Способ получения рибонуклеозид-5″дифосфатов

Номер патента: 535313

Авторы: Кратасюк, Райт, Салганик

ZIP архив

Текст

Союз Советских Социалистических Республик(51) М. Кл.г С 07 Н 21,02 рисоединением заявкирственный коми Госуд Совет) Приоритет а Министров елам изобрет и открытий(71) Заявитель А, Кратасюк, А. С, Райт, В, К. Райт и Р, И. СалганикНовосибирский государственный университетСпециальное конструкторско-технологическое бюробиологически активных веществмоток олеИзобретение относится к области биохимии, конкретно к усовершенствованному ферментативному способу получения рибонуклезид-дифосфатов, которые находят широкое применение в химии, биохимии, медицине и 5 микробиологии.Известен прямой ферментативный способ получения рибонуклеозид-дифосфатов фосфоролизом рибосомальных нуклеиновых кислот в присутствии фермента полинуклеотид фосфорилазы при рН 8,0, температуре 37 С и концентрации рибосомальных нуклеиновых кислот 10 - 12 ммоль, ортофосфата в виде 1 чагНРО 4 15 - 20 ммоль, МдС 1 г 5 ммоль, а отделение рибонуклеозид-дифосфатов от по линуклеотидфосфорилазы и оставшихся (непрореагировавших) рибосам альных нуклеиновых кислот осутцествляют гель-хроматографией. Недостатком известного способа получения рибонуклеозид-дифосфатов являются их 20 низкий выход (35 - 407 о), а также сложность стадии отделения рибонуклеозид-дифосфагов от полинуклеотидфосфорилазы, которая при этом теряется безвозвратно.С целью повышения выхода целевого про дукта и упрощения процесса предлагаемый способ, который заключается в том, что фосфоролиз проводят при 40 - 50 С, концентрации рибосомальных нуклеиновых кислот 6 7 ммоль, ортофосфата в виде К,НР 04 35 - 30 50 ммоль и водорастворимой соли магния в виде Мп(СН,СОО)г 7 - 8 ммоль, при этом целевой продукт выделяют фильтрацией через ультрапористую мембрану.Указанная мембрана непроницаема для лекул с молекулярным весом 200000 даль и более и проницаема для молекул с м кулярным весом около 10000 дальтон.Разработанный способ позволяет получать рибонуклеозпд-дпфосфаты с выходом 80 - 100% и упростить стадшо пх отделения от полинуклеотпдфосфорилазы, т. к, при этом не требуется сложного хроматографического оборудования и специального контроля, а только визуальный, Кроме того, удержанная на мембране полинуклеотидфосфорилаза может использоваться в фосфоролизе многократно.П р и м е р. В термостатируемый при 45 С сосуд помещают 50 мл раствора, содержащего 125 мг (325 ммоль) рибосомальных нуклеиновых кислот Е. Со 11 (19,8 ед, оп пл/мг см., Дгво/Дгео=О 48) в 0,1 М трис-НС 1 буфере (рН 8,0), 50 моль ортофосфора в виде КгНРО 4, 7,5 ммоль Мд(СНеСОО) г и 0,75 ммоль трилона Б. Затем в реакционной смеси добавляют 260 единиц активности полинуклеотидфосфорилазы (1 единица за 10 мин превращает в полимер 1 ммоль аденозин-диофосфата). За превращением рибосомальных нуклеиновых кислот в рибонуклео535313 Составитель С, Чернова Редактор Л. Новожилова Тех ред М, Семенов Корректор Н, АукЗаказ 2485/19 Изд. Мо 1775 Тираж 575 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Типография, пр, Сапунова, 2 зид-дифосфаты следят по накоплению кислоторастворимой фракции, принимая за 100% превращения кислоторастворимую фракцию щелочного гидролизата реакционной смеси. По окончании фосфоролиза реакционную смесь фильтруют через ультрапористую мемобрану (диаметр пор 15 А, проницаемая для молекул с молекулярным весом до 10000 дальтон) под давлением 1 - 5 атм сжатого воздуха, В результате фильтрации полинуклеотидфосфорилаза удерживается на мембране, а рибонуклеозид-дифосфаты оказываются в фильтре. При необходимости далее рибонуклеозид-дифосфаты разделяют на индивидуальные известным способом. Аналогичным образом выполнен фосфоролиз 19 порций (по 50 мл) раствора рибосомальных нуклеиновых кислот. Выход рибонуклеозид-дифосфатов, определенный по окончании фосфоролиза 1-ой, 2-ой и 18-ой порций был соответственно 82%, 90/о, 92/ причем для фосфоролиза всех порций использовалась полинуклеотидфосфорилаза, первоначально добавленная к первой порции и собираемая затем с мембраны после каждой фильтрации. Фермент, использованный в таком числе порций, сохранил свою активность практичесК 11 полностью.Целевой продукт идентифицирован хроматографически, испытан в ферментативных ре акциях и оказался пригодным для получениясинтетических полирибонуклеотидов. Формула изобретенияСпособ получения рибонуклеозид-дифос фатов фосфоролизом рибосомальных нуклеиновых кислот при нагревании и рН 8,0 в присутствии фермента полинуклеотидфосфорилазы, ортофосфата щелочного металла и водо- растворимой соли магния, отличающийся 15 тем, что, с целью повышения выхода целевогопродукта и упрощения процесса, фосфоролиз проводят при 40 - 50 С, концентрации рибосомальных нуклеиновых кислот 6 - 7 ммоль, ортофосфата в виде К 2 НР 04 35 - 50 ммоль 20 и водорастворимой соли магния в видеМд(СНзСОО)2 7 - 8 ммоль, при этом целевой продукт выделяют фильтрацией через ультра- пористую мембрану.Источник информации, принятый во вни мание при экспертизе изобретения:1. Блеслер С. Е Фирсов А. Е., ЧернаенкоВ. Н. Прикладная биохимия и микробиология, т. 10, вып. 1, стр. 80 - 84, 1974.

Смотреть

Заявка

2315457, 14.01.1976

НОВОСИБИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ, СПЕЦИАЛЬНОЕ КОНСТРУКТОРСКО-ТЕХНОЛОГИЧЕСКОЕ БЮРО БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ

КРАТАСЮК ВАЛЕНТИНА АЛЕКСАНДРОВНА, РАЙТ АНТОНИНА СЕРГЕЕВНА, РАЙТ ВЛАДИМИР КАРЛОВИЧ, САЛГАНИК РУДОЛЬФ ИОСИФОВИЧ

МПК / Метки

МПК: C07H 21/02

Метки: рибонуклеозид-5"дифосфатов

Опубликовано: 15.11.1976

Код ссылки

<a href="https://patents.su/2-535313-sposob-polucheniya-ribonukleozid-5difosfatov.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ получения рибонуклеозид-5″дифосфатов</a>

Похожие патенты