Способ определения окисления-ферментации микроорганизмами углеводов

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК В С 12(1 01-0,015 ж001-0,002 Сернокислый магнийСернокислое железоФосфорнокислый,008"0,01 Остальное ю тлич оздания ют 1,2 ана 1,5 ОСУДАРСТВЕННЫЙ ИОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(71) Киевский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови и Киевский государственный институт усовершенствования врачей(56) 1, Лабинская А.С. Микробиология с техникой микробиологических иссле дований М., "Медицина", 1978, с.352,2, Нцяд Н., ЬехГвоп Е. гпе Сахоповс в 8 пГ 1 саС 1 оп оГ ГегшепСаС 1 че чогвыв ох 1 йаС 1 че шеСадо 11 вш оГ сагЬо. ЬуйгаСев Ьу чаг 1 опв агав педаС 1 че ЬасСега. -еВасСег 1 о 1 оду". 1953, ч. 66, М 1, р. 24-26 (прототип).(54)(57) 1, СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОКИСЛЕНИЯ-ФЕРМЕНТАЦИИ МИКРООРГАНИЗМАМИ УГЛЕВОДОВ путем посева чистой культуры исследуемых микроорганизмов параллельно в две пробирки с питательной средой, содержащей источник азота, углевод, хлористый натрий, фосфорно- кислый двузамещенный 1 калий, бромтимоловый голубой и дистиллированную воду, с последующим созданием в одной из пробирок анаэробных условий,19 ЯО Н П 1 Д инкубированием посевов и определением окисления-ферментации по изменению окраски среды, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью ускорения и повышения точности способа, исследуемую культуру высевают в питательную среду, дополнительно содержащую хлористый кальций, сернокислый магний и сернокислое железо, а в качестве источника азота она содержит никотиновую кислоту при следующем количественном соотношении ингредиентов, мас.%:Хлористый кальций 0,001-0,0015 Никотиновая кисло,0001-0,0005 2, Способ по п. 1, щ и й с я тем, что дл эробных условий испол ный водный агар-агар.Изобретение относится к микробиологии и касается определения окисления-ферментации микроорганизмамиуглеводов,Известен способ определения фер"ментации микроорганизмами углеводовпутем посева чистой культуры нацветные среды Гисса с углеводамиГОднако этот способ не позволяет.одновременно определять окислениеФерментацию углеводов. 10Известен также способ определенияокисления-ферментации,микроорганизмами углеводов путем посева чистойкультуры исследуемых микроорганизмовпараллельно в двепробирки с питательной средой, содержащей источник азо-.та, углевод, хлористый натрий, фосФорнокислый двузамещенный калий,бромтимоловый голубой и дистиллированную воду, с последующим созданиемв одной иэ пробирок анаэробнь 1 хусловий, инкубированием носевов иопределением окисления-ферментациипо изменению окраски среды 21.Однако известный способ длителени не обеспечивает высокой точности.Целью изобретения является ускорение и повышение точности способа.Цель достигается тем, что согласно способу определения окисленияферментации микроорганизмами углево- З 0дов путем посева чистой культурыисследуемых микроорганизмов параллено в две пробирки с питательнойсредой, содержащей источник азота,углевод, хлористый натрий, Фосфорнокислый двуэамещенный калий, бромтимоловый голубой и дистиллированнуюводу, с последующим созданием в однойиэ пробирок анаэробных условий, инкубированием посевов и определением 40окисления-Ферментации по изменениюокраски среды, исследуемую культурувысевают в питательную среду, дополнительно содержащую хлористый кальций, сернокислый магний и сернокислое железо, а в качестве источникаазота она содержит никотиновую кислоту при следующем количественном соотношении ингредиентов, мас.В:Хлористый кальций 0,001-0,0015Никотиновая кисло" 50та 0,0001"0,0005Сернокислый магний 0,01-0,015Сернокислое железо 0,001-0,002 55Фосфорнокислыйдвуэамещенный 0 05 Ор 055калийХлористый нат,055-0,65рий 60Углевод 0,5-1,0Бромтимоловыйголубой 0,008-0,01Дистиллированнаявода Остальное65сПричем для создания анаэробныхусловий используют 1 р 2-1,5-ныйводный агар-агар,.Способ осществляется следующимобразом.Чистую культуру микроорганизмовзасевают параллельно в две пробиркис питательной средой, полученнойпутем растворения в дистиллированнойводе исходных компонентов, и устанавливают рН 7,2. Среду трехкратнодробно стерилизуют текучим паромпри 100 С по 10 мин или автоклавируют разово при 0,5 атм в течение15 мин, после чего разливают по 0,51,0 мл в пробирки размерами 0,81 рОР 10 р 0 см и хранят под ватномарлевыми пробками при 20 С не болеечем 15 дн, После засева среды исследуемым микроорганизмом чистойкультурой в две пробирки, в однойиз них создают анаэробные условиянаслоением расплавленного 1 р 2-1 р 5 ного водного агар-агар рН 7,21 довысоты агарового столбика не более1,5 см,. причем температура агара,наслаиваемого на среду, не должнапревышать 45 - 55 С. Посевы инкубируют в течение 5 ч и определяютокисление субстрата по изменениютравянистой окраски среды в пробирке без слоя агар-агар на светлозеленую (лимонную) , при отсутствииизменения окраски среды в пробиркес изолирующим слоем из агар-агараФерментацию определяют по аналогичному изменению окраски и в пробирке,содержащей изолирующий слой иэагар-агара.П р и м е р 1, Использование способа для определения окисленияглюкозы неферментирующими грамотрицательными бактериями. Чистую культуру микроорганизма Р.аегц 81 поаа засевают параллельно в две пробирки размерами Ор 8-1 рОк 10 р 0 см с питательнойсредой, разлитой по 0,5 мл, простерилизованной паром при 100 С трехкратоно по 10 минСреда имеет состав, мг/л: хлористыйкальций 10,0; никотиновая кислота1.,0;. сернокислый магний 100,0; сернокислое железо 10,0; фосфорнокислыйдвузамешенный калий 500,0; хлористыйнатрий 5500,0; глюкоза 900,0; бромтимоловый голубой 100,0; дистиллированная вода остальное. После засева в одну из пробирокнаслаивают расплавленный 1 р 2-ныйагар-агар рН 7 р 2) с температурой45 С в виде столбика высотой 1,0 см,инкубируют при 37 С в течение 5 ч,в пробирке беэ изолирующего слояиэ агар-агара травянистая окраскасреды к этому времени изменилась налимонную, а в пробирке с изолирующимслоем изменения окраски не произошлоЗаказ 3015/23 Тираж 522 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д,4/5 Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектяая,4 Заключение: Р. аегцКхпоеа окисляет и не ферментирует глюкозу.П р и ме р 2, Выявление окисления-ферментации маннита культурой ЯСарЬу 1 ососсце ацгецз. Для обнаружейия данных свойств используют. среду, содержащую следующие .вещества, мг/л: хлористый кальций 10,0; никотиновая кислота 5,0; сернокислый магний 120,0; сернокислое железо 12,0; ФосФорнокислый двузамещенный калий 10 550,0; хлористый натрий б 500,0; маннит 1500,0; бромтимоловый голубой 100,0;вода дистиллированная остальное (рН 7,21.ПОСЕВ ЧИСтсй КУЛЬтурОй БСарп. ацге (5 це и режим учета осуществляют в соответствии с примером 1, В пробирке с изолирующим слоем через 3 ч, а в пробирке без изолирующего слоя через 4 ч окраска среды приобрела лимонный цвет, что расценено как спо собность микроорганизма Ферментировать и окислять маннит.П р и м е р 3. Сравнение способов определения окисления-ферментации углеводов чистой культуры Р. аегцк - поза при условии создания анаэробных УФловий с помощью агар-агара (предлагаемый способ) и вазелина (известный) .30Чистую культуру микроорганизма засевают параллельно в три пробирки,содержащие 0,8 мл питательной средыс количественным составом ингредиентов,приведенным в примере 1, простерилизованной при 0,5 атм в течение 15 мин. После посева первуюпробирку инкубируют без изолирующегослоя, вторую с изолирующим слоемиз агар-агара, третью с изолирующимслоем из стерильного вазелина втечение 5 ч, В пробирке без изолирую-,щего слоя через 4 ч травянистаяокраска среды изменилась на лимонную,а через 5 ч аналогичное изменениеокраски среды наступило в пробиркепод слоем вазелина. В пробирке, гдеизолирующим слоем был агар-агарокраска:среды не измениласьТакимобразом, изменение окраски средыпод слоем вазелина возникло в реэультате его расщепления с накоплениемкислых продуктов, что привело бык ошибочному заключению о Ферментации глюкозы, если бы не приниматьво внимание данные, полученныев пробирке под слоем агарагара. Применение предлагаемого способа позволяет в 100 случаев дифференцировать и идентифицировать: бактерии по тесту "окисление-Ферментация углевода" уже через 5 ч с момента посева.