Способ получения 7-ациламино-9а-метоксимитозана

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛ ИСТИЧЕСНРЕСПУБЛИН 1364239 К 31/4 07 Р 487/1 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ ЯЩЗТЯ.".Л ПИО Е ИЗОБРЕТЕНИЯ АТЕНТУ(54) СПОСОБ ПОЛ 9 А-МЕТОКСИМИТОЗ (57) Изобретени митомицина С, в 7-ациламиноаобщей формулы к, - юн-с - с (ор-сиН С - С - С(О - С -УЧЕНИЯ 7-АЦИЛ НА амешенныхолуч енияана (МТ) касается частност етоксими У 48з Комп(72) Такуси КанекоЛай Вонг и Терренс(1 СН - СН - С Н МИ где К= Н,СЧз., К= группы К-С(0)-; К -ИНС(О)-; Р -ОС(0) - , (К,О) Р-Я-; К=К, низший алкил,не-нли замещенный хлором или Е, фенил, бензил или циклогексил; К = низший алкил или бензил, которые обладают противоопухолевым действием, Цель изобретения - создание более активных веществ указанного класса. Синтез МТ ведут из митомиццна С, который восстанавливают гидридом натрия (1-1,5 моля) в среде диметилформамида (ДМФА) последующим ацилированием необходимым агентом (1-2 моля) при (-30)-25 С в среде ДМФА, Новые МТ подавляют рост опухолей (меланомы) и ингибируют лейкемию при меньшем влиянии на деятельность спинного мозга, чем митомицин С.4 табл,1 1364239Изобретение относится к получениюновых производнык митомицина С, аименно 7-ациламиноа-метоксимитоэанаобщей формулы5 0СН 2 ОСВН СН ЖК 02 10 где К," водород или метил;К 7 означает группы Кэсо-р 15КИНСО-КОСО-р (К 40) 7 РЗ или КЯ 07- где К - водород, низший алкил неэамещенный или замещенный фтором илихлором, фенил, бензил или циклогексил, К 4 - низший алкил или бензил, 20обладающих противоопухолевым свойством.Целью изобретения является разработка на основе известных методовспособа получения новых соединений, 25обладающих повьппенной фармакологичес 1кой активностью при низкой токсичности.П р, и и е р 1, 7-Формиламиноаметоксимитозан (В 1,-6859). 30В атмосфере аргона добавляют 6 млдиметилформамида к смеси 549 мг(4,45 ммоль). После перемешивания втечение 10 мин при комнатной температуре смесь охлаждают до -20 С идобавляют 0,6 мп фенилформата, содержащего 65% чистого продукта(3,5 ммоль). Реакционную смесь перемешивают полчаса при -20 С, послеочего в течение часа температуру повьппают до комнатной. После прекращения реакции добавлением твердого С 07реакционную смесь разбавляют этила 45ацетатом (ЕйОАс). Полученный осадокотделяют фильтрованием и растворитель удаляют при пониженном давлении, Остаток хроматографируют на5 Х метанола (МеОН)-СН 7 С 17 в качестве усиликагеля с получением 306 мг (47%)искомого соединения, часть которогобыла перекристаллизована из ацетонаи эфира, т.пл. ) 280 С.Вычислено,Х: С 53,04; Н 5,01;,И 15,46,СРв И+ОНайденорХ: С 52,75 Н 5,09;И 15,96,Заменой фенилформата фенилтиоацетатом или этилтиоформатом могут бытьполучены 7-(тиоацетил или тиоформил)аминоа-метоксимитозаны,П р и м е р 2. 7-Трифторацетиламиноа-метоксимитозан (ВЬ).На основе 300 мг (0,899 ммоль),митомицина и 2,25 ммоль ИаН реакциюпроводят, как описано в примере 1.В качестве ацилирующего средства применяют п-нитрофенилтрифторацетат.ТСХ на силикагеле (10% МеОН-СН 7 С 17)дала 91 мг (24%) искомого веществав виде пурпурно-красного аморфноготвердого вещества с т.пл, 93-95 С.Вычислено,Х: С 47,45; Н 3,98,И 13,01.Найдено,%: С 49,1, Н 4,43;И 12,91.П р и м е р 3, 7-Ацетиламиноаметоксимитозан (В.-6905).На основе 668 мг (2 ммоль) митомицина С и 4 ммоль ИаН проводят реакцию, как указано в примере 1, В ка-честве ацилирующего средства применяли 314 мг (2 ммоль) И-гидроксисукцинимидового эфира уксусной кислоты.Вытеснительной хроматографией на силикагеле (3% меОн-сн 7 с 17) получено200 мг (27%) искомого соединения ст.пл. 110-112 С.ВычисленорХ," С 51,77; Н 5,62;И 14,21.С. Н ИОН 70Найдено,%; С 51,58; Н 5,25;И 14,1.П р и м е р 4. 7-2-Хлорацетиламиноа-метоксимитозан (ВЬ),На основе 668 мг (2 ммоль) мито"мицина С и 4 ммоль ИаН проводят реакцию, как указано в примере 1. В качестве ацилирующего средства применяют 520 мг (3 ммоль) фенилхлорацетата. Хроматографией на силикагеле(7,3 Х) искомого соединения с т,нл.118-120 С. нБыло также выделено примерно100 мг исходного продукта,Вычислено,%: С 49,7; Н 4 рббрИ 13,64.СН 7 зс 1 ир ОНайдено, %; С 51, 31, Н 5, 05;И 11,75,П р и м е р 5. 7-Метансульфониламиноа-метоксимитозан (ВЬ).(2 ммоль) и 4 ммоль ИаН добавляют6 мл диметилформамида, После перемешивания в течение 20 мин при комнатной температуре смесь охлажцают до(2 ммоль) и-нитрофенилметансульфоната. Реакционную смесь выдерживают4 ч при -25 С. После добавления вреакционную смесь твердого СО к нейприбавляют ЕйОАс и промывают рассолом. Высушиванием над Иа ЯО и удалением растворителя получают пурпурнокрасный остаток, который хроматографируют на нейтральной окиси алюминия(12 Х) искомого соединения, т.пл.126-128 С.Вычислено,Х: С 43,14 Н 4,75,И 12,58,Наццено,Х; С 42,99; Н 4,67;Ю 12,6.П р и м е р 6. 7-3-(трет.-Бутоксикарбониламино)пропионил 3 аминоаметоксимитозан,На основе 350 мг (1,05 ммоль)митомицина С и 2,62 ммоль ИаН реакцию проводят так, как указано в примере 1. В качестве ацилирующего средства применяют И-гидроксисукцинимидовый эфир Н-БОК-ф-аланина. ТСХ хроматографией на силикагеле (10 ХСНОН-СНС 1 ) получают 181 мг (34 Х)искомого соединения с т.пл.121-125 СВычислено,7.; С 52,76; Н 6,35;Я 13,28.СНзИО, НгОНайдено,Х: С 52,85; Н 6,22;М 12,83.П р и м е р 7, 7- Метоксикарбониламиноа-метоксимитозан (ВМУ 25069).К смеси 334 мг (1 ммоль) митомицина С и 96.мг (2 ммоль) ИаН в виде50 Х-ной дисперсии в масле добавляютв атмосфере И 5 мл сухого диметилформамида (ДМФ). Смесь перемешивают10 мин при комнатной температуре,после чего охлаждают до -30 С. Втвердом виде добавляют 4,82 мг(2,3 ммоль) метил-и-нитробензилкарбоната и перемешивание продолжают1 ч при -30 С, В реакционную смесьдобавляют небольшое количество твердой двуокиси углерода (сухого льда),а затем воды и ЕСОАс, Органическийслой промыт рассолом и высушен над 5 10 15 20 -25 30 35 40 45 50 55 4Ма 9 ЯО. Полученный после испарениярастворителя остаток хроматографируют на БЮ(2 Х снзОн-сн с 19) с получением 150 мг (38 Х) искомого соединения, т.пл. 106-107 С,Вычислено, : С 52,04, Н 5, 14,М 14,28,СН,оМ,О,Найдено,Х: С 52,03, Н 5, 15;И 14,2,П р и м е р 8. 7- Зтоксикарбониламиноа-метоксимитозан (ВМУ 25082),На основе 334 мг (1 ммоль) митомицина С, 96 мг 50 Х-ной дисперсии вмасле(2 ммоль) МаН и 450 мг этил-и-нитробензилкарбоната получено заглавноесоединениеаналогично примеру 7, вколичестве 150 мг (37 Х), т,пл.100102 С,Вычислено,Х: С 51,55, Н 5,64;И 13,34.С Н 99 ИО, 0,75 Н 90Найдено,Х: С 51,52, Н 5,64;И 13,47.П р и м е р 9. 7- (2-Метоксиэтокси)карбониламиноа-метоксимитозан (ВМУ).На основе 688 мг (2 ммоль) митомицина С, 192 мг ИаН в виде 50 Х-нойдисперсии в масле и 960 мг (4 ммоль)2-метоксиэил-и-нитробензилкарбоната получено искомое соединение путем,аналогичным описанному в примере 7,в количестве 300 мг (35 Х), т.пл.8284 С.Вычислено,7; С 51,76; Н 5,6,И 12,71,С 19 НИ+Ов 0,25 Н 90Найдено,Х: С 52,09; Н 5,5,И 12,72,П р и м е р 10, 7-Изопропиламинокарбониламиноа-метоксимитозан(ВМУ),К смеси 668 мг (2 ммоль),митомици-.на С, 192 мг (4 ммоль) ИаН в виде50 Х-ной дисперсии в масле добавляютв М 8 мл сухого ДМФ, Полученныйраствор перемешивают 20 мин при комнатной температуре, после чего охлаждают до -25 С. Добавляют 340 мг(4 ммоль) изопропилизоцианата и перемешивание продолжают при -25 С еще1 ч. В реакционную смесь добавляютнебольшое количество сухого льда,затем ЕОАс и воду. Органический слойпромывают рассолом и сушат над ХаВОПолученный после испарения растворителя остаток хроматографируют на5 13642Б 10 г (ЗХ СНЗОН-СН С 1 ) с получением140 мг (17 ) искомого соединения,т.пл, 163-165 С.Вычислено,Х: С 52,71; Н 5,99,М 16,17.Су Нг МОь 0,75 НгОНайпено,Х: С 53,01; Н 6,03,М 15,86.Ранее элюирующаяся фракция дала вколичестве 120 мг 1 а-изопропнламинокарбонил-(изопропиламинокарбонил)амикоа-метоксимитозан (24 )П р и м е р 11. 7-Циклогексиламинокарбониламиноа-метоксимитозан15(2 ммоль) циклогексилизоцианата вколичестве 100 мг (22 ) получено искомое соединение способом, описаннымв примере 10, т,пл. 138-140 С.Вычислено,%: С 55,86; Н 6,5 М 14,81СггНгвМО с 0,75 НгОНайдено: С 55,83, Н 6,22, М 14,44.Ранее вымывающаяся. фракция дала70 мг (14 Х) 1 а-циклогексиламинокарбонил-цнклогексиламинокарбониламино 9 а-меоксимитозана.П р и м е р 12, 7-Бензиламинокарбонила-метоксимитозан (ВЬ).На основе 668 мг (2 ммоль) митомицина С, 192 мг (4 ммоль) МаН в виде50 Х-ной дисперсии и 536 мг (4 .ммоль)бензилизоцианата получено 110 мг(12 ) искомого соединения по методике, описанной в примере 10, т,пл.145-147 С.Вычислено,7.: С 58,53; Н 5,45,М 14,84,СгэН гМ 60Найдено,Х: С 58,93; Н 5,45;М 14,12.П р и м е р 13. 7-Пиклопропанкар 45бониламиноа-метоксимитозан (ВЬ -6906).(2 ммоль) М-гидроксисукцинимидовогоэАира виклопропанкарбоновой кислотыпроводят реакцию по методике, описанной в примере 1. Хроматографированием на силикагеле (2 Х СН ОН-СН С 1 )получают 65 мг (8 ) искомого соедине ния т.пл. 102-104 С.Вычислено,7: С 55; Н 5,59,:М 13,5СгНггМ 40 0,75 . НгО 39 6Найдено,7: С 55,16, Н 5,88,М 12,86,П р и м е р 14, 7-ДиэтилтиоАосфориламиноа-метоксимитозан (ВЬ -6938).На основе 450 мл (1,35 ммоль) митомицина С, 2,7 ммоль МаН и 280 мг(1,49 ммоль) диэтилфосфорилклоридапроводят реакцию по методике, указанной в примере 1. Колоночной хроматограАией на силикагеле (2 СНОН-СН С 1 ) с последующей ТСХ на силикагеле получают 39 мг (8 ) 1 а-диэтилтиофосАорил-диэтилэтилтиоАосфориламиноа-метоксимитозан (ВЬ),т.пл. 47-49 С.Вычислено, ; С 43,26; Н 5,68,М 8,77.Сг Нз М 40 гРг 3 гНайдено,Х: С 43,29; Н 5,41,М 8,83.Более полярная Аракция дала 91 мг(4 ммоль) бензил-М-гидроксисукцинимидкарбоната проводят реакцию в соответствии с примером 7, ХроматограАией на силикагеле (2 Х СН ОН-СНгС 1 г)получено 490 мг (41 Х) искомого соединения, т,пл. 68-70 С,Вычислено, .: С 61,79; Н 5,24, М 9,63.С 3 Н М 4 О уНайдено,7.: С 61,68,: Н 5,02,М 9,3 П р и м е р 16, 7-Ацетиламино 9 а-метоксиа-метилмитозан (ВЬ).На основе 348 г (1 ммоль) порфиромицина, 2 ммоль МаН и 314 г (2 ммоль) М-гидроксисукцинимидового эфира уксусной кислоты проводят реакцию соответственно примеру 1. Препаративно ТСХ на силикагеле (10 СНзОН-СНгС 1 г)получают 40 мг (10 ) искомого соединения, т.пл. 101-103 С,Вычислено % С 54 13 Н 5 8М 13,72.С,8 НуМОЬ 0,5 НгО1364239 Табл,1 содержит результаты лабораторных испытаний на женских особяхмышей СПГ , которым имплантироваливнутрибрюшинно опухоль с помощьюпрививки 10 клеток серозной жидкости мышинной лейкемии Ри которыхзатем обрабатывали различными дозами либо предлагаемого соединения,либо митомицином С, Соединения вводили инъекциями внутрибрюшинно,Каждую дозировку испытывали на группе из шести мьппей, в день прививкиим вводили соединение в одной дозировке, В каждую серию экспериментоввключали группу из 10 мьппей, которымдля контроля вводили солевой раствор.Также для контроля выделяли группу,которой вводили митомицин. Опыт продолжался 30 дней, для каждой группыопределяли среднее время выживанияв днях, кроме того, определяли числовыживших к концу 30-дневного периодаособей. Мишей взвешивали перед опытоми через 6 дней. Изменение веса принимали за меру токсичности, Исследовали мышей весом 20 г, потеря весапримерно до 2 г считалась несущественной. Результаты выражали в видеТ/С, что является отношением среднего времени выживания обработанныхмьппей к среднему времени выживанияобработанных солевым раствором мышей,Как правило, мыпы, обработанные раствором, умирали в течение 9 дней.Выражение "максимальный эффект втабл.1 означает, при каком значенииданной дозы значение Т/С имеет место,Цифры в скобках в табл,1-4 относятсяк митомицину С, взятому для контроляв той же серии, что дает возможностьустановить относительную активностьпредлагаемых соединенийотносительномитомицина С, Минимальный эффект вединицах Х Т/С считали равным 125,Минимальная эффективная доза, приводимая в табл,1 - это доза, приводящая к значению Т/С примерно 125.Два значения, приводимые в табл.1в графе Среднее изменение весаидруг за другом соответствуют среднейпотере веса мьппи при максимальнойэффективной дозе и при минимальнойэффективной дозе,35 Найдено,Х: С 54,37, Н 5,71,И 13,88.П р и м е р 17. 7-ГЗ-(Этоксикарбонил)пропионил аминоа-метоксимитозан (ВЬ),На основе 334 мг (1 ммоль) митомицина С, 2 ммоль ИаН и 486 мг(2 ммоль) И-гидроксисукцинимидовогоэфира моноэтилсукцината проводят реакцию соответственно примеру 1. Хроматографированием на окиси алюминия(3 ммоль) и - нитрофенилбензоата проводят реакцию соответственно примеру1. Хроматографированием на окисиалюминия (27. СН ОН-СН С 1 ) получено150 мг (17%) искомого соединения,т.пл. 129-130 С.30Вычислено Х С 57 р 89 Н 529И 12,27,СН ИО НОНайдено,7.: С 57,71, Н 5,29;И 12,27.П р и м е р 19. 7-(2 Хлорэтиламино)карбонил аминоа-метоксимитозан (В 1,-6931).На основе 334 мг (1 ммоль) митомицина С, 2 ммоль ИаН и 211 мг(2 ммоль) 2 - хлорэтилизоцианата проводят реакцию соответственно примеру 10. Колоночной хроматографиейна окиси алюминия (3% СНОН-СНС 1)получено 50 мг (11 Х) искомого соединения, т,пл. 118-120 С.Вычислено,%: С 48,16; Н 5,16,И 15,6,С НСТМО ь:0,5 НОНа,йдено,Х: С 48,21 Н 5,16;И 15,27.Полученные соединения обладаютболее высокой противоопухолевой активностью и относительно низкой токсичностью по сравнению с митомициномС, из них наиболее предпочтительнымиявляются 7-формиламиноа-метоксимитозан (пример 1), 7-ацетиламино 9 а-метоксимитозан (пример 3) и 7-циклопропанкарбониламиноа-метоксимитоэан (пример 13),Активность против мышиной лейкемии Р-Э 88, 9 1364239Табл давляющ соединенутривеению синст показо дейс гвает результаты -повия на спинной мозг ров 1,3 и 13 при их денни мыпам по сравном С. Мьйпам вводили у испытуемого соедии прим ном вв оми ю Табл.2 содержит результаты противоопухолевых испытаний при меланоме В 16 на мьшгах. Иьппам ВВГ подкожно имплантировали опухоль. Опыт продолжался 60 дней, Каждую дозировку испытывали на группе из десяти мьппей, для которой определяли среднее время выживания, Контрольные зверьки, зараженные одновременно, которым вводили инъекцию носителя без лекарства, показали среднее время выживания в 24,5 дней. Время выживания по отношению к времени выживания контрольных зверьков (Т(С),использовали для выражения эффективности, для каждого ис-, пытуемого соединения определяли максимальную и минимальную эффективные дозы. Минимальная эффективная доза Т/С : 125. Для каждого уровня дозировки испьггуемым зверькам вводили лекарство на 1-й, 5-й и 9-й день.1Табл,3 содержит дополнительные результаты противоопухолевых испытаний на мышах ВПР с меланомой В 16, зараженных внутрибрюшинно. опухолью (0,5 мл 10%). Опыт продолжался 60 дней. Каждую дозировку испытывали на группе из десяти мышей, для каждой группы определяли среднее время выживания. Контрольные зверьки, зараженные одновременно тем же путем, что и испытуемые, которым вводили инъекции носителя беэ лекарства, показали среднее время вьиивания в 20,5 дней, Времы выживания по отношению к контролю (Т/С) использовали для определения эффективности,для каждого испьггуемого соединения определяли максимальную и минимальную эффективные дозы. Минимальная эффективная доза соответствовала значению % Т/С 125. Каждую дозировку испытуемого соединения вводили внутрибрюшин но на 1-й, 5-йи 9-й день.Формула изобретения Способ получения 7-ациламиноа 25.метоксимитозана общей формулы К, - водород илиК 1 - груЬпы КэСО - , КБНСО-,К, ОСО-, (К О)РБ илиКВО-, где Кз водородвнизший алкил, неэамещеннынили замещенный фтором илихлором, фенил, бензил илициклогексил К- низшийалкил или бензил,л и ч а ю щ и й с я тем, что намицин С в растворе диметилформадействуют 1-1,5 мол.ч, гидридаия с последующей обработкой обвавшейся при этом анионной формымицина С 1-2 мол.ч. соответствуюацилирующего агента при темпера"-30 до +25 С в среде диметиламида. метил; 45 митомида катр мит щег тур нения в день О, а в дни О, 4 ивели полный подсчет лейкоцитов. Цифрыдля дней 4 и 7 представлены в таблю 4как процент изменения (Л %), Другиеподсчеты произведены в дни 0 и 4,и их записывают как процентную разницу (Я%) на день 4. Как показано втабл.4 группам из 10 зверьков давали 1 О разные дозы испьггуемых соединений.Значения ,данные в скобках, соответствуют сравнительным значениям длямитомицина С. Был сделан вывод, чтосоединения по примерам 1,3 и 13 в 15 меньшей степени подавляют деятельность спинного мозга чем митомицин С.При дозах с равной летальностьюуказанные соединения показывают зна. чительно меньшее действие при подсче 1 20 . те нейтрофилов, чем митомицин С,12 1364239 Соединение по примеру Максимальный эффект Минимальный эффект при дозе,мг/кг Среднее изменение веса,г Т/С, Ж Доза мг/кг 183(144) 3,2(3,2) 1.6-1.6, -0.9еМ Ш Средняяпотеря веса за день, г Минимальная эффективная доза, мг/кг Максимальный эффект Соединение по Доза, мг/кг Т/С, Х примеру 228(195) 220(220) 186(195) 2 4) 0,5 -2,+0,6; +О,б:1364 Л 39 14 Таблица 3 Соединение по Иаксимальный эффект Минимальная эффективная доза, мг/кг Т/С, Е Доза, мг/кг примеру день, г 3 249(173) 4(2)-26(-78) -2(-96) -31(-75) +18(-57) О/10 Составитель И, БочароваТехред Л,Сердюкова Корректор В.Бутяга Редактор М, Циткина Заказ 6387/58 Тираж 372 По,цпис но е ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раунская наб., д. 4/5