Способ получения замещенных 2-окси-3-1-(1н-имидазол-4-ил) алкил-бензамидов или их нетоксичных фармацевтически приемлемых солей кислот

(57) Испол обладающ тельной и Сущность мулы О ЮН Я 1ьер Жерт, Жан Го) и Эрнст Вульферт Я ЗАМЕЩЕННЫХ ОЛ-ИЛ)АЛ К ИЛ- Х НЕТОКСИЧНЫХ РИЕМЛЕМЫХ СОсолы Н- щей О ОНН 11-СН нные эна Получени ол-ил)а 81 имеет указаПример 1.-1-(1 Н-имидазов формулы,1 2-Окси-( С 4-ал кил.ченияами о где 81 - водородИзвестен сп ролизом нитрилЦель иэобре замидов с испо акции получе нитрилов, облад вовоспалительн или С соб и ния.исходных 2-о ил-бензонит лу д вгид - синтез новых беннием известной ремидов гидролизом мочегонной, протипотонической активи ил ов.тенияльзования аающихой и ги л-ил)метилН-и мида 4-и ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНВЕДОМСТВО СССР(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИ2-ОКСИ-1-(1 Н-И МИДАЗБЕНЗАМИДОВ ИЛИ ИФАРМАЦЕВТИЧЕСКИ ПЛЕЙ КИСЛОТ Изобретение относится к способу получения новых замещенных 2-окси-1 Н- имидаэол-ил)алкил-бензамидов, а также . их нетоксичных, фармацевтически приемлемых солей кислот, которые могут использоваться в терапии, общей формулыН й 1(5)5 С 07 О 233/56//А 61 К эование: в качестве препарата, го мочегонной, противовоспалигипотонической активностью, зобретения: продукт общей форНгде й 1 - водород или С 1 - С 4-алкил. Выход 70 О/, Реагент ): соответствующий 2-окси- 1-(1 Н-имидазол-ил-ал кил-бензонитрил. Гидролиз в кислой среде, Выделение в свободном виде или в виде нетоксичных фармацевтически приемлемых солей кислот, 2 пр.9 табл. ностью и значительно превосходящих своей активности препарат пропранололЦ ель достигается предлагаемым спо бом получения соединений общей формугидролизом в кислой среде 2-окси-1-( имидазол-ил)алкил-бензонитрила об формулыОН а 1 онитрил, а. Этил-бензилокси-(1 Н-имидазо метил-оксо-бутаноат.При 10 С добавляют за один раз 182 г (0,77 моль) 4-бензилокси-оксо-бутаноата в раствор 16,9 г (0,735 моль) натрия в 590 мл абсолютного этанола. Смесь перемешивают в течение 45 мин при температуре окружающей среды, затем охлаждают до -45 С и добавляют в нее за один раз расгвор 53,6 г (0,35 моль) хлоргидрата 4-хлорметилН- имидазола в 300 мл абсолютного этанола. Смесь доводят до температуры окружающей среды и перемешивают в течение 1 ч, Затем выпаривают суспензию досуха, Осадок поглощают раствором 35 мл концентрированной хлористоводородной кислоты в 900 мл воды и экстрагируют несколько раз диэтиловым эфиром. Водную фазу нейтрализуют раствором 18 г гидроокиси натрия в 200 мл воды и экстрагируют несколько раз этилацетатом. Органические фазы промывают водой и насыщенным водным раствором 5 10 15 20 хлорида натрия, Высушивают на сульфате натрия и выпаривают при пониженном давлении. Получают 107 г практически чистогоэтил-бензилокси-(1 Н-имидазол-ил)метил)-3-оксо-бутан оата, 25Выход 97 ,ЯМР-спектр (ОМНО): 1, 11 (ЗН, с), 2,98(2 Н, т),4,05(2 Н, ц),4,08(1 Н, т),4,25(2 Н, бсср),4,47 (2 Н, Я), 6,75 (1 Н, Я), 7,25 - 7,39 (5 Н, в),7,47 (1 Н, Д), 301 б, Этил-бензилокси-окси-(1 Нимидазол-ил)метил)-бутаноат,В раствор 101,2 г(0,32 моль) атил-бензилокси-(1 Н-имидазол-ил)метил-оксо-бутаноата в 600 мл этанола, охлажденно-. 35го до -20 С, добавляют за один раз ледянойраствор 6,03 г(0,16 моль боргидрида натрияв 25 мл воды. Доводят раствор до температуры окружающей среды и перемешивают втечение 1 ч, Затем добавляют 25 мл ацетона. 40Выпаривают раствор досуха и поглощают .осадок посредством 500 мл воды. Экстрагируют несколько раз этилацетатом, Органические фазы промывают водой инасыщенным водным раствором хлорида 45натрия. Высушивают на сульфате натрия ивыпаривают растворитель при пониженном давлении. Осадок очищают хроматог-.рафией на силикагеле (элюант: смесьдихлорметан;метанол:аммиак в объемном 50соотношении 93,5:6:0,5. Получают 95,8 гэтил-бензилокси-окси-(1 Н-имидазол(ЗН, 2); 2,90-3,05 (ЗН, т); 3,51 - 3,58 (2 Н, щ);3,96 - 4,11 (ЗН, 2 ц + 1 пз); 4,51 и 4,53 (2 Н, 25);6,73 - 6,75 (1 Н, 23); 7,25 - 7,36 (5 Н, гп).1 в, Хлоргидрат 4-окси-(1 Н-имидазол 4-ил)метил)-дигидро(3)-фуранона,Гидрогенизируют 93,9 г (0,295 моль), атил-бензилокси-окси-(1 Н-имидазол- -4-ил)-бутаноата в растворе в 500 мл абсолютного этанола и 65 мл раствора хлористо- водородной кислоты 6,8 н. в этаноле в присутствии 5 г 10 -ного палладия на угле и при давлении 3,5 бар. Затем фильтруют катализатор и удаляют растворитель при 65 С при пониженном давлении. Получают 67,1 г хлоргидрата 4-окси-(1 Н-имидазол-ил)метил)-дигидро(ЗН)-фуранона (смесь диастереоизомеров). Практически количественный выход,Соединение используют в чистом виде на следующем этапе.1 г. 31 Н-Имидазол-ил)метил)-2(5 Н)- фуранон,Нагревают в течение 75 мин при 160 С. при давлении 0,0013 мбар 67,1 г (0,295 моль) хлоргидрата 4-окси-(1 Н-имидазол- ил)метил)-дигидро(ЗН)-фуранона. Охлаждают и поглощают посредством 125 мл абсолютного этанола, Нейтрализуют путем добавления 70 мл раствора аммиака 5 н. в этаноле. Фильтруют суспенэию и удаляют растворитель при пониженном давлении, Осадок очищают хроматографией на силикагеле (элюант: смесь дихлорметан:метанол:аммиак в объемном соотношении 91,5:8:0,5), После рекристаллизации в ацетонитриле получают 27,5 г 3"(1 Н-имидазол-ил)метил)-2(5 Н)-фуранона, Выход 53(рассчитанный вместе по этапам 1 в и 1 г). Точка плавления 123 С,ЯМР-спектр (СОСз) дельта 3,63 (2 Н, ц);4,79 (2 Н, ц); 6,90 (1 Н, с); 7,25 (1 Н, квинтуплет); 7,52 (1 Н, б),1 д. 2-окси-(1 Н-имидазол-ил)-метил)-бензонитрил,В суспензию 24,6 г(0,15 моль) 3(Н-имидазол-ил)метил)-2(5)-фуранона в 225 мл безводного акрилонитрила последовательно добавляют 63 мл (0,45 моль) безводного триэтиламина и 57 мл (0,45 моль) триметилхлорсилана. Смесь нагревают в рефлюксе (72-74 С) в течение 4 ч. Затем выпаривают при пониженном давлении. Осадок обрабатывают за один раз посредством 75 мл концентрированного бромистого водорода и выдерживают при 80 С в течение 2 мин, Затем раствор выливают на лед, разбавляют путем добавления 300 мл этилацетата и 300 мл воды и нейтрализуют твердым бикарбонатом натрия. Фильтруют на цеолите, а фильтрат экстрагируют несколько раз этилацетатом. Органические фазы промывают водой и насыщенным водным раствором хлорида натрия, затем. высушивают на сульфате натрия и выпаривают при пониженномдавлении. Полученный осадок истирают впорошок в диэтиловом эфире. Получают22,8 г 2-окси-(1 Н-имидазол-ил)метилбензонитрила. Выход 760 .ЯМР-спектр(ОМНО): дельта 3,90(2 Н, Я); 56,88 (1 Н, ф 7,06 (1 Н, Я); 7,41 (1 Н, дд); 7,47(1 Н, дд); 7,99 (1 Н, д),Его хлоргидрат плавится при 245 С,2, 2-окси-1-(1 Н-имидазол-ил)зтилбензонитрил, 102 а. Этил-бензилокси-1-(1 Н-имидазол-ил)атил-З-оксо-бутаноат,(1 Н, Я+ д).26. Этил-бензилокси-окси-1-(1 Нимидазол-ил)этил-этилбута ноат.Это соединение получают, как в примере 16, путем восстановления этил-бензилокси-1-(1 Н-имидазол-ил)атил-оксоэтилбутаноата. Выход 910(смесь диастероизомеров).Масс-спектр:332(М+), 314. 287, 211,181, 135, 95,91. 302 в. Хлоргидрат 4-окси-(1 Н-имидазол-ил)этил)-ди гидро(ЗН)-фуранон,Это соединение получают, как в примере 1 в, путем гидрогенолиза атил-бензилокси-окси-1-(1 Н-имидазол-ил)этилбутаноата. Практически количественныйвыход, Получают смесь диастереоизомеров,которую используют в чистом виде на сле-дующем этапе,2 г. 3-1-(1 Н-имидазол-ил)этил(5 Н)- 40фуранон.Нагревают в течение 1 ч при 170 С, придавлении 13,3 мбар. 75,1 г (0,32 моль) хлоргидрата 4-окси-1-(1 К-имидазолип)этил- дигидро(ЗН)-фуранона в 30 мл 45этиленгликоля. Затем удаляют растворитель при давлении 0,0013 мбар. Осадок поглощают в 300 мл абсолютного этанола инейтрализуют путем добавления 63,2 млраствора аммиака 5 н,. в этаноле, Фильтруют суспензию и выпаривают растворительпри пониженном давлении, Осадок очищают путем хроматографии на силикагеле(элюант: смесь дихлорметан:метанол:аммиак в объемном соотношении 91,5:8:0,5). После рекристаллизации в ацетонитрилеполучают 41,9 г 3-.1-(1 Н-имидазолил)атил(5 Н)-фуранона. Выход 740(рассчитанный совместно по этапам 2 в и 2 г).Точка плавления 127-129 С. ЯМР-спектр (ОМНО): дельта 1,40 (ЗН, д);3,72 (1 Н, о); 4,84 (2 Н, т); 6,80 (1 Н. с); 7,35 (1 Н,с 1); 7,51 (1 Н, 5).2 д, 2-Окси-1-(1 Н-имидазолил)этил-бензонитрил.В суспензию 17,8 г (0,1 моль) 3-1-(1 Нимидазол-ил)атил(5 Н)-фуранона Ф 150мл безводного акрилонитрила последовательно добавляют 56 мл(0,4 моль) безводного триэтиламина и 50,7 мл (0,4 моль)триметилхлорсилана. Смесь нагревают в рефлексе в течение 3,5 ч, Затем выпариваютреакционную смесь при пониженном давлении. Осадок обрабатывают за один раз посредством 50 мл концентрированнойхлористоводородной кислоты и выдерживают при 80 С в течение 2 мин. Затем растворвыливают на пед, нейтрализуют насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и экстрагируют несколько разэтилацетатом. Органические фазы промывают водой и насыщенным воднымраствором хлорида натрия, затем высушивают на сульфате натрия и выпаривают при пониженном давлении, Осадокочищают путем хроматографии на силикагеле (элюант: смесь дихлорметан:метанол:аммиак в объемном соотношении93,5:6:0,5 . Получают 17,6 г 2-окси-1-(1 Нимидазол-ил)атил-бензонитрила практически в чистом виде. Выход 83, Точкаплавления 172 С,ЯМР-спектр (ОМНО); дельта 1,52 (ЗН, д);4,21 (1 Н, о); 6.86 (1 Н, с); 7,02 (1 Н, Я); 7,41 (1 Н,дд); 7,44 (1 К, дд); 7,85 (1 Н, Я).3, 2-окси-1-(1 Н-имидазол-ил)пентил-бензонитрил,Это соединение получают как в примере2 из атил-бензилокси-оксо-бутаноата и4-(1-хлорпентил)-1 Н-имидазола, Полученное соединение используют в чистом видена следующем этапе.П р и м е р 2, Получение 2-окси-1-(1 Нимидазол-ил)алкил-бензамидов формулы1 путем гидролиза 2-окси-1-(1 Н-имидазол 4-ил)алкил-бензонитрилов формулы И.1, 2-Окси-И 1 Н-имидазол-ил)метилбенэамид.Перемешивают до полного растворения13,1 г (бб ммоль) 2-окси-(1 Н-имидазолил)метил-бензонитрила (полученного попримеру 1.1) в 50 мл водного раствора 80 - ной серной кислоты (об,). Затем нагреваютдо 65 С в течение 3 ч, Реакционную смесьвыливают на лед и нейтрализуют бикарбонатом натрия, фильтруют и многократноэкстрагируют фильтрат этилацетатом,Органические фазы промывают насыщенным водным раствором хлорида натрия,высушивают на сульфате натрия и выпари 18363534. Хлоргидраты (+) -2-окси-1-(1 Н-имидазол-ил)этил)-бензамида и (-) -2-окси- (1-(1 Н-имидазол-ил)этил)-бензамида.Рацемический 2-окси-1-(1 Н-имида зол-ил)атил)бензамид (полученный в п.З)разлагают на его два энантиомера путем хроматографии на хиральной фазе альфагликопротеин (элюант; изопропиловый спирт:фосфатный буферный раствор 0,02 10 моль; рН 7; в обьемном соотношении 1:99.Затей преобразуют каждый энантимер ами. да в соответствующей хлоргидрат указанным способом. Таким образом получают в почти равных количествах.15 а) хлоргидрат гидратированного (+) -2 окси-1-(1 Н-имидазола-илэтил-бензамида. Точка плавления 107,8 С (вода).а)о =+82,04 (с) 1, метанол).ЯМР-спектр(ОМЯО): дельта 1,57 (ЗН, б);20 3,30 (5 Н (5 Н; гп); 4,56 (1 Н, р); 6,83 (1 Н, т); 7,23(1 Н, сад); 7,40(1 Н, 3); 7,82(1 Н, сЫ); 7,92(1 Н, гп);8,51 (1 Н, гп); 8,98 (1 Н, б), 13,5-14,5 (2 Н, гп).б) хлоргидрат гидратированного ( -) -2 окси-1-(1 Н-имидазол-ил)этил)-бенэами да. Точка плавления 107,4 С (вода).а)о = -79,13 (с = 1, метанол).ЯМР-спектр: идентичен предыдущему5. Хлоргидрат 2-окси-1-(1 Н-имидазол 4-ил)пентил)-бензамид.30 Это соединение получарт, как в и, 1 из2-окси-1-(1 Н-имидазол-ил) пентил)-бензонитрила (полученного по примеру 1.3),Полученный таким образом 2-окси(1 Н-имидазол-ил)пентил)-бензамид раство ряют в растворе хлористоводороднойкислоты 2,5 н, в этаноле, а хлоргидрат 2-окси -3-1-(1 Н-имидазол-ил) и ентил-бензамида осаждают . путем добавления диэтилового эфира. 50 вают при пониженном давлении. Осадок очищают путем хроматографии на силикагале(элюант: смесь дихлорметан:метанол:аммиак вобъемном соотйошении 84;15:1. Получают 9,8 г2-окси-З.Я 1 Н-имидазол-ил)метил)-бензамида. Выход 68 О. Точка плавления 197,6 С,Анализ для С 11 Н 1 йз 02, 7 ь:расчетный. С 60,83; Н 5,07; й 19,35,фактический: С 60,91; Н 5,06; й 19,32.2, Хлоргидрат 2-окси-И 1 Н-имидазол 4-ил)метил)-бензамид.Добавляют 2 г 2-окси-(1 Н-имидазолил)метил-бензонитрила (полученного попримеру 1.1) и 4 мл воды в 40 мл метанола,предварительно насыщенного приС газообразным потоком хлористоводороднойкислоты. Смесь перемешивают в течение 24 чпри температуре окружающей среды. Затемконцентрируют раствор при пониженномдавлении и нагревают осадок при 75.С в течение 3 ч. Затем осадок дважды рекристаллиууют в воду. Получают 1,5 г хлоргидрата2-окси-(1 Н-имидазол-ил)метил)-бензамида, Выход 590 Точка плавления 287,8 С.Анализ для С 11 С 11 йз 02 НС 1, ь:расчетный. С 52,07; Н 4,73; й 16,57;СГ 14,0,фактический; С 52,04; Н 4,76; й 16,54, СГ13,94,3. Хлоргидрат 2-окси-1-(1 Н-имидазол-ил)этил)-бензамид,Перемешивают при 65 С в течение 3 чсуспензию 1,07,г (5 ммоль) 2-окси-1-(1 Н- .имидазол-ил)атил-бенэонитрила (полученного по примеру 1.2) в 4 мл водного,раствора 80%-ной серной кислоты (об),.За"тем реакционную смесь выливают на лед инейтрализуют бикарбонатом натрия. Экстрагируют несколько раз этилацетатом. Органические фазы высушивают на сульфате натрия, а 4растворитель выпаривают при пониженномдавлении. Осадок поглощают посредством 50 млводного раствора хлористоводородной кислоты 6 н. и затем нейтрализуют посредствомводного раствора гидроокиси натрия 1 н. Образовавшийся осадок фильтруют, промываютводой и диэтиловым эфиром и высушивают ввакууме. Получают 0,7 г 2-окси-1-(1 Н-имидазол-ил)этил)-бензамида (В) в практическичистом аиде, Выход 70 6,Полученное соединение преобразуют вхлоргидрат в этаноловом растворе хлористоводородной кислоты в присутствии диэтилового эфира. Точка плавления 240-243 С,Анализ для С 12 Н 1 зйз 02 НС 1, фА: 5расчетный, С 53.83: Н 4,86: й 15.70;СГ 13,27.фактический: С 54,0; Н 4,88; й 15,73;СГ 13,17. ЯМР-спектр (ОМЯО): дельта 0,83 (ЗН, 1); 1,08 - 1,34 (4 Н, гп); 3-3-3,5 (2 Н, гп); 4,44 (1 Н, 1);6,82 (1 Н, с); 7,37-7,40 (2 Н, Б + б); 7,82 (1 Н, б); 8,97(1 Н, Я). Фармакологическим испытаниям подвергались следующие соединения. полученные согласно изобретению:хлоргидрат 2-окси-(1 Н-имидазол- ил)метил)-бензамид (соединение А),хлоргидрат 2-окси-З-(1 Н-имидазол- ил)этил)-бензамид (соединение В);хлоргидрат (+) -2-окси-1-(1 Н-имидазол-ил)этил)-бензамид (соединение С).1. Противоишемическая сердечная активность. а), Модель острой коронарной недостаточности у живой собаки.У живой собаки, снабженной приспособлениями (пневматическая манжетка вокруг нижней и исходящей коронарной ар 1836353 10терии и внутрисердечные электроды), на 6 мин перекрывается коронарная артерия посредством пневматической манжеты, что вызывает миокардную ишемию,которая отражается на электрокардиограммепосредством повышения линия Я т, Противоишемическое действие соединения выражается в уменьшении повышения сегмента Яг.В табл. 1 показано, что соединения, подвергшиеся испытанию при дозе ОЕ 2 а, ммоль/кг, и введенные внутривенно группам из 10 животных, вызывают среднее 10 уменьшение, по меньшей мере на 200 повышения линии Ят у всех животных. Вкачестве контрольного соединения используют 1-(иэопропил-аминоэ-(1-нафти- .локси)-2-пропинол (или и ропанолол),Из табл, 1 видно, что соединения, полученные согласно изобретению, обладаютпоразительной противоишемической активностью.б). Испытание на бегущей дорожке.Использована группа иэ по меньшей мере 4 собак, снабженных приспособлениями(внутрисердечные электроды), которыеимеют на уровне коронарной артерии органический стеноз, Он вызывает нарушениеравновесия между потребностью и прито. ком кислорода, когда от животного требуется нагрузка, Это нарушение равновесияотражается на электрокардиограмме путемповышения линии Ят.При испытании собака бежит со скоростью 12 км/ч по бегущейдорожке с уклоном15 в течение 1 мин. При испытании регистрируется повышение линии Я ти естественное повышение частоты биения сердца.Эксперимент повторяют по меньшей мере 4раза, а среднее из полученных значенийпринимается за контрольное значение 40(1000 ) для группы животных. Затем животное оставляют в покое как минимум 24 чперед новым испытанием под действиемизучаемого соединения.Изучаемое соединение медленно вводится (за 1 мин) внутривенно за 5 мин передновым испытанием усилия, В ходе испытания регистрируются те же самые парамет-.ры. В табл. 2 приводится для указаннойдозы среднее наблюдаемое уменьшение ли.нии Ях (в%) и снижение частоты биениясердца (биение/мин) по отношению к значениям частоты, получаемым в ходе первона- .чального испытания,Иэ табл. 2 видно, что соединение А обладает хорошей противоишемической активностью, подтвержденной сильнымуменьшением линии Ят, что также отмечается при использовании пропранолола, но только при намного увеличенной дозе. Кроме того, в противоположность пропранололу, который одновременно вызывает сильное снижение сердечного ритма в течение испытания, что нежелательно и вредно для поддержания усилия, соединение А не препятствует естественному повышению частоты биения сердца в ходе испытания. Следовательно, оно способствует правильной адаптации частоты биения сердца по отношению к усилию с одновременным препятствованием ишемии.2. Противоишемическая мозговая активностьа). Общая перманентная мозговая ишемия у крыс.Самцы крыс (рода Вистар (масса 200 - 250 г) анестезируются путем ингаляции галотана (1-5), содержащегося в смеси ЙО 2-02 (70:30), Обе общие сонные артерии одновременно перевяэываются вблизи перекрестка внутренней сонной артерии и наружной.сонной артерии по технологии, описанной М,Ле Понсэн-Лафит и др. Фармакологический журнал (Париж), 14, (1983), 99 - 102,Тестируемое соединение вводится внутрибрюшинным путем первый раз эа 30 мин перед перевяэыванием и затем через 30 и 270 мин после перевяэывания.На следующий день и через день определяют неврологический дефицит у выживших животных по известному методу, В ходе этой оценки принимаются во внимание следующие сенсорно-моторные функции: самопроизвольная подвижность, рефлекс схватывания, зрительная реакция и реакция на потерю опоры, рефлекс сгибания лап, рефлекс выпрямления, тест подвешивания за хвост. Минимально возможное количество очков для животного, не подверженного ишемии, составляет 17.В табл. 3 приводится применительно к соединению А, введенному внутрибрюшинно при дозе 0,76 мг/кг (3,2 нмоль), среднее значение неврологических очков, определенных для всех выживших животных контрольной группы и обработанной группы, зарегистрированных через 2 дня после перевязываний. Статистическое значение (Р) разницы между этими средними значениями определяется по тесту Ман-Витнея.Из табл, 3 видно, что соединение А при очень слабой дозе значительно смягчает у обработанных животных неврологический дефицит, вызванный ишемией,б) Односторонняя многочасовая мозговая ишемия у крыс.У самцов крыс Спрага - Доулея (ЯРГ), возрастом 8 - 9 недель вызывают постоян 1836353 12ную одностороннюю церебральную ишемию (или эмболизацию) путем введения в правую сонную артерию 2000 микросфер диаметром (58. 2) мкм после перевязывания правой артерии птеригопалатины.Исследуемое соединение вводят в первый раз за 30 мин до и второй раз после через 30 мин после эмболизации, а контрольной группе животных вводят только физиологическую сыворотку, Затем крыс оставляют в покое, У выживших животных через 6 дней после восстановления измеряют:1) остаточный неврологический дефицит с помощью теста положения тела и походки животных (тест А, максимальное количество очков 4),В этом тесте оцениваются анормальное положение задних лап; контралатеральный наклон тела при передвижении; гомолатеральное продольное сгибание тела и анормальная походка.2) сенсорно-моторные функции (самопроизвольная Подвижность, рефлекс схватывания, зрительная реакция и реакция на потерю опоры (тест В, максимальное количество очков 10), (С,Капдевиль,см. выше),3) латеризованная сенсорно-моторная ответная реакция (контралатеральная сторона) (тест С, максимальное количество очков 3). Она оценивается в комбинации .измерений зрительной реакции, рефлекса ориентации головы к боковому сенсорному раздражителю и кожно-подошвенного рефлекса.4) осязательное отмирание с левой стороны (тест О, максимальное количество очков 300). В противоположность другим указанным тестам, для которых дефицит тем больше смягчается, тем больше счет, здесь дефицит тем больше, чем ближе счет к 300,На седьмой день измеряют еще отек, имеющийся в различных гомолатеральных мозговых структурах,В табл, 4 приводится для соединения А, введенного внутрибрюшинным путем при дозе 0,76,иг/кг (3,2 нмоль/кг), результаты, полученные в тестах А-О, т.е. среднее .значение неврологических очков, определенных по всем выжившим животным контрольной группы и обработанной группы через 6 дней. В ней указано также среднее изменение массы тела. измеренной на седьмой день.Статистическое значение (Р) разницы между средними значениями, рассчитанными для контрольных животных и обработанных животных, определяется по тесту Ман -Витнея.Из табл, 4 видно, что соединение А значительно смягчает неврологический дефи 5 цит и поведение, вызываемое ишемией, иулучшает ход изменения массы обработанных животных.В табл. 5 указано количество воды,удержанное в различных гомолатеральных10 мозговых структурах и у контрольных животных, и у выживших обработанных животных на 7-й день после вынесения болезни,Полученные результаты показывают,что обработка соединением А значительно15 уменьшает гомолатерэльный отек в различных изучениях мозговых структурах.3. Агонистической а 2-адренергическоесвойство,а), Сравнительна я фиксация с радиоли 20 гандом.Целью экспериментов по сравнительной фиксации является измерение сродства, которое имеет соединение, полученныесогласно изобретению, для аг-адренерги 25 ческих рецепторов, Эти эксперименты выявляют сравнительность фиксации наадренергических рецепторах, с одной стороны, изучаемого соединения и, с другойстороны, радиолигэнда, который с этом ча 30 стном случае ау-адренергических рецепторов, являетсяН клонидином, известнымкак избирательный а 2-адренергическийаго.нист,Кривые смещения фиксацииН) клони 35 дина определяют при девяти концентрациях соединения А, составляющих 10 -10моль/л, и с тремя различными мембрэнны;,ми составами мозга крысы. Образцы инкубируют в течение 30 мин, затем фильтруют40 в вакууме на фильтре Ватман ОР/В. Фибтипы промывают три раза посредством 5 млбуферного раствора трис-НО (рН 7,5 - при0 С), затем высушивают в течение 1 мин.Радиоактивность измеряют в среде эко 45 нофтор (-йЕМСогр,) Использующийся Н)клонидин (25,5 С 1/ммоль) представляетсяфирмой Амерхэм,Сродство соединения А для а 2-адренергических рецепторозв рассчитывают изкривых перемещенияН) клонидина. Оновыражается концентраций (1 СБо в моль/л)соединения А, необходимой для получения50-ного торможения фиксации радиолиганда на рецепторах. Полученные результа 55 ты показывают, что соединение А имеетзначительное сродство для а-адренергических рецепторов:1 Сво (8,90 ч,72) х 10 9 моль/л, 13 1836353.б). Раздражение выделенного предсердия морской свинки,Выделение норадреналина на уровненервных окончаний регулируется механизмом ретроконтроля пресинаптическимиа-адренергическими рецепторами. Этотмеханизм на предсердии морской свинки,Электрическое раздражение выделенного предсердия морской свинки приводитк выделению норадреналина, которое выражается в повышении частоты биения сердца(тахикардия), что тормозится й 2-агонистом,таким, как, например, клонидин, в пропорции, которая зависит от использованной дозы агониста.Действие а 2-агониста может ограничиваться в присутствии а-специфического антагониста, такого, как альфа-йохимбин.Активностьп ч(го соединений, полученныхсогласно изобретению, по отношению кпресинаптическим а 2-адренергическим рецепторам определяют на выделенном предсердии морской свинки с электрическимраздражением по известному методу. Исследуемое соединение тестируют при увеличивающихся концентрациях 10 -10моль/л. Определяют концентрацию (1 Сзо вмоль/л), которая вызывает ЗОО-ное снижение максимальной тахикардии, исходнополученной при электрическом раздражении предсердия.при отсутствии тестируемого соединения,В табл, 6 показаны,концентрации 1 Сэо(в моль/л), полученные для соединений, согласно изобретению, а также для клонидина,Из табл, 6 следует, что соединения,полученные согласно изобретению, противодействуют тахикардии, вызваннойэлектрическим раздражением, при оченьнебольших концентрациях.Кроме того, при концентрации альфайохимбина 10 моль/п концентрация сое-бдинения А, необходимая для полученияЗОО-ного снижения тахикардии, превышает10 моль/л, Эти результаты доказывают, чтосоединения, полученные согласно изобретению, действуют посредством специфического механизма через а 2-агонистическоевоздействие,в). Раздражение подвздошной кишкиморской свинки.Фрагменты продольных мышц, связанных с индикатором изометрического усилия, погружают в раствор тирада инатягивают с усилием 1 г.Электрическое раздражение парасимпатических нервов, приводящих в фрагменты подвздошной кишки, вызывает сокращение мышцы. Это сокращениеуменьшается в присутствии пресинаптического а 2- агониста, а уменьшение зависит отконцентрации использованного агониста.5 Это действие антагонизируется одновременным наличием а.;-антагонистического соединения, такого, как альфа-йохимбин.Изучаемые соединения тестируютсяпри возрастающих концентрациях от 1010 до 10 э моль/л.Определяют концентрацию ( СБо вмоль/л), которая уменьшает на 500 интенсивность сокращения мышцы.В табл. 7 приводятся концентрации15 1 С 5 о(в моль/л), полученные для соединений,полученных согласно изобретению. Эти результаты показывают, что эти соединенияявляются активными при очень небольшихконцентрациях,20 В присутствии альфа-йохимбина приконцентрациях 10 моль/л концентрациясоединений, например, А или Б, котораянеобходима для 50;-ного уменьшения интенсивности сохранения мышцы, является25 более высокой и превышает 10 моль/л, чтодополнительно подтверждает тот факт, чтосоединения, полученные согласно изобретению, действительно действуют на уровнепресинаптических а 2-адренергических ре 30 цепторов,4, Диуретическая активность.Диуретическая активность соединений,полученных согласно изобретению, определяют на гончих собаках (6 кобелей и 6 сук)35 посредством изучения случайных перекрестных перестановок, рандамизированныхпо 6 путям.Изучаемое соединение вводится внутривенно в увеличивающихся дозах 2; 6,5; 20;40 65 и 200 рг/кг. В течение первых 3 ч послеиньекции измеряют объем выделенной мочи,В табл, 8 для соединения А приводитсясреднее относительное увеличение (в ) вы 45 деленной мочи по сравнению с группой животных, не получивших соединение,Результаты показывают, что минимальная активная доза, вызывающая сравнительное статистическое увеличения (Р50 0,05) мочевыделения составляет у кабелей6, б /юг/кн, а у сук -2 р г/кг.5, Токсичность.Токсичность соединений, полученныхсогласно изобретению, определяют на самцах мышей ММВ посредством теста Ирвина.Возрастающие дозы изучаемого соединения вводят внутрибрюшинно группам изтрех мышей до достижения смертельной до1836353 16 Таблица 1 лица Таб 3 Таблица гические счета по истечении 6 дней после внесения болезни дние число выживших животных в каждой груп зы доза, вызывающая смерть двух животных из трех в течение 48 ч),В таблице 9 указана смертельная доза, отмеченная для соединений, полученных согласно изобретению.Из табл. 9 следует, что соединения, полученные согласно изобретению, являются слаботоксичными.Формула изобретения Способ получения замещенных 2-окси-1-1 Н-имидаэол-ил)ал кил)-бензамидов общей формулы О р рН 2 Й-Сисло выживших животных где В - водород или С 1-С 4-алкил или ихнетоксичных фармацевтически приемлемыхсолей кислот, о т л и ч а ю щ и й с я тем. чтогидролиэуют в кислой среде 2-окси-11-(1 Н 5 имидазол-ил)алкил-бензонитрил общейформулыОН й 1июС ,Г10 ц йНгде 81 имеет указанные значения, с выделением целевого продукта в свободном видеили в виде нетоксичных фармацевтически15 приемлемых солей кислот,1836353 17 Таблица 5 бли Сниж ахикарди сло испытаний ца 7 Торможение сокращения подвздошной кишки морской свинкиблица 8 антности: "Р0,05;.хх Р Анал блица Количество воды в различных, гомолатеральных мозговых структурах