Способ получения гликозида

СОЮЗ СОВЕТСНИСОЦИАЛИСТИЧЕСНРЕСПУБЛИК Й КОМИТЕТ И ОТНРЫТИЯ ГОСУДАРСТВЕНН ПО ИЗОБРЕТЕНИ ПРИ ГКНТ СССР ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Н ПАТЕНТ 1 ОН 1 НЗСО О ОН(71) Фармиталиа Карло Эрба С.п.А.(1 Т)(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЛИКОЗИДА(57) Изобретение относится к производным антрациклиновых гликозидов, вчастности к получению гликозидов ф-лыСОСН,Н Изобретение относится к спосполучения новых антрациклиновыхкозидов общей формулы,ЯО 1590045 51)5 С 07 Н 15/24, А 61 К 3 где К, - Н (1 а) или гидроксил (1 б), обладающих противоопухолевой активностью. Цель - разработка способа получения более активных соединений. Получение ведут исходя из 3 -амидо/-салицилиден-эпи-0-трифторметансульфонат производные, последнее затем подвергают кислотному гидролизу. Полученный 3-деамино-деокси- -4-эпи,4-эпиминодаунарубицин через соответствующее И-трифторацетил производное превращают в 4-деок-, си-эпи-И-трифторацетил-деамино- -3-гидроксидауномицин, который после мягкого щелочного гидролиза переводят в целевой продукт 1 а, который в свою очередь.в случае необходимости через соответствующее 14-бром- производное дауномицина переводят в производное доксорубицина 16. 3 табл. где К, - водород или гидроксильнаягруппа,обладающих противоопухолевой активностью. Цель изобретения - получение новых производных антрациклиновых гликозидов, обладающих лучшими свойствами, чем родоначальники данного ряда гликозидов даунорубицин и доксорубицин достигается путем синтеза исходя из 3 -амино-эпидаунорубицина и через соответствующие 3-эпи-И-салицилиден и И-салицилиден-эпи-0-трифторметансульфонат производные, последнеезатем подвергают кислотному гидроли зу, полученный 3-деамино-деокси- -3-4-эпи,4 - эпиминодаунарубицин через соответствующее И-трифтораце"5 тил, производное превращают в 4 -деокси-эпи-трифторацетил-деамиl но- гидроксидауномицин который после мягкого щелочного гидролиза переводят в целевой продукт 1 а,который в свою очередь в случае необходимости через соответствующее 14-бромпроизводное дауномицина переводят в производное доксорубицина 1 б.П р и м е р 1 3 Эпи И-салици лидендаунорубицин (111).Раствор 2 г 3-амино-эпидаунорубицина (11) в смеси 80 мл воды и 20 мл ацетона обрабатывают при комнатной температуре 0,5 мл салицилаль дегида при рП 8. Через 10 мин добавляют этилацетат и отделяют органическую Фазу, дважды промывают ее водой, сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и упаривают досуха под вакуумом.Остаток сначала растирают с гексаном для удаления следов салицилальдегида, затем собирают, сушат под вакуумом при 30 С и получают целевой про дукт почти с количественным выходом, К = 0,21 при тонкослойной хроматограФии на Кизельгеле Р 254 (Мерн) ис-. пользуя в качестве элюирующего растворителя смесь метиленхлорида - ацетон 8:2 об./об.35П р и м е р 2. 3-Деамино-деокси-эпи-эпи,4 -эпииинодаунорубицин (1 О (азиридин).К раствору 2 г 3 -эпи-Я-салицили 40 дендаунорубицина (111) в 20 мл безводного дихлорметана и 2 мл сухого пиридина при -10 С добавляют растворо0,8 мл трифторметансульфоангидрида в10 мл дихлорметана. После выдержки 45 смеси при -10 ОС в течение 1 ч ее разбавляют дихлорметаном и промывают водой, холодной 0,1 М соляной кислотой, холодным водным 5 Х-ным бикарбонатомнатрия и водой, органическую Фазу после сушки над безводным сульфатом натрия фильтруют, растворитель отгоняют в вакууме, получая 0-салицил:иден-.3 - -эпи-0-трифторметансульфонат.К 0,50 при тонкослойной хроматографии на Кизельгеле Р 254 (Мерк), ис55 пользуя в качестве элюирующего растворителя смесь дихлорметана и ацетонав соотношение 95:5 об,/об. Полученный сьрой продукт растворяют в 50 мл метанола и добавляют 0,2 г моногидрата-толуолсульфокислоты. Раствор в течение 1 ч выдерживают при комнатной температуре, затем к нему добавляют 100 мл воды и экстрагируют небольшим количеством дихлорметана. Водную Фазу доводят до рН 8,0 1 М едким натром и добавляют дихлорметан. Органическую фазу отделяют, промывают водои сушат над безводным сульфатом натрия и растворитель выпаривают до малого объема.Смесь очищают на хроматографической колонке с силикагелем, поддерживая при рН 7, используя в качестве элюирующего растворителя смесь дихлор метан - этанол, Элюат, содержащий це- левой продукт (17) промывают водой,. дихлорметаном и кристаллизуют.Масс-спектр 509 (м+); т,пл. 135137 С.К 0 38 при тонкослойной хроматоЕграфии на Кизельгеле Р 254 (Мерк). используя в качестве элюирующего растворителя смесь дихлорметан - метанол - уксусная кислота - вода. (30:4: ;1 ф 05 об./об.).Н ЯМР-спектр (200 МГц, в СПС 1 ): 8,02 (двойной дуплет, 1 = 1,1, 7,7 Гц, 1 Н, Н); 7,76 (двойной дуплет, Л =7,7, 7, 7 Гц, 1 Н, Н); 7,37 (двойной дуплет, Д = 1, 1, 7,7 Гц, 1 Н, Н);5,31 (двойной дуплет, Л =3,0, 4,8 Гц, 1 Н Н); 5,17 (двойной дуплет, Л = = 2,0, З,б Гц, 1 Н, Н); 4,32 (двойной дуплет, Л = 1, 6,7 Гц, 1 Н, Н); 4,07 (синглет, ЗН, ОСН,-4); 3,17 (двойной дуплет, Л =,19,2 Гц, 1 Н, Не); 2,95 (дуплет Л = 19,2 Гц, 1 Н, Нах);2,46 (тройной дуплет, 1 = 2,0, 2,0, 15,0 Гц, 1 Н, Не); 2,43 (синглет, ЗН СОСН); 2,30 (тройной дуплет, Л = 1,5, 43 64 Гц 1 Н Н-З) 19 20 (мультиплет, 2 Н, Нах, Нах).; 1,87 (тройной дуплет, Д = 1,5, 3,0, 14,6 Гц, 1 Н Н 2 е); 1,44 (дуплет д = 6,7 Гц, ЗН,СН -5)П р и м е р 3. 3-Деамино-деокси-З,-окси-эпи-аминодаунорубицин гидрохлорид (1 а).1 г азиридина переводят в Н-трифторацетильное производное (Ч) обработкой 1,2 мл ангидрида трифторуксусной кислоты в безводном дихлорметане.) После обработки сырой продукт Ку0,7 при использовании тонкослойноихроматографии на Кизельгеле Р 25490045 6 50 55 5 15 (Керк), применяя в качестве элюирующего растворителя смесь дихлорметанацетон в соотношении 4:1 об,/об.) растворяют в 20 мл ацетона и обрабатывают каталитическим количеством серной кислоты при 10 С, Смесь разбавляют 200 мл дихлорметана, промывают водой, водным 5 Х-ным бикарбонатом натрия и водой. Растворитель отгоняют в вакууме, остаток очищают на колонке с силикагелем, используя дихлорметан в качестве элюирующего растворителя. В результате получают 0,7 г 4-деоксиФ -4 -эпи-И-трифторацетил-деамино- -гидроксидауномицина (Ч 1).К 0,21 при применении тонкослойной хроматографии на Кизельгеле Р 254 (Мерк), используя в качестве элюирующего растворителя смесь дихлорметана и ацетона (4:1 об,/об.).Продукт (Ч 1) медленно. растворяют в водном 0,1 н,растворе едкого натра при 0 С, осуществляя гидролиз Н-триофторацетильной защитной группы. После 1-часовой выдержки при ОфС раствор доводят до рН 8,6 децинормальной соляной кислотой и экстрагируют дихлорметаном, Растворитель выпаривают, получая 0,5 г остатка, который обработкой метанольным хлористым водородом переводят в хлоргидрат целевого продукта (1 а).Масс-спектр ГД 527 (М+), т.пл, 153 С (с разлож.).К О, 18 на тонкослойной хроматограмме на Кизельгеле Р 254 (Мерк), используя в качестве растворителя дихлорметан - метанол - уксусная кислота - вода в соотношении 30:4:1: ф 0,5 об./об.Н-ЯМР (200 МГц, СПС 1 э): 8,02 (двойной дуплет, Л 0,9, 8,5 Гц, 1 Н, Н); 7,77 (двойной дуплет, Л = 8,5, 8,5 Гц, 1 Н, Н); 7,38 (двойной дуплет, 7 = 0,9, 8,5 Гц, 1 Н, Н); 5,52 (двойной дуплет, 3 = 1,40 Гц, 1 Н, Н); 5,28 (двойной дуплет, Л = 1,8, 4,0 Гц, 1 Н, Н);4,07 (синглет, ЗН, ОСН,-4); 3,69 (двойной квартет, 3 = 6,3, 9,5 Гц, 1 Н, Н); 3,51 (тройной дуплет, Л =4 8, 9 5, 11 6 Гц, 1 Н, 11-3); 3 22 (двойной дуплет, 1 = 1,9, 18,9 Гц, 1 Н, Не); 2,94 (дуплет, Л = 18,9 Гц, 1 Н, Нах); 2,40 (синглет, ЗН, СОСН,);2,2-2,4 (мультиплет, 1 Н, Цах); 2,30 (двойной дуплет, д .= 9,5, 9,5 Гц, 1 Н+ Н); 2,0-2,2 (мультиплет, 2 Н, Не,Не); 1, 70 (тройной дуплет, 3 4,04,6, 13,2 Гц, 1 Н; Нт 2 ах); 1,31 (дуплетЮ = 6 фЗ Гцф ЗНэ СНэ 5)П р и м е р 4. 3 -Деамино-окси-деокси-эпи-аминодоксоруби( /цин гидрохлорид (1 б).0,5 г полученного соединения 1 а,растворенного в смеси 7,5 мл безводного метанола, 21 мл диоксана и 0,5 млэтилфторформиата, подвергают обработке 2,1 мл раствора 0,93 г брома в10 мл хлороформа. Через 3 ч при 10 Ссмесь выливают в смесь 105 мл этилового эфира и 50 мл петролейного эфира, Полученный красный осадок послефильтрации и промывки этиловым эфиром растворяют в смеси 15 мл ацетонаи 15 мл 0,25 н.водного бромистого во 20 дорода. Спустя 15 ч при комнатнойтемпературе добавляют 9 ил воды и раствор экстрагируют хлороформом, удаляя агликоны.Затем водную фазу экстрагируют25 Н-бутанолом до тех пор, пока экстракты обесцветятся,Органические экстракты Ь-бутанол)выпаривают под вакуумом до небольшо-го объема (около 9 мл) и осаждаютэтиловым эфиром, получая 0,45 г соответствующего 14-бромпроизводного. Полученное производное растворяют в9 мл 0,25 н,водном растворе бромистого водорода и обрабатывают 0,75 гформиата натрия в 8 мл воды.Реакционную смесь выдерживают прикомнатной температуре при перемешивании в течение 48 ч и затем добавляют1 н.хлористоводородной кислоты, дово 40 дя рН до 4.Полученную смесь экстрагируют смесью 1: 1 этиловый эфир - этилацетат сцелью удаления некоторых линофильныхзагрязнений. Водную фазу, после под- .нятия значения рН до 7,6 водной ИаНСОЭповторно экстрагируют хлороформом дотех пор, пока экстракты не обесцветятся,Все собранные хлороформные экстракты сушат над На ЗО , выпаривают до не большого объема (около 45 мл) под вакуумом. Полученный красный раствор до водят до рН 3,5 водным метанольным раствором хлористого водорода и добавляют в.него избыток этилового эфира, получая 0,30 г целевого соединения (1 в). Т.пл, 180 С (разл.), СРД-МС 543 (М+) .1590045 ТСХ на Кизельгеле Р 254 (Мерк) при использовании злюентной системы ди" хпорэтан:метанол;уксусная кислота:вода (30:4:1;0,5 об./об.) показывает К= 0,1Биологическая активность.Цитотоксичную активность новых антрациклиновых гликозидов определяли ин витро на клетках Не 1 а-клетках шеечной 10 эпителиальной карциономы человека клетки, клетках Рлейкемии, чувствительны к доксорубицину; клетках Д- (нг/ л) Соединениег РРх 3 82023 30 35 9 1 10,5 24,5 аунорубици 1 аДоза, определяющая 50% подавленияконтрольными.Соединения, опыты с которыми прове дены ин виво против Расцитической лейкемии и Гросс-лейкемии, показали хорошую противоопухолевую активность по сравнению с даунорубицином,особенно при пероральном выведении.Опыты проведены на СРР мышах, зараженных интралеритониально 1 О клетка 6ми Расцитической лейкемии,Результаты приведены в табл. 2Та бли ца сравнени исла кле риведены в табл. 3 Результат лица Соединение 0 165 15 1928,2 175 11,5 230 16,1 240 22,5 130 О/20 2/20 О/20 О/10 О/10 О/10 ауноруби В23иСоединение т- ьф ень спу оли.ость жик лед олжинтрольаунорубицин 2, 9 4,4 1 а 1,9 2,9155 150 140 100 дс прйжизФор ально денопухолевыСпос формулы+ Обработка интраперитониспустя после заражениями клетками.+ Среднее времяпрепаратом мылисреднему временой группе х 100,Оценка проведена на осприжизненной биопсии.Действия против Гросс-леедены на СЗН мышах, инокулутривенно 20 х 10 клетка6 О/10 8/10 О/10 О/10 9/10 4 О/10Ч Р/Рх лейкемии, устойчивых к доксорубицину; Еочо-клетках человека аденокарциномы толстой кишки, чувствительные к доксорубицину; Ьочо/Рхклетках человека аденокарциономы толстой кишки, устойчивых к действию док сорубицина.Продолжительность действия соединения 24 ч в сравнении с даунорубицином)Результаты представлены в табл. 1,Таблица 1 Лечение внутривенно дпосле инокуляции, опухСредняя продолжительнни мышей, подвергнутчению,. к средней протельности мышей в коной группе."Оценка на основе даннненной биопсии. ла изобретенияполучения гликоэида общей1590045 10 О ОН11 СОСН 3 ОН НЗСО О ОНвн, О Составитель Г. КонноваТехред М.Дндык Корректор Н, Король Редактор Н. тули Заказ 255ВНИИПИ Го Тирак 3 Подписи КНТ СССР арственного комитета по иэо 113035, Москва, Ж, Р етениям и открытиям пушская наб., д. 4/5 оизводственно-издательский комбинат "Патент.", г. Уагор Гагарина, 101 где К - водород (1 а) или гидроксил(1 б),о т л и ч а ю щ и й с я тем, что 3- -амино-эпидаунорубицин формулы растворенный в смеси вода - ацетон4: 1 об./об. подвергают взаимодействиюприкомнатной температуре с салицилальдегидом с получением соответствующего 3 -эпи-Н-салицилиденпроизводного (111), которое подвергают взаимодействию с трифторметансульфоновымангидридом при -10 С в безводном дихлорметане и в присутствии сухого пиридина и полученный Н-салицилиден--эпи-0-трифторметансульфонат растворяют в метаноле и подвергают кислотному гидролиэу при комнатной тем-,пературе в течение 1 ч п-толуолсульфокислотой с получением 3 -деамино-деокси-эпи-эпи,4 -эпимино-даунорубицина (1 Ч), который превращаютв соответствующее 0-трифторацетилпроизводное (Ч) обработкой трифторуксусным ангидридом в растворе дихпорметана, которое в свою очередь подвергают взаимодействию с каталитическим количеством серной кислоты в ацетоне при 10 С и полученный 4-деокси"-4 -эпи-Н-трифторацетил-деамино 3.гидроксидауномин (ЧЕ) подвергаютпрн 0 С в течение 1 ч мягкому щелоч.ному гидролизу 0,1 н.водным растворомгидроокиси натрия, получая целевой2 О продукт Еа в виде гидрохлорида обработкой метанольным хлористым водородом в метаноле, который, в случае необходимости, превращают в соответствующее 14-бромпроизводное путем обработ 25 ки водным раствором брома, из которого после гидролиза водным растворомформиата натрия при комнатной температуре получают целевой продукт 16 ввиде гидрохлорида,