Способ получения, -бис-(4-хлорфенил)-45 имидазолметанола

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК ое св 64// А 61 К 31/415 4 С 0 ОСУДАРСТНЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ ОБ ЕТЕНИ ПИСА К ПАТЕНТУ-БИС-(4 ТАНОЛА 57) Изобретеимидазола, в -бис- (4-хлор ается замещенных учения Ыимидазолме-,ния Е субст ти. 2 с тности по нил) -4 (5) -(71) Эли Лилли Энд Компан(72) Кеннет Стивен Хирш иМеллон Тейлор РЯ)(56) Вацуро Воные реакции в коМ Химия, 19(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ о, ХЛОРФЕНИЛ) -4 (5) - ИМИДАЗ танола, обладающего способностью ингибировать фермент ароматазу, что может быть использовано для лечения ипрофилактики эстроген-зависимых заболеваний, в особенности рака молочнойжелезы у млекопитающих. Цель - создание нового вещества указанного классас нехарактерной для него активностью.Синтез ведут из соединений формул 1и 11:и сн-мн-сн с-с(о)02 (1) С 1- ) МДХ= С,-С -алкил; Х=С 1; Вг, с посим выделением целевого продукта пл. 110 - 113 С, брутто ф-ла С 1 М О, концентрация ингибироваф о= 0,05 мкМ при концентрации ата 0,1 мкМ и низкой токсичностабл.Изобретение относится к способу получения новых производных имидазола, обладающих способностью ингибировать фермент ароматазу, которые могут быть 5 использованы для лечения и профилактики экстроген-зависимых заболеваний, в особенности рака молочной железы у млекопитающих.Цель изобретения - синтез новых 10 производных имидазола, обладающих активностью в качестве ингибиторов ароматаэы, свойство, которое не проявля 1 и соединения аналогичного строения,П р и м е р 1. 4(5)-Фис-(4-фтор фенил)метил/-1 Н-имидазол.Прибавляют 9, 2 г гидрида натрия в Виде 573-ной дисперсии в масле к раст" ору 22 г имидаэола в 200 мл диметилформамида при перемешивании. После 20 окончания реакции, что видно по прекращению вспенивания, при перемешивании прибавляют 22 г 4,4-дифтордифе" нилметилхлорида. Смесь два часа пере" мешивают при комнатной температуре, 25 и затем 1,5 ч нагревают на паровой бане. Смесь выливают в смесь льда с водой, прибавляют эфир и разделяют слои. Водный слой промывают эфиром, объединенные. эфирные экстракты про мывают водой, сушат над сульфатом маг" ния, фильтруют и выпаривают. Остаток хроматографируют на силикагеле, элюируя последовательно 107 этилацетата в толуоле, 203 этилацетата в толуоле 3 . и смесью 1:1 этилацетата и толуола ;(по 2 л каждой смеси), чтобы получить 1,2 г 2-/бис-(4-Фторфенил)метил/имидазола (И=0,44, силикагелевые пластины для ТСХ, элюирование смесью 1:1 40 этилацетата и толуола), 14,5 г 1-/бис- (4-фторфенил) метил/имидазола (М = 0,30) и 1,99 г целевого 45)-/бис- (4-Фторфенил) метил/имидазола (КГ =0,15), Структуры были подтверждены, 45 ЯМР- и ИК-спектроскопией.П р и м е р 2. 4(5)-/(4-хлорфеннл) (4-Фто рфенил) ме тил/имида зола .Работают по методике примера 1, целевое соединение получают из имидаэола и 4-хлорфенил-фторфенилметилхлорида с выходом 3,1 Е. П р и м е р З.с,ы;Бис-(4-хлорфенил)-4(5) "имидазолметанол.Готовят реактив Гриньяра иэ 4,7 г магниевых опилок, каталитического количества (четыре капли) 1,2-дибромэтана в 2 мл диэтилового эфира и 25,0 г 4-бромхлорбензола в 100 мл тетрагидрофурана. После примерно двухчасов перемешивания прибавляют 5,0 гметил-имидазолкарбоксилата в видераствора в 50 мл тетрагидрофурана.Смесь кипятят с обратным холодильником в течение часа. Отгоняют тетрагидрофуран и оставшуюся смесь выливают в ледяной раствор хлористого аммония и экстрагируют этилацетатом,После выпаривания экстракта получаютжелтое масло, которое очищают хроматографией на силикагеле, элюируя с градиентом этилацетата 157-ный метанолв этилацетате. Соответствующие фракции собирают, объединяют, выпариваюти кристаллизуют из этилового эфир -гексана, получают 6,47 г целевогопродукта. Перекристаллизовывают 1 гматериала из бензола, получают 540 мгопродукта с т.пл. 110-113 С.Анализ для С,6 НС 1 11 01Вычислено С 60,41; Н 3,79;11 8,78; С 1 22,21Найдено,7.: С 59,99; Н 4,03;Н 8,54; С 1 22,29,Соединения изобретения являются полезными для профилактики и лечения эстроген-зависимых заболеваний, включая рак молочной железы у млекопитающих, благодаря их способности ингибировать ароматазу была показана при применении модификации метода Броди, выделенных микросом яичников крыс. В этой тестовой системе микро- сомы яичников получали из крыс, обработанных гонадотропиновой сывороткой беременных кобыл. Испытуемые соединения прибавляли в реакционные колбы, содержащие 0,1 мкМ 4-андростен,17-диона, 100000 дпм 1,2( Н)-андростендиода, микросомы и МАЭРН генерирующую систему. Концентрация испытуемых ингибиторов находилась в интервале между 0,005 и 1 О мкМ., В этом опыте ароматизация андростендиона приводит в результате к получению ( Н)-Н О, которую выделяют экстракцией образцов хлороформом и обработкой водной фазы активированным углем для удаления свободного стероида, Образцы обсчитывают на жидкостном сцинтилляционном спектрометре и определяют процент ингибирования по сравнению результатов с контролЬными образцами, инкубированными без ингибитора, Мощность определяют, основываясь на концентра1398 74ции ингибитора в мкМ, требующейся дляполучения 507 ингибирования ферментов тактивности (ЕС, ), когда концентрация чсубстрата (андростендиона) составляет . 2г,О, 1 мкМ. Величины ЕС для некоторыхссоединений приведенной выше формулысведены в табл,1.иБлагодаря свей способности ингибировать фермент ароматаэу соединения предлагаемого изобретения способны ингибировать синтез эстрогенов умлекопитающих, что делает эти соединения полезными при лечении эстрогензависимых заболеваний, таких как рак 15молочной железы, Эта активность была Опоказана 1 п ч 1 чо на следующей тестовой системе.Ингибирование синтеза эстрогена укрыс, 20 дНеполовозрелые самки крыс Вистар(45-55 г) были разделены на контрольную и тестовые группы по 4-5 животных в каждой. Испытуемые соединениявводили семь дней ежедневно путем искусственного кормления в кукурузноммасле. Контрольные животные получаликукурузное масло без испытуемого соединения. Начиная с четвертого дня ис- Нпытаний всем животным, обработаннымиспытуемым соединением, и половине сконтрольных животных делают подкожнуюинъекцию 1,0 мг тестостерон пропионата в кукурузном масле. Оставшиесяоконтрольные животные получают только35эквивалентный объем. кукурузного масла.На седьмой день испытаний крысы, обработанные тестостерон пропионатом,лполучают подкожно 100 мкКю ( Н)-тесзтостерона в 50 мкл смеси 3:1 (объем/ 40 реобъем) солевого раствора и этанола. яв Через два часа животных умерщвляют отрезанием головы, Изолируют матку, обрезают чуждую соединительную ткань 45 и взвешивают. Как суммировано втабл,2 у животных, обработанных кукурузным маслом, вес матки меньше, вни представляют собой нестимулированный или негативный контроль. У контрольных животных, обработанных тестостерон пропионатом, эстрогены, продуцированные ароматизацией, стимулируют матку, приводя в результате к увеличению ее веса. Соединения, которые иигибируют прохождение ароматизации, заметно снижают вес матки по сравнению с контролем, обработанным тесто- стероном. Яичники крыс, обработанных ( Н)- 3естостероном, вырезают, очищают отужеродной ткани и гомогениэируют в,5 мл 1,0 мМ калийфссфатного буфера,одержащего 3,0 мМ МяС 1 6 Н О, 320 мМахарозы и 0,252 Тритона Х(пэооктилфениловый эфир полиэтиленглиоля, Ром энд Хаас) при рН 6,5. Экстагируют стероиды яичников 1,5 мл смеи 9:1 (объем/объем) толуола и этаола, к которой было прибавлено 2500 мкг каждого з немеченных экстра"иола, эстриола и эстерона, и приблиительно 1000 дпм ( С)-эстрадиола.бразцы подвергают вихревому перемеиванию, центрифугируют при 500 я вечение 10 мин и органическую фазу пе"еносят в коническую колбу. Проводятве дополнительных экстракции по тойе методике. Собранные органическиекстракты выпаривают для последующейонкослойной хроматографии.Осаждают белки яичников добавлеием 5,0 мл этанола к оставшейся водой фазе, После инкубирования в течеоие ночи при 4 С образцы центрифуируют при 1500 я в течение 10 мин.адосадочный слой отбрасывают и шаик осадка растворяют в 0,3 н гидрокдс калия. Определяют белок по метоихе Бретфорда.Повторно растворяют органическийстаток иэ каждой иэ проведенных вышекстракций в смеси 9:1 (объем/объем)ихлорметана и метанола. Раствор кажого образца наносят на отдельную сипагелевую пластину для тонкослойнойроматографии, которая содержит флюосцирующий индикатор. Пластины проляют сначала смесью 160:38:1,5:0,5(объем/объем/объем/объем) дихлорметанэтилацетат(-метанол)уксусная кислота на расстоянии 3 см от верхней части пластины, После сушки на воздухе пластины проявляют вторично в смеси 180:19:1 (объем/объем/объем) дихлорметан(метанол)гидроксид аммония. Пластину сушат на воздухе и исследуют при 254 нм в УФ-свете.Отмечают видимые пятна ипластины обрызгивают примулином (0,0017 в смесиФ 4:1 объем/объем ацетон-вода) по методике Райта, которая позволяет идентифицировать дополнительные стероиды при 365 нм Уф-света.1 Пятна соскабливают с пластины,используя пипетку Пастера, заполненн ро стекловатой, присоединенную к вакуумной линии, Стероицы элзоируют непосредственно в сцинтипляционные колбочки добавлением 0,2 мл дихлорметана после двух промывок, каждая по 2,0 мл метанола, Выпаривают органический растворитель и в колбочки добавляют 10,0 мл сцинтилляционной жицкости (Бексан-Риди Солв ИА), Образцы анализируют с помощью жидкостнОй сцинтилляционной спектрометрии. КОррекцию делают на основе извлеченя ( С)-стероида. Кснцентрации стею 4 рОидов выражают как фемтомоли на мил лиграмм белка,Соединения предлагаемого изобретения могут быть введены любым из многочисленных путей, включая оральный, подкожный, внутрнмышечный, внут ривенный, через кожу и ректальный, СОединения обычно применяют в виде фармацевтических композиций. Такие омпозиции готовят по хорошо известым методикам и они состоят из пример 25 о 1-95 мас.Е, по крайней мере, одного активного соединения указанной вып 1 е формулы (1).Такие фармацевтические композиции содержат в качестве активного ингре диента соединение указанной выше формулы и фармацевтически приемлемый ноСитель. При изготовлении композиций активный ингредиент должен быть хорошо смешанным с носителем, или разбавляется носителем, или же заключен цнутри носителя, который может быть В виде капсул, мешочков, бумаги или другого контейнера, Когда носитель Служит в качестве разбавителя, он 40 может быть твердьм, полутвердым или Жидким материалом, который работает как носитель, экципиент или среда для активного ингредиента. Так, композиции могут быть в виде таблеток, пи люль, порошков, лосьонов, саше, облаток, эликсиров, эмульсий, растворов, сиропов, суспензий, аэрозолей (как в твердой, так и в жидкой среде), машей, содержащих по крайней мере50 10 мас.Ж активного соединения, мягких или твердых желатиновых капсул, суппозиториев, стерильных растворов для инъекций и стерильных расфасованных порошков. 55Некоторыми примерами подходящих носителей, экципиентов и разбавителей являются лактоза, декстроза, сахароза, сорбит, маннит, крахмалы. камедь,фосфат кальция, альгинаты, силикаткальция, микрокристаллическая целлюлоза, поливинилпирролидон, целлюлоза,трагант, желатин, сироп, метилцеллюлоза, мети- и пропилоксибензоаты,тальк, стеарат магния, вода и минеральное масло. Композиции могут дополнительно содержать смазки, смачивающие агенты, эмульгаторы и суспензирующие агенты, консерванты, подслащиватели или ароматиэирующие агенты.Композиции могут быть составлены таким образом, чтобы обеспечить быстроеподдерживающее или замедленное выделение активного ингредиента послевведения пациенту при использованиипроц дур, известных на данном уровнетехники,Для орального введения соединенияпредлагаемого изобретения могут бытьсмешаны с носителями и разбавителями,сформованными в таблетки или заключенными в желатиновые капсулы. Альтернативно смеси могут быть раствореныв жидкостях, таких как 103-ный водный раствор глюкозы, изотонический солевой раствор, стерильная вода илит,п., и введены внутривенно или инъекцией. При желании такие растворы могут быть лиофилизированы и хранитьсяв стерильной ампуле, чтобы их можнобыло легко перевести при добавлениистерильной воды в раствор для внутримышечной инъекции,Соединения предпочтительно формуют в виде единичных форм дозы,каждая доза содержит примерно от 1до 500 мг обычно 5-300 мг активногоингредиента. Термин единичная формадозы" относится к физически дискретным единицам, пригодным для однородной дозировки людям и другим млекопитающим, Каждая единица содержит заранее определенное количество активного материала, рассчитанное для получения желаемого терапевтическогоэффекта, вместе с требуемым фармацевтическим носителем. Активные соединения являются эффективными в широком интервале доэ. Например, дневные дозировки обычно находятся примерно в интервале 0,05 - 300 мг/кг веса тела. При лечении взрослых людей предпочтительным является примерно интервал 0,1 - 50 кг/кг в виде единичной дозы или отдельных доэ, Однако должно быть понятно, что1398774 10 Таблица 2 Ф фСредняя концентрация стероида Доза Сред"ний КоличествоживотСоединение Тест Эстраднол Эстрон Эстриол вес матки, мг ных М о-бис-(4-Хлор фенил)-4(5)-ими- дазолметанол 0,00 0,35 0,31 0,05 0,19 0,03 0,22 0,07 0,36 0,10 Контроль, обрабо"танный тестостероном 0,40 0,07 0,165 217,8 Контроль - кукурузное масло 93,0+мг/кг п.о. искусственное кормление.ф Фетмомоли на миллиграмм белка.Существенное различие по сравнению с контролем, обработанным тестостероном, рН 0,05. Составитель Г.ЖуковаРедактор Г,Гербер Техред А.Кравчук Корректор М.Шароши Подписное Заказ 2609/58 Тираж 370 ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб д. 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 3 5 1 О 5 30 5 00 4 214,2 158,8 131,2 96,2 79,5 0,132 о,заз 0,218 0,391 0,534