Способ получения замещенного имидазола или его нетоксичной фармацевтически приемлемой кислотно-аддитивной соли

, СНЗ 5 вместе галОгЕн; 84 образуют свя Реагент 1: бе Н где В, В 1. В значения, 2 та ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОВЕДОМСТВО СССР(72) Арто Йоханнес Карьялайнен, Рейно Олави Пельконен, Марья Лийса Седервалл, Матти Антеро Ляхде, Ристо Арво Сакари Ламминтауста, Арья Лена Карьялайнен и Арья Маркетта Калапудас (Г)(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЗАМЕЩЕННОГО ИМИДАЗОЛА ИЛИ ЕГО НЕТОКСИЧНОЙ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИ ПРИЕМЛЕМОЙ КИСЛОТНО-АДДИтИВ НОЙ СОЛИ(57) Использование: в качестве препаратов, ингибирующих ароматазу и десмолазу. Сущность изобретения; продукт общей формулыр 51)5 С 01 О 233/58/ где В имеет указанные значения; Водинаковые или разные и предН, СНз, С 2 Н 5, СзН 7, ОСНз, (ч 02, ССН 2 Г или галоген,Реагент 2: альдегид формулыОНЯ1нс-(сн,1,У"2где В 1 и В 2, одинаковые или разнСНЗ, С 2 Н 5, СзН 7, О С Н, О Н,ЙОг,йН 2, Сй, СГз, СНГ 2, СНгГ илиу имеет указанное значение.Реагент 3: соединение формулыР,где В, В . Вг . В(, Вг имею значения.Реагент 4: соединение формул1836354 10 40 50 Изобретение относится к способу получения нового замещенного имидазола или его нетоксичной, фармацевтически приемлемой кислотно-аддитивной соли.Производные имидазола по настояще му изобретению имеют общую формулу:5 цгде 81, 82, 81, 82, имеющие одинаковые 15или различные значения, представляют Н,СНЗ, С 2 Н 5, СЗН 7, ОСНОВ ОН, СН 2 ОН, Й 02,ЙН 2, Сй, СЕЗ, СНР 2, СН 2 Е или галоген; Впредставляют Н или20 где 83 представляет собой Н, СНЗили галоген; 84 представляет Н или ОН, и 85 пред ставляет Н, либо 84 и 85 образуют общую связь, а у является целым числом от 0 до 4 и обладают свойствами, ингибирующими ароматазу и десмолазу.Цель изобретения - синтез новых сое- ЗО динений в ряду имидазолов, обладающих вышеуказанными свойствами, не характерными для данного ряда соединений.Поставленная цель достигается предлагаемым способом, основанным на иавест ной реакции гидролиза и заключающимся в восстановительном сочетании бензоилимидазола (П) и соответствующего альдегида формулы ( ) в соответствующем растворителе, таком кактетрагидрофуран или диметоксиэтан, в присутствии низковольтного титанового реактива в инертной атмосфере, например, вазоте или в аргоне, в результате чего получают соединения формулы , в которой 84 и85 образуют общую связь (У). и Далее его гидрируют для получения соединения (Ьормчлы ,О сн-сн,сн,д- , М й 2в которых В, 81, 82, 81, 82и у имеют указанные выше значения.Если Впредставляет замещенный или незамещенный бензил, то эту группу также можно удалить путем гидрогениэации, В этом случае гидрогенизацию осуществляют в кислой среде, такой как смесь хлористоводородной кислоты и этанола, при повышенной температуре,1Другим способом удаления бензильной Й группы является реакция переноса водорода, при осуществлении которой исходное соединение (У) нагревают с обратным холодильником вместе с формиатом аммония и 10; Рб/С в соответствующем спирте, таком как метанол или этанол, либо в его водном растворе. Соединения ( Х) также можно получить непосредственно из соединений (У) в результате осуществления реакции переноса водорода при использовании формиата аммония или путем одновременной гидрогениэации двойной связи и защитной бензильной группы, для получения соединения формулы: И"1 2 Я 1( н-сн,сн,1 фй 21 Пример 11-Бензил(1-)4-фторфенил)-3-фенил-пропенил)-1 Н-имидазол.Четыреххлористый титан (0,03 ммоля) по каплям добавляли к перемешанной суспензии порошкообразного цинка (0,06 ммоля) в тетрагидрофуране (30 мл) при темйературе -10 С в атмосфере сухого азота. Эту смесь нагревали до кипения с обратным холодильником и продолжали нагревать с обратным холодильником в течение 1 часа. Этот раствор охлаждали до 0 С, после чего в эт смесь добавляли 1-бензил-(1-)4-фторфенил)-1-оксометил)-1 Н-имидазол (0,005моля) в тетрагидрофуране (10 мл) и фенилацетальдегид (0,006 моля) в тетрагидрофуране, Эту смесь нагревали с обратным холодильником при перемешивании в течение 1 часа. Темную смесь выливали в воду 5 (60 (60 мл), тетрагидрофуран выпаривали, а смесь экстрагировали метиленхлоридом (2 х 100 мл), раствор метиленхлорида промывали 1 н. раствором гидрокиси натрия и водой, высушивали с помощью сульфата 10 натрия и выпаривали до сухого состояния.Остаток очищали при помощи испарительной хроматог 1 оафии.Спектр Н ЯМР(в виде основания, СОС 13) 153,35 и 3,45 (2 д, 28), 4,62 и 4,65 (25, 2 Н), 6,03 и 6,20 (2 с, 1 Н), 6,8-7,3 (а, 16 Н), 7,50 и 7,64 (25, 1 Н).П риме р 2.4-1,3-бис(4-нитрофенил)пропилН-и мидазол.1,8 г (14,8 ммоля) нитрата мочевины добавляли небольшими порциями к смеси 2,7 г (7,3 моля) 4-(1,3-дифенилпропил)-1 Н- имидазола в 6,4 мл концентрированной 25 серной кислоты при температуре 10 С, Реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре, Эту смесь подщелачивали 2 М раствором гидро- окиси натрия и целевой продукт очищали 30 при помощи испарительной хроматографии, используя смесь метиленхлорида и метанола (95;5) в качестве элюента.П р и м е р 3.4-(1-(4-фторфенил)-5-фенил пентил)-1 Н имида зол.Хлоргидрат 4-(1-(4-фторфенил)-5-фенил-пентенил)-1 Н-имидаэола (2,0 г) растворяли в этаноле и добавляли каталитическое количество 10 Рд/С. реакционную смесь ин тенсивно перемешивали при комнатной температуре в атмосфере водорода до тех пор, пока не прекращалось поглощение водорода. Эту смесь фильтровали, а фильтрат выпаривали до сухого состояния. Остаток, 45 представлявший деловой продукт, очищали при помощи испарительной хроматографии, производят элюирование смесью метиленхлорида и метанола. Выход составил 82% 50Спектр Н ЯМР (в виде основания,1СРС 11,1-2,7 (а, 8 Н), 3,84 (1, 1 Н), 8,71 (широкий Я, 1 Н) 7,80 - 7,38 (гп, 9 Н), 7,47 (широкий 3, 1 Н), 9,22 (широкий 5, 1 Н). 55При использовании аналогичного метода были получены следующие соединения, входящие в объем настоящего изобретения:41(4-фторфенил)-53-метилфенип)пентилН-имидазоп. Масс-спектр: 322(20, М ), 189(28),176(38), 175(72), 149(100), 125(20), 121(14),109(42), 105(1 6). 97(21),Спектр Н ЯМР (в виде хлористоводородной соли, МеОН-б 4): 1,1 - 2,7 (а, 8 Н), 2,27(широкий Я, 1 Н).4-1-(4-фторфенил)-5-(3-метоксифенил)пентип)-1 Н-имизаэоп.4-5-(3,5-димето кс ифе н ил)-1-(4-фто рфенил)пентил)-1 Н-имидазол.П риме р 44-(1,3-дифенилпропил)-1 Н-имидазол,1-бе н зил-(1,3-ди-фен ил пропил)-1 К-имидаэол гидрогенизировали в смеси 2 н.раствора хпористоводородной кислоты иэтанопа при температуре 60 С и использовании 10 Рд/С в качестве катализатора.После прекращения поглощения водорода реакционную смесь охлаждали, фильтровали и выпаривали до сухого состояния.Добавляли воду и смесь подщепачивапигидроокисью натрия, Полученный продуктэкстрагировапи в метипенхлориде, промывали водой, высушивали с помощью сульфата натрия и выпаривали до сухогосостоянии, Остаток очищали при помощииспарительной хроматографии, используясмесь метиленхлорида и метанола (9,5:0,5) вкачестве эпю 1 ента. Выход составил 73 .Спектр Н ЯМР (в виде основания,СР С 3):2,1 - 2,7 (а, 4 Н), 3,88 (с, 1 Н), 6,71 (широкий 5, 1 Н), 7,01 - 7,26 (а, 10 Н), 7,30 1, 1 Н),10,5 (широкий , 1 Н).510 15 20 25 30 45 50 55 При использовании аналогичного метода было получено следующее соединение;4.-(1,5-ди 9 енил пентил)-1 Н-имидазол,Спектр Н ЯМР (в виде хлористоводородной соли, МеОН):1,2 - 2,3 (а, 6 Н), 2,57 (искаженный 1, 2 Н),4,05 (с, 1 Н), 7,05 - 7,40 (а, 1 Н), 8,73 (б, 1 Н).Прмер 51-бензил-(1,3-дифенил пропил)-1 Н-имидазолч2,0 г бензилбромида в 5 мл толуола покаплям добавляли к смеси 4 (1,3-дифенилпропил)-1 Р-имидазола (2,6 г), 48 а ОН (10 мл),толуола (20 мл) и бромида тетрабутиламмония (0,2 г) при комнатной температуре, После окончания добавления зту реакционнуюсмесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Добавляли воду иотделяли слой толуола, Фазу толуола промывали водой и выпаривали до .сухогосостояния. Остаток содержал изомеры 1 бензил-(1,3-дифенил пропил)-1 Н-имидазола и 1-бензил-(1,5-дифенилпропил)-1 Нимидазола. Первый изомер отделяли и очищали при помощи испарительнойхроматографии (смесь метиленхлорида иметанола, 9,5:0,5),Примерб.4-(1,4-бис(4-фторфе нил) бутилН-имидазол,1-бензил-(1,4-бис(4-фторфенил)-1-бутенил)-1 Н-имидазол (0.2 г) в виде гидрохлоридной соли гидрировался, как описано вприере 2,Н ЯМР (в виде основания, СОС 3):1,4 - 1,88 (а, 2 Н), 1,8-1,95 (М,1 Н), 2,052,2 (а, 1 Н), 2,5-2,65 (а, 2 М), 3,87 (т, 1 Н),6,7 (с, 1 Н), 6,8 - 7,2 (гп, 8 Н), 7,5 (с, 1 Н).Пример 74-(1,4-бис)4-фторфенил(бутил)-1 Н-имида зол.Концентрированный водный растворформата аммония (0,16 г в 2 мл воды) добавлялся по каплям к кипящей смеси 1-бензил 5-(1,4-бис(4-фторфенил)1-бутенил)-1 Н-эмидазола (0,21 г) и 100 палладия на угле (0,02 г) в20 мл этанола и воды (3;1). Смесь нагревалась с.обратным холодильником в течение 2 часов, Катализатор отфильтровывалсяи растворитель выпаривался, Добавлялся2 М йаОН и продукт зкстрагировался в метиленхлорид. Метиленхлоридная фаза сушилась и выпаривалась досуха, даваяпродукт,Соединения по настоящему изобретению являются особенно полезным в качест.ве ингибиторов ароматазы и поэтомууспешно применяются при лечении болезней вызываемых экстрогенами, например,рака молочной желеаы. Экстрогены являются важными стероидами в физиологии и нормальном развитии молочной железа и половых органов у женщин, С другой стороны, экстрогена стимулируют рост злокачественных опухолей, вызываемых экстрогенами. в частности злокачественных опухолей молочной железы и матки, причем они могут увеличивать опасность развития злокачественной опухоли молочной железы при введении в виде фармацевтических доз в течение длительного периода времени. Избыточное образование экстрадиола также может вызывать другие доброкачественные нарушения в гормонозависимых органах, Важное значение экстрогенов в качестве стимуляторов и/ил, регуляторов роста злокачественных опухолей подчеркивается тем фактом, что антиэкстрогены занимают центральное место при лечении злокачественных опухолей молочной железы, имеющей многочисленные рецепторы экстрогена. Действие антиэкстрогенов выражается в связывании рецепторов эстрогана, в результате чего ингибируется биологическое воздействие экстрогенов, Другим подходом. направленным на блокирование действия экстрогенов, является ингибирование синтеза экстрогенов. Это было достигнуто в клинических условиях с помощью аминоглютемида, ингибирующего синтез вредных стероидов. Синтез экстрогенов можно блокировать путем ингибирования ароматазы фермента, которая является ключевым ферментом в биохими 35ческом синтезе экстрогенов, Ингибирование.ароматазы имеет важное значение потому, что некоторые опухоли молочной железы синтезируют эстрадиол и эстрон в этом месте, в результате чего стимулируется 40 постоянный рост опухоли(Алан Липтон ядр"Са се" 69;779-782, 1987 г.).Способность соединений по этому изобретению ингибировать ароматазу фермента испытывалась в лабораторных условиях по методу М.Пасанена ("Воо 9 са ЯезеагсЬ и Ргедпапсу", т. 6, М 2, 1985 г., стр. 94-99). В ходе исследования испольэовали фермент с ароматазой человека, Этот фермент готовили из плаценты человека, которая отличается большим содержанием этого фермента. Микросомную фракцию (100000 х г осадка) готовили центрифугировамием. Ферментный препарат использовали без дальнейшей очистки. Испытуемые соединения добавляли вместе с 1,2/"Н/-андростен,17-дионом, скорость распада которого составляла 100000 распадов в минуту, и системой генерации А РН. Концентрации испытуемых соединений равнялись 0,001;0,01; 0,1 и 1,0 ммоль, Инкубацию произво 1836354 10дили при температуре 37 С в течение 40оминут. Ароматизация 1,2/ЗН/-адрцдтен,17-диона привела к образованию "Н 20.Насыщенную тритием воду и насыщенный тритием субстрат легко разделяли при по мощи миниколонны "Яер-Рак", в которой происходило поглощение стероида и элюирование свободной воды. Счет радиоактивности вели при помощи жидкостного сцинтилляционного счетчика, Степень инги бирования ароматазы определяли при сравнении радиоактивности Н 20 у образцов, обработанных ингибитором, и у контрольных образцов, не содержащих ингибиторов.Значения средней концентрации ингибиро вания (1 С) высчитывали в виде концентраций, ингибирующих активность фермента на 50. Эти концентрации представлены в таблице 2.Активность в отношении расщепления 20боковой цепи холестерина (СБСС) десмолаза) измеряли по методу Пазанена и Пелконена ("Стероиды") 43:517-527, 1984).Инкубацию производили в 1,5 мл пластиковых пробирках Эппендорфа с использова нием в качестве единого устройства вибратора Эппандорфа, центрифуги и термостата, В 300 мл инкубированном объеме готовили субстрат (5 ммолей) по методу Ханукоглу и Джефкоута (. Спговатоцг. 190:256- 30 262, 1980), в кооры 1 й затем добавляли радиоактивный Н-холестерин, скорость распада которого составляла 100000 распадов в минуту (чистоту этого соединения проверяли с помощью тонкослойной 35 хроматографии) в 0,500 "Твине 20", 10 ммол МоС 2, 5 мкмолей цианокетона и 2 ссоля А РН, Контрольные образцы содержали всевышеуказанные вещества, но ферментный препарат инактивировали до инкубации по средством добавления 900 мкл метанола. В качестве источника фермента использовали митохондриальную фракцию (1 мг белка) из планцеты человека или надпочечников коров, После инкубации в течение 30 минут 45 при температуре 37 С реакцию завершали .путем добавления 900 мкл метанола; в каждый термостат добавляЛи маркер, представляющий 14 С-прегненолон со скоростью распада 1500 распадов в минуту, после чего 50 пробирки интенсивно встряхивали, После достижения равновесного состояния в течение 10 минут осажденные метанолом белки отделяли путем центрифугирования (8000 х г в течение 2 мин), а всплывающий слойзаса сывали в 1 мл пластиковый шприц и переносили в предварительно уравновешенную (75 ф метанол) миниколонну. Эту колонну промывали одним мл 75 метанола, а затем 3 мл 80;6 этанола, Элюат 80 метанола помещали в счетную пробирку и добавляли 10 мл сцинтилляционной жидкости, Счет радиоактивности вели с использованием программы с двумя метками в жидкостном сцинтилляционном счетчике( КВ йас 1 Ве 1 а). Типичные значения активности для ферментного препарата плаценты человека и надпочечников коровы соответственно представляли 0,5 - 3 и 50 - 100 ммолей прегненолона, образованного на мг белка в минуту.В экспериментах по ингибированию полученное вещество (в интервале концентраций от 1 до 100 мкмолей) добавляли к инкубационной смеси в объеме 110-20 мкл обычно в виде раствора в метаноле или этаноле, Такой же обьем растворенного вещества добавляли в контрольную инкубационную пробирку, Значения средней концентрации ингибирования (концентрация, вызывающая 500 ингибирование) определяли графически, и полученные результаты представлены в таблице 2, В таблице 1 указаны соединения, которые были испытаны,Острую токсичность, среднюю летальную дозу, определяли с использованием молодых взрослых самок мышей вида МР 1. Введение испытуемых соединений производили перорально. Значения средней летальной дозы испытуемых соединений формулы (1) равнялись - 400 мг/кг или больше.Суточная доза для больного изменяется от примерно 20 до 200 мг при введении пероральным способом.Это изобретение иллюстрируется следующими примерами, Спектры Н ЯМР определяли при помощи аппарата Брукера ЮР 80 (80 мгц). Вещество, выбранное для сравнения, представляло тетраметилсилан, Масс-спектры определяли при помощи аппарата Кратоса М 80 РГ с автоматическим пультом,Формула изобретения Способ получения замещенного имидазола общей 1 формулы.йц й 2рили его нетоксичной фармацевтически приемлемой кислотно-аддитивной соли где Й 1, К 2, В 1 и Й 2 - одинаковые или разные, Н, СНЗ, С 2 Н 5, СЗ,Н 7, СОНЗ, ОН, СН 2 ОН, ИО 2, ЙН 2, Сй, СРЗ, СНЕ 2. СН 2 Р или галоген; В-Н или1836354 12 Таблица 1 Испытание соединений где Вз - Н, СНз или галоген;Й 4 - Н; 5В 5 - Н, или Й 4 и Й 5 вместе образуютсвязь,У щ 0-4,отл ич а ю щийс я тем, чтобензоилимидазол общей формулы . 10(1 с,цгде й имеет указанное значение,В 1 и Й 2 - одинаковые или разные, Н,СНз, С 2 Н 5, СзН 7, Оснз, ЙО 2, СГз, СНГ 2,СН 2 Г или галоген 20подвергают взаимодействию с альдегидомобщей формулы где Я 1 и В 2- одинаковые или разные, Н, СНз,С 2 Н 5, Сзн 7, Оснз, ОН, СН 2 ОН, ЙО 2, ЙН 2,. Сй, СГз. СНГ 2, СН 2 Г или галоген; У имеет 30укаэанное значение,в присутствии титанового реагента с низкойвалентностью для получения соединенияобщей формулы35М. Й 1(с=снсндЩ40ци необязательно гидрируютданный продуктдля получения соединения общей формулы:45 р 1 ( сн-сн,(сн,1 р"1 3 и необязательно, когда Й - замещенная или незамещенная бензильная группа, его подвергают реакции гидрогенизации или реакции переноса водорода для получения соединения общей формулы гидрируют данный продукт или преобразуют данный продукт с помощью реакции переноса водорода для получения соединенияобщей формулы 2Тираж Подписноесударственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ 113035. Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 оизводственно-издательский комби город, ул,Гагарин атен Ингибирование ароматэзы и диомолазы в организме человека (С СС) под действием испытуемых соединений. Средняя концентрация ингибирования (1 С) представляет концентрацию, которая ингибирует 50 фермента