразол-илвалерамид вводят путем внутривенной инъекции в группы, включающие две анестезированные крысы и четыре не потерявшие сознание мыши, дозами, которые соответственно в 10 раз и в 100 раз превышают дозу (в мг/кг), приводящую к примерно 50 Х-ному ингибированию секреции желудочного сока в анестезированной крысе. Никаких токсических симптом у животных с указанными введенными в них дозами не обнаружено.5-3- 2-(2, 2, 2-трифторэтил) -гуанидинопиразол-ил валерамид может использоваться в форме фармацевтической композиции, которая включает гуанидиновое производное в сочетании с нетоксичным фармацевтически пригодным разбавителем или носителем.Эта фармацеьтическая композиция может находиться, например, в форме пригодной для ввода через рот, через прямую кишку, парэнтерально или пригодной для местного применения: для этого она может быть приготовлена уже известными способами в форме, например, таблеток, капсул, водных или масляных растворов или суспензий, эмульсий, диспергируемых порошков, свечей, стерильно вводимых путем инъекции водных или масляных растворов или суспензий, галей, кремов, мазей или лосьенов.Наряду с гуанидиновым производным фармацевтическая композиция, соот-. ветствующая изобретению, предназначенная для ввода через рот, прямую кишку или парэнтерально, может содержать совместно вводимое (или вводимые) одно или несколько лекарств, выбранных из числа нейтрализующих кислоту препаратов, таких как смеси гидрат окиси алюминия - гидрат окиси магния, антипепсиновых соединениипепстатин, других антагонистов гис тамина Н, - циметидин или ранитидин, лекарств для вылечивания язв, карбоноксолон или соли висмута, противовоспалительных агентов - ибупрофен, индометацин, напроксен или аспирин, простагландинов - 16,16 в диметилпростагландин Ер классических антигистаминов (антагонистов гистамина Н) - мепирамин или дифенгидрамин, антихолергических агентов атропин или пропантелинбромид, успокаивающих средств - диазепам,.хлордиазопоксид или фенобарбитал.Фармацевтическая композиция, предназначенная для локального применения,может содержать также наряду с гуанидиновым производным 5-3- 2-(2,2,2- трирторэтип)-туанипино 1 пираэоп-нп).10 1287747 валерамидом одно или несколько классических антигистаминов (антагонистов гистамина Н), например мепирамин или дифенгидрамин, и/или одноили несколько стероидных противовоспалительных агентов, например флуоцинолон или триамцинолон. Составитель И.КорсаковаРедактор В.Ковтун Техред И.Попович Корректор Н.Король Заказ 7732/61 Тираж 371 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Композиция, предназначенная для локального применения, может включать 010 от 1 до 10 Е (вес/вес) гуанидинового производного. Предпочтительная Фармацевтическая композиция пригодна для ввода в организм через рот в виде единой дозы в форме, например, 15 таблетки или капсулы, содержащей от 5 до 500 мг гуанидинового производного, или пригодна для внутривенной, подкожной или внутримышечной инъекции в форме,; например, стерильной 20 жидкости, содержащей от 0,1 Е до 107. (вес/вес) гуанидинового производного,Фармацевтическая композиция обыч-. но вводится в организм человека для лечения пептических язв и других заболеваний, вызванных раздражением за счет кислотности желудка, причем введение в организм данной композиции осуществляется таким же образом,как и введение циметидина, причем приопределении дозы вводимого препаратаучитывается сила действия и продолжительность действия гуанидиновогопроизводного, соответствующего данному изобретению, в сравнении с циметидином. Так, каждый пациент приприеме дозы препарата через рот должен получать (в дозированной форме)от 5 до 500 мг и предпочтительно от10 до 100 мг гуанидинового производного, при приеме дозы препарата путем внутривенной, подкожной иливнутримышечной инъекции он должен получать (в дозированной форме) 0,5 мг 50 мг, предпочтительно 2-20 мг, гуанидинового производного, причем данная композиция вводится в организм1-4 раза и предпочтительно один разв день. Доза препарата, вводимаячерез прямую кишку, приблизительнотакая же, как и доза, вводимая черезрот. Данная композиция может вводиться в организм менее часто, когдаона содержит количество гуанидинового производного кратное тому, котороеэффективно при вводе 1-4 раза в день.