Способ получения пептидов

(22) Заявлено 29 л 672 (21) 1803547/23-4 (51 (Ю) Приоритет 010771 (23) М. КлС 07 С 103/52 асударственнын намитетСвввта а(нннстрва СССРнв делам изобретенийн втфрытий(45) Дата опубликова описания 15.1 2,77 Иностранцыольфганг Кениг, Рольф Гейгер и Ханс ВиссманнИностранная фирмаХест ЛГфф(71) Заявите 54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДО У О Н У Он СН-С) -К-СН-С О й (Ц)У имеют укаэанные знагде п 1,ния,Й представляет соб три-, -тетра или -пента-, х -нитрофенил, или хлор-нитр таток с защищенным при нео аминокислотами или пептида формулы й ди-, орфенил, фенил- о ходимостми общей Н У О Н У 6 Н8Н С )щт (1)Оболее т и (-ен - сну -т указанные значенияачает гидроксильную груп.о-аралкил, амииогруппч где тп,остатки имею ю оэ.пу, о-алкил, 500пиооглю Изобретение относится к улучшению способа синтеза пептидов иэ Фениловых эфиров аминокислот или пептидов, которые находят применение в медицине.Известны различные способы синтеза пептидов, исходя иэ фениловых эфиров аминокислот или пептидов, имеющие тот недостаток, что в ряде случаев велико время проведения реакции. Так, время проведения реакции -нитрофенилового эфира трет-бутилоксикарбонил- заец - Рте с трет-бутиловым эфиром составляет 70 час. Известен также спо соб ускорения конденсации с помощью имидазола. Однако при этом аминолиз активированных эфиров сопровождается рацемизацией. о - оралоПредлагается неизвестная ранеемодификация получения защищенных петидов общей ФормулыНУ О НУ ОКУ О НУ ОНН8(тт-(КН-С) -К-СН-С-Н-СН-С-Ф-Стпгде тп - число от 0 дот - число от 0 до и Ч - аминоэашитная группа илминовый остаток; У - низ)ний алтцц 10 аыа остаток,которыйможет быть разветвленным и/илйзащищенным при необходимости защищенным ОН,-МНЕ, й(-сООН,-ОЮНа, -гуанидин,-арил, -имидазолил-индолил остатками 1причем группа(-ИН-Я) также может овначать пирролидинил - остаток,путем взаимодействия защищеннойаминокислоты или защищенного пептидаформулытриазола вместо производного хиназолина.П р и м е р 9. Синтез 2-Азр(ОЬи)-идее - ае-оеи-тз р- ьец- (ее - ль-ть(во) оьз1. Получение исходного веществаСН СООН.Н -Рпе-ЧаЕ-ЧЕц-т р-заец-)ее-вя.ТЬВ 4 аьА.2-яьл-ТИч(Ви)- ОВи.42,85 г (161 ммолей) 2 - Аьа - СН,43 г (161 ммолей) маслянного НСР-Н-ТИч(Вц)-ОВц 1, полученного путем каталитического гидрирования 2- ТЬч(вцик)-ОВц С)1при добавлении метанольного НСС прирН 4,5 и 21,75 г (161 ммолей) 1-гидроксибензотриазола растворяют в 325 млдиметилформамида. Добавляют 21 млК -этилморфолина и при 0 охлажденный раствор 35,45 г дициклогексилкарбодиимида в 80 мл диметилформамида. Перемешивают 1 час при Оф и 1 часпри комнатной температуре, отсасываютосадок и концентрируют фильтрат в глубоком вакууме . Остаток распределяютмежду уксусным эфиром и растворомКаНСОв. Срганическую фазу экстрагируют в делйтельной воронке с 2,5 Ъным раствором КН 504 , насыщаемым раствором МаНСОЗ и водой, сушат сульфатом натрия и концентрируют. Растворяют с петролейным эфиром и отсасывают,Выход 65,8 г, т.пл . 110-115 . Перекристаллизовывают из смеси уксусный 3 Оэфир/петролейный эфир, Выход продукта52,4 (68 от теоретического);т.пл. 120-122 ;с(.1 - 7,6 (с 1,метанол).Б.НСЕН-Азп -тМ(Вш) -ОвцС. ИК раствору 44,7 г (93,2 ммоля)2-Азй - ТИУ(Вш)-ОВи 1 в 300 мл метанола добавляют немного Рд(ОН)вд 504катализатора. При перемешивании черезэту реакционную смесь пропускают водород, причем путем прикапывания 1 н.метанольной соляной кислоты с помощьюавтотитратора выдерживают рН 4,5.После отфильтровывают от нерастворимых и на ночь устанавливают в холодильник. На следующий день отсасывают выпавший осадок и промывают эфиром.Выход продукта 33,65 г (95,6 от теоретического); т,пл. 110-113 ; с(.2,6 (с1, метанол).а вВычислено, Ъ: С 50,32; Н 8,45;М 11,01.С,БЙзМО 5 СЮ (мол. в. 382 ),Найдено, Ъ: С 50,0 р Н 9,0 р И 10,9.В. 2-)Ее -Лви - тич(Вац - Овы Ск раствору 21,8 г (82 ммоля)2-еа-бн,6631, 3 Г (82 ммоля) НСЕ-Май-ТИч(вцик)ОВщгидрокситриазола и 10,7 мл М -этилморфолина в 150 мл диметилформамидадобавляют при 0 охлажденный раствор18,1 г дициклогексилкарбодиимида в 670 мл диметилформамида. Перемешивают1 час при 0 и 1 час при комнатнойтемпературе по примеру А. Конечныйпродукт растворяют в 150 мл уксусного эфира, отфильтровывают нераствори мые остатки и размешивают в 750 мл петролейного эфира. Выход продукта 42,37 г (87 от теоретического); т.пл. 144-146 ; аС - 20,5 (с=1, метанол) .Вычислено, : С 60,82; Н 8,14;М 9,46С 40 Н 4 М, О (мс л. в. 592, 75)Найдено, В: С 60,9; Н 8,4; К 9,2.Г.НСЕ НЕе -АЮ - тЬ(Вц) - ОВц38,6 г (65,2 ммолей)2-1 ЕЕ -Жю-туч (Вц -Ови+) каталитически гидрируют по примеру Б в метаноле, Вещество растворимо в эфире и под высоким вакуумом дает аморфный продукт. Выход продукта 33,2 г (100 от теоретического); с(. - 5,9 (с1, метанол).20Вычислено, : С 53,37; Н 8,76;М 11,31.С 22 Н 4 С 1 М(Э 6 (мол. В е 495,07)Найдено, : С 53,0; Н 9,0; И 10,9.Д. 2-Ьеи -1 се -Язп -туч(Ва) ОВиК раствору 16,4 г (61,8 ммоля)2 - ьел - ОН, 30,6 г (61,8 ммоля) НСЕН -1 СЕ-АЭИ - ТЬч(Ви) - ОВО8,34 г 1-гидроксибензотриазола и 8,1 млИ -этилморфолина в 150 мл диметилФормамида добавляют при 0 холодный раствор 13,6 г дициклогексилкарбодиимида в 60 мл диметилформамида. Перемешивают 1 час при 0 и 1 час при комнатной температуре и перерабатывают по примеру А, Вещество растирают с петролейным эфиром и отсасывают. Выход 39,3 г; тпл.173-176 . Высаживают из смеси уксусный эфир/петролейный эфир. Выход продукта 37,5 г (86 от теоретического); т,пл . 173-176( с.о - 34, 3 (с1, метанол) .ЭВычислено, : С 61,26; Н 8,42;И 9,92Сьь Н 9 ИОв (мол. в, 705,9)Найдено, В: С 61,4; Н 8,7; К 9,9.Е. НСЕ - Н - ЬетРе - Ази - ти(Ви)- - ОВц35, 2 г (50 ммолей) 2- реп - Ие - АъвЬ-( ) -ОВц гидрируют по примеру Б каталитически в метаноле. Вещество кристаллизируется при растирании с эфиром, Выход продукта 28,6 г (94 от теоретического); т.пл. 192-193 (разложение);сС ) = - 17,9 (с = 1, метанол).Вычислено, : С 55,26; Н 8,96;И 11,51.С 8 Н, С 1 МзО (мол. в. 608).Найдено, В: С 55,3; Н 9,0; К 11. 4П. 2-тчр- ЬЕП - Ие -АЗП- Тьч(Ви)-ОВаК раствору 26,2 г ( 43,1 ммоля) НСЕ - Н-ЬЕп- (ЕЕ - МЯ- Тич (Ви) - ОВЦф 14, 6 Г (43, 1 ммоля) 2-Тчр - ОН 5,82 г 1- -гидроксибензотриазола и 5,6 мл этилморфолина в 150 мл диметилформамида добавляют при 0 холодный раствор 9,5 г дициклогексилкарбодиимида в 60 мл диметилформамида. Перемеши 51185223240,86 г (5, 3 ммоля) 3-гидрокси-окси- -3,4-дигидрохиназолина в 2,66 г (5,3 ммоля) Е- Аза(ОВ) -ОТ р . После 5 мин перемешивайия концентрируют и остаток растирают с 2 н.содовым 5 раствором, отсасывают и промывают водой. Фильтровальный остаток отпаривают с метанолом, Труднорастворимый остаток : 5,3 г, т.пл. 246-248 ф(разлохение) 1 из Фильтрата : 0,5 гу т.пл. 244-246 (разложение);(35:-15,0 (с = 1, диметилацетамид) .Общий выход продукта 5,8 г (76,4 от теоретического)Вычислено, : С 61,8; Н 7,57;Х 11,695С у 4 Нюе М 1101 (мол. в. 1437, 7),Найдено, : С 61,1; Н 7,6; К 11,7.Такой же результат получают при применении 1-гидрокси-метил-пири- дона, 1-гидрокси-метокси-бензотриазола или 1-гидрокси-метил-бензотриазола вместо производного хинаэолина.П р и м е р 10. СинтезЕ-Рие-Чай-ОА 4 е2 г Е-фенилаланин-поли-гидрок си-нитростирольной смолы (содержит 3 ммоля 2 -фенилаланина) суспендируют в 5 мл диметилформамида и смешивают с 162 мг (1 ммоля) 3-гидрокси- -4-окси,4-дигидрохиназолина, 168 мг 30 (1 ммоль) НСР Н-ЧаВ-Оме и 0,18 млй -этилморфолина. Перемешивают 15 мин, отсасывают, промывают с диметилформамидом, концентрируют Фильтрат и остаток распределяют между ук сусным эфиром и раствором бикарбоната натрия. Уксусноэфирную Фазу промывают с 2 н.НС 6, раствором бикарбоната натрия и водой, сушат с сульфатом натрия и концентрируют. Сстаток растворяют 40 с петролейным эфиром, отсасывают и сушатВыход продукта 390 мг (95 от теоретического); т.пл, 115П р и м е р 11. 2 - Т 9 ч -проинсулин 5 - (31 - 63) -триаконтатрипептид. 4540 мг (10 ммолей) триаконтатрипептид - трифторацетата, превращают в 1,8 мл 90-ного диметилформамнда с 26 мг (60 ммолей)2 -1 дч-Ойр в присутствии 1,35 мг (10 ммолей) 1-гид- щ роксибензотриазола. Через 15 мин высаживают эфиром и отфильтровывают осадок. После промывки с эфиром и метиленхлоридом получают 36 мг реакционного продукта. 85Содержание тирозина 1. Аминокислотный анализ: 1,1 Мо 11. И0,72 в н-бутанол(пиридин)уксусная кислота вода) 30;6:20:24/, хроматография на бумаге, возникающая, 111 триаконтапаптида равен 0 22.ф . Яве)П- р и м е р 12.1 Ч -(Вос-Ьеп-Рие)1 М.8смешивают с 2 мл диметилформамида с 16, 7 мг. (30 мо 1) Вос-Ьеп - Рие -От ебср и 2,7 мг (20 МО 1) 1-гидроксибензотриазола. Перемешивают 10 мин при комнатной температуре, высаживают эфиром, отфильтровывают осадок и промывают его эфиром. Выход 117 мг.Вычислено, : Ьеп 7 РИе 4.Найдено, : Ьеи 6,98; РАЗ,98, Миграционное расстояние в электрофорезе на бумаге при рН 2,2 : 0,76 х инсулин (Вос - инсулин : 0,84 х инсулин)После отщепления защитных групп с помощью одночасовой обработки с трифторуксусной кислотой и осаждения с эфиром соединение мигрирует в электрофорезе на бумаге как инсулин. Реакционное время без добавки 1-гидроксибензотриазола составляет 3 часа и ведет частично к сшинке.Такой же результат получают при применении 1-гидрокси-метил-пиридона, 1-гидрокси-метокси-бензотриазола или 1-гидрокси-метил-бензотриазола вместо 1-гидрокси-бензотриазола.П Р и м е р 13. Вос-РАЬи дч-Ъоч-ми-Цбл(ОВи 1) -Н(з-РИе-АчЯ- Тчр - еЕу-ОН 4 Н О5,36 г (4 ммоля) Н-Туч-Зеч-ме 1-дРи- -(ОВиЦ-н(з - Рие - ячо- тчр- рб-он дн.о превращают в 50 мл диметилформамида с 1,84 г (5 ммолей). Вос-,.е. 4 И- ОТср в пРисУтствии 540 мг (4 ммоля) 1-гидрокси-бензотриазола. Через 15 мин смесью уксусный эфир/эфир высахинают 5,65 г (94) почти чистого хроматографически реакционного продукта, который для полной очистки перекристаллизовывают из 400 мл 60-ного метанола. Выхол продукта 4,92 г (81 от теоретического). Соединение идентично полученному без добавки 1-гидроксибензотриазола, однако время реакции сократилось с 20 час до 15 мин. хь 41 ьПример 14Мпента ( Ьеи - рие ) трипсинкалликреин.- ингибитор,90 мг трипсиН-калликреин-ингибитора из органов крупного рогатого скота суспендируют н 2 мл диметилформамида. К этому добавляют 56 мг Вос- .еи - Рие - Отр, 13 мг 1-гидроксибензотриазола. При перемешивании добавляют воду (всего 0 51 мл) до полного растнорения. Перемешивают еще 15 мин, концентрируют в глубоком вакууме и растирают остаток с абсолютным тетрагидрофураном. Осадок отсасывают и сушат. Выход 110 мг.95,7 мг вещества растворяют в 2 мл трифторуксусной кислоты. Позволяют стоять 30 мин при комнатной температуре, концентрируют и осадок распределяют между водой и эфиром, переме шивают нодную фазу с АтЬеоЬСе %-45(с= очка р 75,0т 255 ложения, С т 24 От 165 онкосл ографи ная хром 3 пятна, из О которых одно идентично с методом Ш днообразый и идеичный сетодом Ш ый Аминокислотныйанализ ЦЕу 1,ЧаЕ о,(ее о,12 час, при 110 С ЦЕЧ 1 о ЧОЕ 0,4 (Ее 0,3 ЦЕу 1,О ЧаЕ 0,9 е О,тоду пептицидно фазе без добав,4-дигидрохинственно и коедыдущему,я без добав- -дигидроксинотдельности 35следующие реРодукта: 420 мг,27 (с: 0,2 мокаче н пр дитс -8,4 8 В а го принятым мето 50 П, Получение пого синтеза в твердоки 3-гидрокси-оксазолина.Способ полученияличественно идентичоднако реакция провки 3-гидрокси-оксазолина согласно и.при этом опыте полузультаты. Выход сырт.пл. от 96; 0 1ля) . С помощью распределительной хроматографии Ьерпадех (.Н 20 получали лишь 84 мг продукта со следующимихарактеристиками : т,пл. от 165(с0,25, вода). При тонкослойнойхроматографии продукт ведет себя ненормально. Аминокислотный анализ приведен в табл. 4.Ш. Получение по: общедам.А. Вос- Еу - ЕЕе -ОЕЕ СНА,К раствору 35 г (0,2 моля) Воску -ОН, 38,4,г (0,2 моля)НСЕ Н-ЕЕе-оме27 г (0,2 моля) е 1-гидроксибензотрив 350 мл диметилформамида дояют 26 мл М -этилморфолина ипри 0 раствор 44 г дициклогексилкарбоциимида в 50 мл диметилформамида.Перемешивают 1 час при Оф и один часпри комнатной температуре, отсасывают осадоки фильтрат концентрируют.Остаток распределяют между уксуснымэфиром и раствором бикарбоната натрияУксусно-эфирную фазу экстрагируют путем встряхивания с раствором КНЬО 4,раствором ЕЕаНСО и водой, сушат с сульфатом натрия и концентрируют. Выход масляного продукта 61,6 г.Масло растворяют в уксусном эфире и хроматографируют через колонку со 185 г основного А 1 О (ФоеЕт, активная ступень 1). Элюат уксусного эфира концентрируют, выход 55,8 г.Полученное масло растворяют в 250 мл смеси из диоксана и воды (8:2) и смешивают с небольшим количеством гимолфталеина. Раствор титруют с 1 н. раствором едкого натра до тех пор, пока раствор не станет стойко-голубым. Требуется 179 мл 1 н. раствора едкого натра. Затем нейтрализуют раствором КНЯО 4 , и реакционную смесь сгущают. Остаток растворяют в воде, перемешивают с уксусным эфиром, при ледяном охлаждении подкисляют до рН 2 - 3 с помощью 2 н. Н 5 04 и перемешивают. Уксусноэфирную фазу отделяют, один раз промывают водой, сушат над сульфатом натрия и концентрируют. Остаток растворяют в эфире и смешивают с циклогексиламином до о новной реакции. Затем ставят в лед, отсасывают, промывают эфиром и сушат. Выход продукта 55,6 г (71,8% от теоретического); т.пл. 198-200"С.Для дальнейшей очистки вещество растворяют в 100 мл метанола и смешивают с 1,5 мл эфира и охлаждают, Через 1 час отсасывают. Выход продукта 45,6 г (59% от теоретического; т.пл. 204-205 СЕ б.3 = - 17,4,ХМ-ОН формула изобретения 500 Х М-ОН (Ч) ,р Редактор Л. Джарагетти Заказ 753/1333 Тираж 557 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5филиал ППП Патент, г. Ужгород, Ул. Проектная, 4 ной воронке, каждый раз со 100 млгексана, и лодкисляют концентрированной соляной кислотой, до рН 2. Перемешивают 1 час в ледяной бане, хорошоотсасывают осадок и дважды основательно промывают его водой по 300 мл каждый раз. Выход 61,5 г, т.пл. 90 С.Другие 12 г равного продукта можнополучить путем экстракции водногораствора с метиленхлоридом.П р и м е р 1 В. 1-гидрокси,6 диметил,5-дихлор-пиридон,Растворяют 20 г 1-гидрокси,6 диметил-пиридона в смеси из 75 млконцентрированной соляной кислоты и60 .мл воды и при 10-15 фС пропускают21,6 г хлора, затем еще перемешивают1 час, отсасывают, промывают водойи сушат в вакууме. Выход 22,9 г,т.пл. 213 фС. При кристаллизации изацетонитрила т.пл. 216 С.Р 20 Сгособ получения пептидов общейформулыНУ (1 НУ 0 НУ О (У 0НИИ1 ИЧСН-С) -И-СН-С-Н-СН-С--СИ-С) Ыгде ш - число от 0 до 10;ю - число от 0 до и более Ч - аминозащитная группа или пироглютаминовын остаток;У - низший алкиловыи сста- ,ц ток, который может быть разветвленным и/или замещенным ь случае необходимости защищенным -ОН, - й Н, - 3 Н, -СООН, -СОМН 1 , -гуанидин, -арйл, -имидазолил, -нндолил-остатками, при чем группа ( - М Н-СНУ) также может означать пиролидил-остаток, путем взаимодействия защищенной аминокислоты или защищенного пептида форму 45 Н У 0 Н У О 1 11 1 1 И Ч-(К-СН) - -М:СН-С-О(1)где и,; Ч и У имеют укаэанные значения, Й - представляет собой ди-, три-, тетра- или пентахлорфенил; -нитрофенил или хлор-нитрофенил-осататок с защищенным в случае необходимости аминокислотами или пептидами общей формулы гдето, и У ( - К Н -СНУ-) остатки имеют указанные значения;М означает гидрокскльную группу,О-алкил, О-аралкил, аминогруппу илиэфиро- или амнно-связанный полимерныйноситель, замещенный алкилом, аралкилом или арилом,с последующим выделением целевыхпродуктов известными приемами, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что процессведут в присутствии соединения общейформулы в которой Х означает группу С-О, С- Ь или - й - и Х и К являются членами 5-б-членного замещенного гетеро- циклического кольца, анналированного с бензольным ядром и/или содержащего 1 или 2 других гетероатома и значение рК которых 3,7-4,2.Приоритет по признакам:01.07,71взаимодействие проводят при добавлении 1-оксибензотриазола;20.0172взаимодействие проводят при добавлении соединения обцей формулы где Х означает группу С-О, Сили - М - и в которой Х и И являются членами 5-б-членного эамещенного гетероциклического кольца, аннелированного с бенэольным кольцом и/или содержащего 1 или 2 других гетероатома и значение рК 3,7-4,2. Составитель Я. Соколов Техред О. Луговая Корректор А.Власенкоили эфиро- или амина-связанный полимерный носитель, замещенный алкилом, аралкилом или арилом,Способ заключается в том, чтовзаимодействие проводят при добавлении соединений общей формулыХ/К-ОН,ЬЧ)в которой Х означает группу С-О,С- или - М - и Х и й являются членами 5-6-членного гетероциклическогокольца, аннелированного с бензольнымядром и/или содержащего 1 или 2 других.гетероатома; их рК составляет3,7 - 4,2.Продукты выделяют известными способами.Установление значений рК может20производиться в 0,5 М растворе в смеси из б ч. диметилового эФира диэтиленгликоля и 4 ч. воды при 30 С, Еслизначение рК соединений формУлы 1 У втаких условиях выше ( М -гидроксипиперидин) или ниже (1-окси-нитро-бен 25эотриазол), то их положительное действие снижается. Обычно соединениеобщей формулы 1 Ч берут в количествеот 0,1 до примерно 1 экв однакоможно также использовать меньшие илибольшие количества.Пригодны следующие соединения формулы 1 Ч: 1-гидроксибензотриазолы, например 1-гидрокси,б-диметилбенэотриазол, 1-гидрокси-метилбенэотри- Заазол, 1-гидрокси-б-метил-бензотриазол, 1-гидрокси-метокси-бензотриазол, 1-гидрокси-метил-бензотриазол, 1-гидрокси-б-бром-бензотриазол,1-гидрокси-б-хлор-бенэотриазол, 1- 40-гидрокси-хлор-бензотриазол, циклические гидроксамовые кислоты, например пиридоны: 1-гидрокси-пиридон,1-гидрокси-б-метил-пирицон, 1-гидрокси,6-диметил-пиридон, 1-гидрокси-з,4,б-триметил-пиридон, 1-гидрокси,5-дихлор,6-диметил-пиридон, М -гидрокси-сукцинимид или1-гидрокси-окси,3-дигидроиндолы,как 1-гидрокси-б-хлор-окси,3-ди- щгидро-индол, циклические гидроксамовые кислоты с азотом в качестве гетероатома в кольце, например 3-гидрокси-окси,4-дигидрохиназолин,З-гидрокси-метил-окси,4-дигид-рохинаэолин, З-гидрокси-оксо,4- -дигидро,2,3-бензотриазин, 3-гидрокси-окси-фенил,4- дигидрохинаксолин, циклические гидроксамовые кислоты с кислородом или серой в качестве гетероатома в кольце, напримерпригодные замешенные 4-гидрокси-З,4- -дигидро-З-окси,4,2-бензо-оксазины и4-гидрокси,4-дигидро-З-окси,4,2- -бензотриаэины, или циклические тиогидроксамовые кислоты, например 3- 65-гидрокси-метил,3-дигидро-триаэол" 2-тион.В качестве заместителей соединений формулы 1 Ч могут быть использованы алкил- или алкокси-остатки с 1-3 С-атомами, хлор.Аминокомпонент Ш может использоваться либо свободным, либо как соль минеральных кислот сильных или слабых органических кислот, например и -толуолсульфо-, трифторуксусной или уксусной кислоты. Если имеется солеобразование с сильными кислотами, то для освобождения аминогруппы должны добавляться третичные органические основания, как триэтиламин или М этилморфолин. Также возможйо применение соединений обшей Формулы )у в виде соли, например натриевой соли 1-гидроксибензотриазола. При этом одновременно освобождается аминогруппа (образование натрневой соли) и образуется несбходимое для катализа 1-гидроксисоединение формулы 1 ЧВ качестве защитной группыЪ могут быть использованы обычные в химии пептидов защитные группы. Предпочтительно применяют аралкилоксикарбонил, например бензилоксикарбонил- или треталкилоксикарбонил-, например трет-бутилоксикарбонил-остатки.ОН-группа у серина, треонина или тирозина может остаться незащищенной. Ио она также может защищаться с помощью пригодных групп, например бутил-или бенэилгрупп.Для получения цистеин- и цистинпептидов должна защищаться ЯН -группа цистеина при помощи обычных в химии пептидов 51( -защитных групп, или проводиться 1 реакция симметричныхили несимметричных цистеинпептидов,которые затем могут восстанавливаться до цистеинпептидов.М означает в карбонильном компо. ненте общей формулы Й 1 полимерныйноситель, который эфирно- или амидообразно связан с карбоксильной группой. В качестве пригодных полимеров можно использовать сшитый с 1-2 Ъ дивинилбензола полистирол, сшитые йе. -нолформальдегидные конденсационныепродукты, сшитые фенолэфир-формальдегидные конденсационные продукты, покрытые с химически связанным полистиролом пластмассовые поверхности,полибензиловые смолы или фенилзамещенные стеклянные поверхности. Пригодными группами сцепления являются,например,галогенметил-, галогенацетил- или аминобензгидрилгруппы.Взаимодействие обычно приводят в растворителях, например диметилформамиде, диметилацетамиде, тетраметилмочевине, или 118. -диметиламиде фосфорной кислоты, в данном случае при добавлении небольшого количестваоводы. Реакционная температура 0-40преимущественно комнатная.Обработка обычно происходит просто,так как М -гидроксисоединения общейформулы 1 Ч , как 1-гидроксибензотриазол или З-гидрокси-окси,4-дигидрохинаэолин, могут извлекаться экстракцней при встряхивании в делительнойворонке с карбонатом натрия или калияили с содовым раствором. Другие со- Оединения, например 1-гидрокси, пиридон или З-гидрокси-метил,3-дигидро-триаэол-тион, растворяются в воде и могут легко удаляться. М -гидроксисоединения из тяжелорастворимыхпроизводных пептицидов могут экстрагироваться изопропанолом, спиртом,метанолом, тетрагидрофураном или горячей водой. Возникающие при взаимодействии фенолы имеют своиства растворения, аналогичные М -гидроксисоединениям и выделяются с ними,При М -ацил-пептид- активных эфирах добавление М -гидроксисоединений общей Формулы 1 Ч не вызывает повышения рацемизации. Как при нитрофенил-, так и при трихлорфенил-эфирах нельзя увидеть рацемизации ни сдобавкой, ни без добавки М -гидроксисоединений. По другому ведет себяпептахлорфениловый эфир, который даетпримерно до 80 рацемизированноготрипептида. Путем добавления 1-гидроксибензотриазола эта сильная степень рацемизации могла быть сниженана 26-54. При добавлении 2-гидроксипиридин-натриевой соли можно увидетьобратный эффект: рацемизация еще более усиливалась,Путем добавления М -гидроксисоединений общей формулы Й можно преодолевать пространственное затруднение, которое может мешать взаимодействию с активированными эфирами, например при взаимодействии Мр 5 :изолейцинактивных эфиров с Н- СУСЛ Т - 5 е - 45Ьеи - ОН . Взаимодействие Мрз -1 Ье-ОТс р с Н-СЧ 5(Т)-зе - ьеп - Онв диметилформамиде не может проводиться до конца. Через 5 недель опытпрерывается, так как при помощи тонкослойной хроматографии наряду с конечным продуктом и исходным материалом обнаружены многие продукты разложения. Напротив, если добавлен, например, 1-гидроксибензотриазол, 3 гидрокси-окси,4-дигидрохиназолинили 1-гидрокси-пиридон, реакция заканчивается уже через 15-20 час.П р и м е ч а н и е. Вос-трет-бутилоксикарбонил-;Е - бензилоксикарбонил;Мр 5- о-нитрофенилсульфенил;ОВй- трет-бутиловый эфирОМе - метиловый эфир;ОВЙ - бензиловый эфирОКр - р-нитрофениловый эФир; б 5О%р - ОР- ОБя М - ТИ - Виф - МЬЬ - СНА 2,4,5-трихлорфениловый эфир;пентахлорфениловый эфир;гидроксисукцинимид-эфир;тритил;трет-бутил-;4,4 -диметокси-бенагидрил;.циклогексиламин Применение соединений формулы ф может делать их полезными также в методах пептидной конденсации в твердой фазе. Например, из К -защищенных аминокислот и поли-гидрокси-нитро-стирольной смолы можно получатьсоответствующие нерастворимые эфиры,которые затем реагируют с растворимыми аминосоединениями в соответствующие амиды или пептиды, Использованием К -гидроксисоединений может быть значительно сокращено время реакции. При измененном методе Марри- филда в твердой фазе, при котором часто используются М -защищенные активные эфиры аминокислот, например) нитрофениловый эфир, добавки повышают выход продукта и сокращают реакционное время.В качестве структурных звеньев пептидов принимаются во внимание все аминокислоты в их Ь -или П -форме, встречающиеся в естественных пептидах.Также возможно применение Р -аминокислот, например р -аланина, илидругих, только синтетически или полу- синтетически доступных аминокислот, например Ы.-метил-аланина, о -метил,4-диокси- Ь -фенилаланина или р -хлораланина. Применение М гидроксисоединений в названных сильнополярных растворителях приводит к гелеобразованию, которые из-за их хороших свойств растворения удобны при синтезе высших пептидов.П р и м е р 1. Определение периода полураспада при синтезе 2"Ча 1циклогекснламида из молярных количествЕ= Ча 1-" ОКр и циклогексиламина при добавлении различных К -гидроксисоединений и зависимости периода полураспада от рК-значения М -гидроксисоединений.А. Установление периода полураспада.Раствор 1 ; 0,5 нмоля циклогексиламина, 0,5 нмоля р-нитрофенола и 1,0 нмоль М -гидроксисоединения на 1 мл диметилформамида.Раствор Й : 1,0 нмоль р-нитрофенола на 1 мл диметилформамида.Раствор 10 : 1,0 нмоль К -гидроксисоедннения на 1 мл диметилформамидаСравнивают УФ-кривые (область 330- 300 м) растворов, Й и Й, чтобы обнаружить благоприятные длины волн для измерения р-нитрофенола. При этой длине волны измеряется экстинкция. К511852 Таблица 1 Время, мин Соединение Без добавки 112,0 125,0 й -гидроксипиперидин 19,0 1,9 0,25 4,10 4,09 14,8 4,09 5,9 4,08 3,2 1-Гидрокси-пиридон 4,08 1,3 4,08 4,05 4,0 4,05 1,5 4 ю 05 60,0 4,04 4,8 2,1 2,8 4,02 полученному значению раствора 1 прибавляются 50 экстинкции раствора 1 ммоля 2 - ЧАР - Ой(о и 1 имая триэтиламина в каждом миллилитре рас" творителя при выбранной длине волн, Сумма этих обеих экстинкций представ.- ляет экстинкцию, при которой взаимо-; действовала половина Е; ЧоР - ОИр с циклогексиламином.УФ-спектры измеряли при 21 С на30 аппарате фВесктапп ТК 1 А, Вещества растворены в диметилформамиде.Б. Измерение периода полураспада.Для кинетического измерения периода полураспада Т 1/2 измеряли раствор 1 нмоля 2- ЧаР - Омр, 1 нмоля циклсгексиламина и 1 нмоля И -гид. роксисоединения в каждом миллилитре растворителя при определенной в при- ЯО мере А длине волны. Время, за которое достигается в пункте А установ 1-Гидрокси-метил-б-изопропилпиридон З-Гидрокси-метил-окси,4 дигидрохиназолин З-Гидрокси-окси,4 дигидрокси-хиназолин 1"Гидрокси,4,б-триметил-пиридон1-Гидрокси,6-диметил-пиридон1-Гидрокси-метил-пиридон З-Гидрокси-метил,3-дигидрокситиазол-тион 1-Гидрокси,5-дихлор,б-диметил -2-пиридон 1-Гидрокси-окси,3-дигидро-бклор-индол уксусная кислота (для сравнения)И -Гидроксисукцинимид1-Гидрокси,б-диметил-бензотриаэол 1-1 идрокси-метил-бензотриазол ление величины, соответствует периоду полураспада реакции.В. Измерение рК- значения в 0,5 М растворе (диметиловый эфир диэтилен" гликоля/вода в соотношении б г 4)при 300,5 нмоля вещества растворяют в смеси из б мл диметилового эфира диэтиленгликоля, 2,5 мл 0,1 н,едкого натра и 1,5 мп воды нагревают в термостате до 30 , Одностержневым стеклянным электродом потенциометрически измеряют рН. По приблизительной формуле р 1. - рК - йц Ф. (1 - К для К= 0,5 ,рК а рй. Измеренное рН-.значение пред" ставляет собой рК-значение этого соепинения.Г. Сравнение периодов полураспада при синтезе Е . Чо 0 циклогексиламида из молярных количеств й-УаР-ОМр и циклогексиламина с рК-значениями добавленных М -гидроксисоединений приведено в табл. 1.,-окси ин 1,0 Гидрокси-пири ми интез Мрз- Йе - Сц комнатной т осадок и фи таток перек пропанола.Ирз сРе 5. ОТ; т.пл ср97 0; т.пл. 105-1 чЦ - Яеч- Ьей - О Н- Сца (Тч) - Яеч ммолей) 1-гидр иазола раствор В. Мр -182,9 гНОи 8 ммолей мг (5 бензот- Ьеиоксияют 5,б-диметил К раствору 105 мл (0,5 ммолей)НСЕ Н-ЧоЕ-ОВи в 2,5 мл 0,2 МК-этилморфолин/диметилацетамид раствора добавляют катализирующую добавку (1-гидроксибензотриазол или 2- -гидрокси-пиридина натриевую соль) и 0,5 ммоля соответствующего Вос- реп-РМ- активного эфира (250 мл Вос-ахеи-Рпе-ОМР1 31 3 мг Вос- (.еи - Р пе - ОР, 279 мгср Вос- Ьеь -ОТ ). Оставляют стоять опсрределенное время, разбавляют 50 мл ук 1-Гидрокси-бензотриазТо же 1-Гидрокси-бензотриаз З-Гидрокси-окси,4 дигидро-диназолин Пример 3. СОМ) - ВИфИИ - ОНА. Получение Ирз - 18 е активноэфира.Молярное количество Я рлейцина и трихлорфенола состщего М -гидроксисукцинимидагают взаимодействию в уксуснпри О с небольшим избыткомгексилкарбодиимида (ДЦК). Пеют 1 час при 0 , затем 3 ча ь - изо- ветствую- подвером эфире дицикло- ремешиваса при сусного эфира, эфирный раствор экстрагируют в делительной воронке МаНСО --КНЗО,-, МаНСОЗ - и ИАСАП - раствором,сушат сульфатом натрия и концентрируют. Остаток парционально гидролизуют, трифторацетилируют и газохромаграфируют,Результаты газохроматографическо 10 го определения рацемизации приведены в табл. 2,мпературе, отсасываю ьтрат концентрируют. исталлизовывают из и-Счэ(ЬЦ-Веу-реп-ОН ц 1 Мрб- Ие- Отср соответствующего Крй - Ие - 06 и и Н-сиз(тчЦ-Зеч - Ьеп -ОН К раствору 116,3 мг (0,2 ммоля) н -сизтуц-беч- ьеп он НО в 2 мл диметилформамида добавляют 0,2 ммоляК -гидроксисоединения и 111 мг 0,22 (Яре - (Ы - ОТ 89,2 мг (0,25 ммоля) Мрэ - (се - ОЬн . Через различные промежутки времени на пленочную силикагельную пластину наносят одну каплю реакционного раствора. Опускают в смесь метиленхлорид/метанол (8 : 2) и выделяют ангидрином. В табл,З приведены результаты этого исследования. Таблица 3 Конец реакции (реакционное время) К - гидроксисоединение Эфир Прервана через 5 недель, т.к. не былоустановлено полногопревращения З-Гидрокси-окси,4-дигидро-хиназолин То же Примерно 15 часТо же 1-Гидроксибенз отриазолЗ-Гидрокси-окси,4-дигидро-хиназолин З-Гидрокси-метил-окси,4-дигидрохиназолин Примерно 7 дней З-Гидрокси-окси-фенил,4-дигидрохиназолин ОТср 1-Гидрокси,6-диметил-бензотриазол1-Гидрокси-пиридон 1-Гидрокси,4-диметил-пиридон раз с раствором КН 604, три раза с 2 н.раствором соды и один раз с водой, сушат с сульфатом натрия, концентрируют и остаток растворяют с петролейным эФиром. Выход продукта 2,08 г 1 т.пл. 99-104 . После перекристаллиэа" ции из смеси уксусный эфир/петролейный эфир; выход 1,7 г (83 от теоре тического); т.пл. 112-114Б. С 0,1 экв. 1-гидроксибензотриазола и 2-РЬе - ОТсрК раствору 0,92 г (5,5 меолей)НЙ-НЧаС - ОМе, 0,72 мп Э( -этил морфолина и 67,5 мг (0,5 ммоля) 1 в 25 мл диметилформамида. К нему добавляют 2,32 г (5 ммолей)йрз-йе-ОТр, и оставляют стоять 1 час при комнатной температуре, Исходный трипептид не был обнаружен с помощью тонкослойной хрбматографии. Диметилформамид отгоняют в вакууме и остаток растворяют с раствором бикарбоната натрия. Осадок растворяют в уксусном эфире и извлекают в делительной воронке с раствором КН 04 и водой. Остаток растирают с эфиром. Продукт аморфный. Его выход 3,6 г (82 от теоретического);Щ- 23,50 (с = 1, в диметилацетамиде) .В. Исследование с помощью тонкослойной хроматографии синтеза НрбГе 1-Гидрокси-метил-пиридон П р и м е р 4. Состав 2-Рле-Ча 2-оме Ь. С 1 экв, 1-Гидроксибензотри, азола и 2 - РИе - ОРср К раствору О, 92 г (5, 5 ммоля) НСЕ - Н - чае - ОМе, 0,72 мг М - атилморфолинаи 675 г (5 ммолей) 1- гидроксибензотриаэола в 10 мл диметилформамида добавляют 2,75 г(5 ммолей) 2. - РЬе - ОР . Смесь перемешисрвают 5 мин, концентрируют в глубоком вакууме, распределяют остаток между уксусным эфйром и 2 н.раствором соды извлекают в делительной воронке один То жеПримерно 20 часТо жеТо жеПримерно 4 дня-гидроксибензотриазола в 10 мг диметилформамида добавляют 2,4 г (5 ммолей) 2 - РИе - ОТср Перемешивают 5 мин и работают до выхода продукта 1,66 г (81 от теоретического);5 т.пл. 112-114В. С 1 экв, 1-гидроксибензотриазолнатриевой соли и Е-РИе - 0(р К раствору 0,92 г (5,5 ммолей) НС 1 - НЧаЕ - ОИе в 10 мл диметилформамида добавляют 865 г (5,5 ммолей) натриевой соли 1-гидроксибензотриазола и 2,1 г (5 ммоля) Е -РЬе - ОКр . Перемешивают 5 мин и работают по примеру А до выхода продукта 1,65 г (80 от теоретического); т,пл. 116и р и м е р 5. синтезг-ча 1-чай-ОиеК раствору 0,92 г (5,5 ммолей) цМ-Н - ЧаЕ - ОМЕ в 10 мл диметилформамида добавляют 865 г (5,5 ммолей) 1-гидроксибензотриазол-натриевой соли и 1,87 г (5 ммолей) Е-Чав - О(р . Смесь перемешивают 5 мин и работают по примеру 4 А до выхода 1,66 г (91 от теоретического); т.пл, 108-110 С.П р и м е р б. Синтез 7-Ьеп-уа(овц) 28 -Лба)(мьп)- тцч(Вц ) -ОН(ряд иэ инсулин-А-цепей).1. 2 - ьеп" зьл(ОВо )-льл (мьп - тцч(Вц )- с с- ОНК раствору 1,53 г ( 2 ммоля) ЗО Н - фи(ОВй-ЛЕП(МЬЪ)-Тцч(ВС) - Он и 270 мг ( 2 ммоля) 1-гидроксибензотриазола в 5 мл диметилформамида добавляют 1,5 г (2,2 ммоля)7 -Ьеп - ОР позволяют 10 мин стоять и концентрйруют в глубоком вакууме. Остаток растирают с 2 н.раствором соды. Раствор отстаивают, остаток растирают с водой,затем отсасывают. Фильтруемый материал распределяют между 2,5-ным 40 КН 504 -раствором и уксусным эфиром. Эфирный раствор сушат и концентрируют, Остаток растирают со смесью эфир/петролейный эфир и отсасывают. Выход продукта 1,8 г (89 Ъ от теоре тического); т,пл. 174-176Это соединение по тонкослойной хроматографии является идентичным пробе, которая получена с 2-(,ет-Ози Время реакции 24 час; выход 84 Ъ. 66Разный результат получают при применении З-гидрокси-окси,4-дигидроксихиназолина, 1-гидрокси,6- диметил-бензотриазола или 1-гидроксипиридона вместо 1-гидроксибензотри азола.П. Получение исходного вещества Н фн(ОВи)- Лзп(МЬИ) - Тцч(Вас ОНА. 2-лм(мьи-тцч(Вас) - Он100 г (О, 138 ммоля)7-Аай(мьь)- - Тцч(йиС) - ОНсуспендируют в смеси из 770 мл ди сана и 200 мп воды. При 37 ф медленно прикапывают 138 мл 1 н.раствора едкого натра (тимолфталина в качестве индикатора), По окончании реакции 65 подкисляют с 300 мп 2 н,раствора лимонной кислоты, Выпавший продукт отсасывают и промывают водой. Переосаждают из смеси метанол/вода. Выход продукта 88 г (90 от теоретического); т,пл. 212-213 ;о 1 в = + 7,6 е (с: 1, в диметилформамиде).Б. Н - Л 5 Ь(МЬИ) - Туч(Ьи с) - ОНЧерез раствор 87,5 г (0,123 моля) 2 "Лэп (Мьй) "Тцч(Ва ) - ОНв ледяной уксусной кислоте, к которому добавляют немногоРоВ(ОН) /Ва 504- катализатора водород пропускают до тех пор, пока не прекратится образование СО 2 . Концентрируют и растирают остаток основательно с насыщенным раствором ацетата натрия. Отсасывают, сушат над Р 2 Ои высаживают из смеси тетрагидрофуран петролейный эфир. Выход продукта 63,5 г (90 от теоретического); т.пл. 207-209 .А 1 д= + 11,1 (с 1, в ледяной уксусной кислоте).В.7-дЬл(ОВ и - Лзп(МЬЙ) - Тцч(Вл) - ОНК раствору 63 г (0,109 моля) К-Леп (МЬП)- Тцч (Вцс ОКз 250 мл диметилформамида добавляют при комнатной температуре 47,4 г (0,109 моля) 2 - цРс(ОВ а-054и отстаивают в течение 20 час при комнатной температуре. Затем вещество высаживают водой, сушат над Р 2 05 и пересаживают из смеси уксусный эфир/ петролейный эфир. Выход продукта 75,5 г (77 от теоретического); т.пл, 166-170 ; с 1 = + 1,80 (с=.1, в диметилформамиде).Г. Н - ЦЫ(ОВц) - ЛЗП(МЬП) - Тцч(Во ) ОН74,7 г (83,9 ммоля) 7- Ьл(ОВис)- лзп(Мьи) - Тцч(ВО)Онрастворяют в смеси из 400 мл ледяной уксусной кислоты и 400 мл метанола и по примеру Б каталитически гидрируют и перерабатывают. Для очистки вещество один раз кипятят с водой, отсасывают и сушат. С помощью кипения с уксусным эфиром вещество можно очистить лучше. Выход продукта 53,4 г (84 от теоретического); т.пл. 221-223 с(. 33,1 (с = 1, в ледяной уксусной кислоте).П р и м е р 7. Синтез 7-фо-дГц- ЬЕП-ЧаЕ -НН 2 (ряд ИЗ СЕКрЕтИНа)цА, 2-Ьей -ЧаЕ - МНк раствору 13 г (66 ммолей)начн ЦЕ- Мн, в 180 мл диметилформамида добавляют 8,91 г 1-гидроксибензотриазола, 8,6 мл М -этилморфолина и 30,8 г (60 ммолей) 2- Ьеп - ОРср . Смесь перемешивают 10 мин при комнатной температуре и затем концентрируют в глубоком вакууме. Остаток размешивают последовательно с 2 н.раствором соды, водой, 2,5-ным раствором КН 504 и водой, отсасывают и сушат при 50 над Р О . Выход продукта 21,3 гТакой же результат получают приприменении З-гидрокси-окси,4-дигидрохиназолина, 1-гидрокси,б-диметилбензотриазола или 1-гидроксипиридонавместо 1-гидроксибензотриазола. 5В,НРР-Н-ЬЕи- ЧоР ННК суспензии 21 г (57,8 ммолей)Е-Ма-ЧаР - НН в смеси из200 мл диметилформамида и 200 мл метанола добавляютРа(ОН) ВаЬО 4 катализатор, При перемешивании черезреакционную смесь проводят водород,причем прикапыванием 1 н.метанольного раствора НСР выдерживают рН 5 спомощью автотитратора. После того,как больше не воспринимается НСРраствор, отсасывают катализатор иконцентрируют фильтрат. Остаток растирают с эфиром, отсасывают и сушатпри 50 . Выход продукта 15,4 г (100от теоретического); т.пл. 138-140 . 20Продукт по тонкослойной хроматографииоднообразный.В. г-Рц- ье - МР - Ин15,4 г (57,8 ммолей)НСР-Н-.еи-ЧаЕ-ИН;растворяют с 7,52 мл М -этилморфолина и 7,88 г 1-гидроксибензотриазола в 120 мл диметилформамида, К этому добавляют 22,5 г Е - цРи - ОТсрфсмеси дают стоять 5 мин и концентрируют с глубоким вакуумом. Остатокрастирают с 2 н.раствором соды, отсасывают и промывают водой. Сушат надРРОи затем кипятят с уксусным эфиром, Для очистки можно переосаждатьиз смеси тетрагидрофуран/петролейный ффэфир. Выход продукта 21,8 г (90 оттеоретического); т.пл. 184-186с- 12,8 ( с : 1, в диметилацетамиде).Г. НСР - Н -оРц - .еи -ЧаР - МН24020,0 г (47, б ммолей ) г-оРц- ьеп-ЧоР - Мн гидрируют в 200 млсмеси метанол/диметилформамид (1:1)и перерабатывают. Вещество несколько 4 я,гигроскопично и для очистки его переосаждают на. смеси метанол/эфир. Сушат над Р 2 05 и парафиновыми обрезками. Выход йродукта 13,5 г (88 от теоретического); т.пл. 209-211 Мд.г-дбд-цРу; ьеа- чаР - кнК раствору 3,23 г (10 ммолей )нсе -н- Е- ахеи - чае - нн, .1,3 мл К -этилморфолина и 1,35 г(10 ммолей) 1-гидроксибензотриазолав 20 мл диметилформамида добавляют4 г (10 ммолей)г-цРи - ОКр и позволяют стоять 10 мин. Выпадает студень.Разбавляют с эфиром, высадившеесявещество отсасывают, быстро сушат иперемешивают с 2 н.раствором соды.Промывают водой, раствором КНЬО 4 иводой, сушат над Р 7 05 и кипятят с уксусным эфиром. Охлаждают до комнатнойтемпературы, отсасывают и промываютуксусным и петролейным эфирами. При 65 40 - 50 сушат над РРОз и обрезкамипарафина. Выход продукта 5 г ( 91от теоретического); т.пл. 242-244д. - 25,2 (с:1, в ледяной уксусной кислоте).Такой же результат получают прииспользовании З-гидрокси-окси,4 дигидрохиназолина, 1-гидрокси,6 диметил-бензотриазола или 1-гидроксипиридона вместо 1-гидроксибензотриазола.П р и м е р 8. Синтез г-РиОРе-дВуцнЛ. (ЕЕ- РЕУ - МН 744,4 г (0,1 моля)г-(Ре -ОТср и 11 г(0,1 моля) НСР - Н -ЦЬ-КНР растворяют вместе с 1,6 г (10 ммоля) 3-гидрокси-окси,4-дигидрохиназолинаи 130 мл М -этилморфолина в 700800 мл диметилформамида. Затем концентрируют в глубоком вакууме и остаток растирают с раствором бикарбоната натрия, отсасывают, промываютводой, сушат и для дальнейшей очистки растворяют в диметилформамице ивысаживают смесью эфир/петролейныйэфир (1:1),Выход продукта 28,5 г; т.пл. 202;8,1 (с = 1, диметилацетамид).Вычислено, : С 59,80; Н 7,21;М 13,08С 16 Н 2 Ь 04 (мол в 321,4)Найдейо, : С 59,6; Н 7,2; М 12,8Б. г- Ре - цРц - МНК раствору 20 г ( 62,2 моля )7-)Ре - яРЧ - мН 2 и 60 мл метанол/диметилформамид (3;1) добавляютнемного РЙ (ОН) Ва 04 - катализатора. При перемешивании через эту реакционную смесь пропускают водород,причем прикапыванием 1 н,метанольного раствора НСР с помощью автотитратора выдерживают рН 4,5. После того,как больше не воспринчмается НСРраствор, отсасывают катализатор, ифильтрат концентрируют. Остаток растворяют в 100 мл диметилфсрмамида. Кнему добавляют 23 г ( 62 ммоля)г- РО - ОМр, 8, 1 мл М -этилморфолинами, 1,5 г (9,4 ммоля) 3-гидрокси-окси,4-дигидрохиназолина; Смесьперемешивают 15 мин и концентрируютв глубоком вакууме. Остаток поглощают уксусным эфиром и схлаждают. Выпадает осадок, который отсасывают ипоследсвательно растирают с раствором бикарбсната натрия, 2 н.НСР иводой. Сушат и для дальнейшей очистки хсрошо растирают с уксусным эфиром, отсасывают и сушат, Вьход продукта 20,7 г (80 от теоретического);т,пл. 182-184.; К 1 - 63,2(с = 1, метанол).Такой же результат получают приприменении 1-гидрокси-метил-пиридона, 1-гидрокси-б-метокси-бензотриазола или 1-гидрокси-метил-бенэо