Способ получения моногалактозилдиглицерида

Дальневосточный государственный университет. и Всесоювны научно-исследовательский институт прохладной биохимии Научно-производственного, обьединенйя Биохимреактнв) Заявител АЛАКТОЗИЛДИГЛИЦЕРИДА ОСОБ ПОЛУЧ 1 2Изобретение относится к медицинско%. творением упаренного экстракта в хлоропромышленности и касаешься получения. форме, выделением целевого продукта на гликолипидов из сырья растительного . колонке с силикагелем и его элюцией происхождения. смесью хлороформ-ацетон, экс тракцииИзвестен способ получения моногалак ацетоном подвергают водоросли Ре 1 ЧеОа тозилдиглицерида, включающий экстрак ии дИ1, затем проводят их повторную цию липидов органическими растворителем экстракцию смесью хлороформ-ацетон при из сырья растительного происхожденияих соотношении 1:1, упаренный экстракт с последующим растворением упаренного предварительно растворяют в смеси мета экстракта в хлороформе, выделением це- нол-гексан при их соотношении 1:1 и цос;6левого продукта на колонке с силикагелем ле перерастворения в хлороформе въщеля иего элюцией смесью хлороформ-ацеют целевой продукт на колонке с силикатон 13. гелем цри соотношений экстракт-силикаОднако известный способ не обеспечи- гель 1:30, а элюцию целевого продукта вает достаточно высокого выхода, целево- .смесью хлороформ-ацетон проводят при их15го продукта, получаемого в смеси с пю соотношении 9:1 и дополнительно нсполь ментом. зуют смесь хлороформ - серный. эфир приЦелью изобретения является повышеих соотношении /9:1/ - /8:2/,ние выхода н чистоты целевого продукта П р и м е р 1. а) получение экстракЦель достигается тем, что в.способе - та. 0,7 кг сырой ткани водоросли РеЬ 16- получения моногалактозилдиглицерида, - . Оо %гИЙ измельчают на мясорубке, включающем экстракцию липидов органи- - экстрагируют ацетоном (ткань растворическим растворителем из сырья раститель- тель 1: 5) в гомогенизаторе в течениеного происхождения с последующим рас мин, фильтруют. Остаток ткани экстра43 фход 230 мг. 27-42 колоночными объемами элюируют моногалактозилдиглицерид с примесью зеленого пигмента. Выход 30 мг, чистота 98%,Общий выход целевого продукта 17,3% от общих липидов исходного экстракта.Выделенный. продукт имеет структурную формулу:йссн О Н С в йОПС - Я нр оР, К жирные кислоты,Для микро-тонкослойной. хроматографиицелевого продукта использовали:1. одномерную хроматографию в системеацетон-бензин-вода 91: 30: 8. На пластинке. обнаруживается единственное пятно;2, двумерную: 1, направление хлороформ-ацетон-метанол-муравьиная кислота150:43:43,9:8 2, направление ацетонбензол-муравьиная кислота-вода 200::27: 2,7: 8,5.Двумерная микро-тонкослойная хроматография показывает единственное пятно.Жирные кислоты:С.ц,О 1,4%Сщ.О. 0,7%С 1,0 0,1% С щ.1 4,6%СИ,О Бф 9% С 182 9 ф 7%С.1 0,7% С 8.Зцгб 3,4%11 О 0 1% С 8:3 ф 15 4%С: 4 ы 3 25,3%СО 4 ф 6 1 6 е 8%С о. 4 БАГЗ 1,2%С, 5 ы 3 14,6%М олекулярный веОПримеркт.а,3 9939гируют дважды хлороформ-ацетоном 1; 1(ткань-растворитель 1: 5), К ацетоновомуэкстракту добавляют равное количествохлороформа й небольшое количество водыдо разделения на 2 фазы. Водный слой имежслой отбрасывают, Нижний хлороформенный слой объединяют с хлороформацетоновыми экстрактами, упаривают досуха, перерастворяют в 20 мл метанол-.гексана 1: 1 и проводят противоточное 10распределение. В делительную воронку с1 л метанол-гексановой смеси 1: 1 вьливают обогащенный гликолипидамы экстракт водоросли, перемешивают и оставляют до полного разделения, после чегонижнюю метанольную фазу сливают вдругую делительную воронку и добавля-ют до полного разделения. Процедуру повторяют 6 раэ, после чего нижний метанольный слой упаривают досуха и пере- .2растворяют в хлороформе. Из 0,7 кг водоросли получают 1,5 г обогащенногогликолипидами экстракта, гликолипидысоставляют 74,2%, В их состав входят:моногалактозилдиглицерид 24,4%,дигалак-тоэилдиглицерид - 30,5% сульфохиновозилдиглицериц - 31,4%, неизвестный гликолипид - 1 3,6%.Выделение моногалактозилдиглицеридана колонке с силикагелем.6) 45 г силикагеля с(,40/100 М(Чехословакия) замачивают в хлороформеи выливают, в колонку (диаметр 1,9; высота столбца адсорбента -.26 см).1,5 г обогащенной гликолипидамифракции растворенной в 30 мл хлоюформасадят на приготовленную колонку, используя соотношение гликолипидный экстрактсиликлгель 1: 30 (г/г), Норма тока3,5 мл/мин,1. 16 колоночных объемов (1,3 л)системы хлороформ-серный эфир 9: 1 элюируют пигменты (желтые, оранжевые).2. 23 колоночных объема (1,8 л) системы хлороформ-серный эфир 8: 2 элюируют зеленые пигменты;3. 3 колоночных объема (0,2 л) сиотемы хлороформ-серный эфир 1:1 элюируют следы пигментов;4, 42 колоночных объема (3,4 л) сио 50темы хлороформ-ацетон 9:1. Первые пятьколоночных объемов отбрасывают. 6-26колоночных объемы собирают отдельно,как содержащие основную часть моногалактозилдиглицерида, составляющего 85%от всего количества моногалактозилднглицерила в исходном липидномэкстракте или 15,3% от общих липидов исходногоэкстракта. Чистота продукта 99,5%. Выс 795,302, а) получение экстра Экстракт получают как в примере 1, б) Выделение моногалактоэилдиглицерида. на колонке с силикагелем.34 г силикагеля ю 40/100 м (Чехословакия) замачивают в хлороформе и выливают в колонку (диаметр 1,9 см; высота столба адсорбента - 19 см).2,3 г обогащенной гликолипидами фракции, растворенной в 20 мл хлороформа, садят на приготовленную колонку, используя соотношение гликолипидный экстракт: силикагель 1:15 (г/г) Норма тока растворителя 4,5 мл/мин.Для элюции используют;1, 20 колоночных объемов (1,06 л) системы хлороформ: серный эфир 9: 1. Элюируют красные пигменты и наблюда5 . 9939 ют проскок гликолипидов (моно-,дигалактозилдиглицерид, сульфохиновозилдиглипе рид, неизвестный гликолипид),2. 25 колоночных объема (1,3 л)сио темы хлороформ;.серный эфир 8: 2. Элюируются зеленйе пигменты с проскоком .гликолипидов.3; 3 копоночиых объема (0,16 л) системы хлороформ: сернйй эфир 1:1, Элю-. ируются следы пигментов, небольшое.ко личество гликолипидов.4. 50 колоночйый объемов (2,6 л) системы хлороформ: ацетон 9: 1, Элюир- ют моногалактозилдиглицерид с примесью :неизвестного гликолнпида и дигалактозил диглицерида, Чистота целевого продукта составляет около 83%. Использование предлагаемого способа выделения моногалактозвщиглицернда по сравнению с известным способам позво ляет быстро и просто получить хроматографически чистый продукт за счет получения обогащенного гликолипндами эк- .стракта, его предварительной очистки от р пщментов противот очным распределением и. разделения. на силикагелевой колонке, с дочисткой щпментов смесями хлороформ- серный эфир и элюцией целевого продукта хлороФорм-ацетоном. Зо Получаемый моногалактозилдиглицерид в 40-45 раз дешевле стоимости прсьдукта близкой чистоты, выпускаемого в США фирмой "Вцрейоф. 43 6формула изобретенияСпособ получения моногалактознлдиглнцерида, включающий экстракцию липидов.органическим растворителем из сырьярастительного происхождения с последующим растворением упаренного экстрактав хлороформе, выделением пелевого продукта на колонке с силикагелем и егоэлюцией смесью хлороформ-ацетон, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, с цельюповышения выхода и чистоты целевого,продукта, экстракции ацетоном подвергают водоросли РебгеОа %11 сМ 11, затем проводят их повторную экстракпиюсмесью хлороформ-апетон при их соотношении 1: 1, упаренный экстракт предварительно растворяют в смеси метанол-гексан при их соотношении 1: 1 и после перерастворения в хлороформе юаделяютцелевой продукт на колонке с силикагелем при соотношении экстракт-силикагель1:30, а элюцию целевого продукта смесьюхлороформ ацетон проводят при их соотношении 9: 1 и дополнительно используютсмесь хлороформ - серный эфир при нхсоотношении /9. 1/ - /8: 2/,Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. И. Эащас 1 а аМ М. ОЬоог 1, ТЬеерагаС 1 оп апд Юе 1 цапй 11 йй че с 1 ейегюпай 1 оп оГ о 1 цсоапд рЬоьроо 1 усег 1деь агою 1 еачеь Ьу а ыпд 1 е ы 11 с 1 ссо 1 цвп сЬгопаЬоцгарЬу. Ьс 1 рар, со 1.реп. едцс, цп 1 ч. То 1 суо, 1974, 24 (1),53-63.Заказ 693/3 Тираж 711 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР. цо делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП "Патентф, г. Ужгород, ул. Проектная, 4