Способ получения амида n -трет. бутоксикарбонилпролил-лейцил глицина

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АМИДА-ТРЕТ- -ГЛИЬЯ Изобретение относится к способу получения амида Й -трет-бутоксикарбонил(Вос)-пролил-лейцил-глицина (аминокислоты 1.-конфигурации, кроме глицина) который является исходным веществом для синтеза амида пролил-лейцил-глицина, применяемого в медицине для лечения паркинсониэма и в пептидном синтезе для получения биологически активных гормонов оксито 1 цина и дезаминоокситоцина.Известен способ получения амида МфВос-пролил-лейцил-глицина путем классического синтеза с использованием для конденсации Ф"Вос-аминокислот данной последовательности метода смешанных ангидридов с иэобутиловым эфиром хлоругольной кисло- . ты при температуре -15-(-20 С),о Открепление Вос-защиты проводят 4 н. раствором хлористого водорода в диоксане, Аммонолиэ полученного этилового эфира Ф-Вос-пролил-лейцил-глицииа осуществляют насыщенным раствором аммиака в метаноле. Выход ,соответствующего амида в пятистадий- ном синтезе составляет б 9 Х 111,Недостатками известного синтеза являются сравнительно низкий выход це левого продукта вследствие многостадийности процесса и слохность технологического процесса, связанная с применением хлористого водорода и проведением синтеза при низкой температуре.. Наиболее близким к предлагаемому является способ твердофазного синтеза амида Н 01 Вос-пролил-лейцил-глицина на аминоацилполимере, путем ступенчатого наращивания аминокислот с С-кон" ца, где в качестве аминоацилполимера использован Вос-глицил-оксиацетил-полистирол. Для защиты Ф-аминогрупп на каадой стадии используют Вос-группировку. Отщепление Вбс-группы перед казщой стадией конденсации проводят 2,5 н раствором хлористого водорода в этиловом эфире уксусной кислоты, а нейсле перекристаллиэации из воды составляет б 3, считая на Вос-глицил-оксиацетил-полис тирол 21 .20Однако известный способ отличается низким выходом целевого продукта слозностью проведения технологического процесса, связанной с применением газообразного хлористого водорода в качестве реагеита для отщепления Вос-защиты нз-за необходниости полной гериетичности аппаратуры, и загрязнением окружающей среды, так как газообразный хлористый водород является сильнодействующим ядовитым веществои.Цель изобретения - повышение выхода, упрощение технологического процесса и обеспечение защиты окружающей среды.Поставленная цель достигается теи, что согласно способу полученияамида й-Вос-пролил-лейцил-глицина путем ступенчатого наращивания аминокислот с С-конца твердофазнии методом на аминоацнлполииере, исходя иэ йф-трет-бутоксикарбонил глицил-сефадекса, с использованием в качестве конденсирующего средства45 дициклогексилкарбодиииида, отщепленнем й -Вос-защитной группы на каздой отадии осуществляют 0,5-1 н раствором серной кислоты в уксусной кислоте. Конденсацию й 01 Вос-аминокислоты с аминоацилсефадексом осуществляют при молярных соотношенияхб.й -Вос"аминокислоты, дициклогексилкарбодиимнда и аииноацил-сефадакса Э:1, 5:1,Используемый в качестве аминою ацилполимера Вос"глицил-сефадекс является полярным гидрофильним аии 40 3 85711 тралнзацию смеси проводят 103-ным раствором триэтиламина в диметилфориамиде. Конденсацию Вос-аминокислот с глицил-оксиацетилполистиролом осуществляют дициклогексилкарбодиимиднцм методом при молярных соотношениях Вос-аминокислоты, дицикпогекснлкарбодиимида (ДЦГК) и глицил"оксиацетилполистирола 3;3;1 соответственно. Реакция пептидообразования в случае 10 лейцина протекает в течение 3 ч, а пролина - 2 ч, Обработкой полученного пептидил-полимера насыщенным раствором аммиака в метаноле осуществляют одновременно отщепление пеп тида от полимерного носителя и аммонолиз пептида. Выход продукта по 7 фноацил-полимером. Гидрофильность идоступность активных центров способствует более благопрнятноиу проникновению реагентов во все участки набухнего геля и тем саиви ускоряетреакцию отщепления Вос-защиты.Применение в качестве реагентадля отщеплення Вос-защиты 0,5-1 нраствора серной кислоты в уксуснойкислоте позволяет провести реакциюотщепления селективно, т.е. не затрагивая слокноэфирной связи междуаминокислотой и полимером, что исключает отщепление пептида от полимерного носителя и обеспечивает увеличение выхода.Достигается такке упрощение проведения процесса, так как отпадаетнеобходимость работать с токсичными:коррозийныи хлористым водородом,Кроме того, время отщеплення Вос-защиты уменьшается 2 разаПрименение в реакции конденсации-Вос-аминокислоты, днциклогексилкарбодиимнда и аминоацилполнмерав молярных соотношениях 3:1, 5:соответственно способствует преимущественному протеканию реакции пептидообразования, а не побочной реакции перегруппировки промежуточного активированного производного аминокислоты с дициклогексилкарбодиииидом в неактивную аминоацилмочевину, препятствующей полному протеканиюреакцйи конденсации.Время протекания реакции конденсации для Вос-лейцина и Вос-пролина составляет 1,5 ч.Синтез Вос-Рго"еоу-йН протекает по следующей схемеВос-глицил-сефадексОбработка 1 н раствсерной кислоты в уксусной кислоте 3 вка ДМ 2 ра Промы 3 раз а этанолом,ир Промывка3 раза бработка 1 Ора-рнэтиДМФА створом амина в 0 3 омывка ДМФА, 3 раза б 85715 г Вос-глицил-сефадекса с емкостью 0,53 ммоль Вос-глицина на 1 г сефадекса помещают в реакционный сосуд, предназначенный для ручного синтеза, и проводят следующий цикл опе ций.нд М-Вос-цролил-лейцил-глицина,1% 6 г полученного й"Вос-пролил-лейцил-глицил-сефадекса прибавляют 60 мл охлаяденного насыщенного раст вора аммиака в метаноле, колбу плотно закрывают и оставляют при комнатной температуре в течение двух дней. Затем полимер-носитель отфильтровывают, промывают его метанолом (3". фО мл), и метанольный раствор упаривают в вакууме. Кристаллический остаток перекристаллизовывают из воды н получают целевой продукт в виде белого кристаллического вещества. Выход 0,99 г (97 - в пересчете на-пролил-лейцил-глицил-сефадекса про водят по аналогичному циклу операций, описанному в примере 1, за 7 4исключением операций 1 и 13, гдеобработку проводят 30 мл 0,5 н раст.вора серной кислоты в уксусной кислоте; время реакции в операции1 30 мин, а в операции 13 40 мин.Амид Мф-Вос-пролил-лейцил-глицина получают аналогично примеру 1,Выход 0,98 г (963 в пересчете наМ Вос-глицил-сефадекс). Тпд 39140 С, 0 3 - 72 (С 2, метанол),Найдено, Й: С 54,90; Н 8,46;й 14 24.Щ 1 О 1/2 НОВычислено, Х: С 54,87; Н 8,44;М 14,22,П р и м е р 3. Синтез й -Вос-пролил-лейцил-глицил-сефадекса проводят по аналогичному циклу операций.описанному в примере 1, за исключением операций 9 и 14.В операции 9 к реакционной смеси прибавляют 1,84 г(3 ммоль) М-Вос-лейцина и 1,64 г (3 ммоль) ДЦГК,В операции 14 к реакционной омеси прибавляют 1,71 г (3 ммоль) й"1(1,5 ммоль) ДЦГК в смеси ДИФА идихлориетана 1:1 90 20 10. Проиывка ДИФА, 5 раз 20 11. Промывка этанолом, 3 раза 15,12. Промывка эфиром, 3 раза 13. Обработка 1 н раствором серной кислоты в уксусной кислоте 30 20 4, Повторение операций 2-8 20 20 16. Повторение операций 10-12. Приведены ииоль в расчете на 1 миоль аминокислоты на(3 ммоль) йфВос-проВлина, 0,82 г (1,5 ммоль)МДЦГК в смеси ДИФА идихлорметана ( 1:1),Способ получения амида Й -трет- -бутоксикарбонил-пролил-лейцнл-глицина путеи ступенчатого наращивания аминокислот с С-конца твердофазным методом на аминоацилполимере исходя из й трет-буюоксикарбоннл-глицил-полимера, с использованием в качестве конденсирующего агента ди циклогексилкарбодиимида, с отщеплением на каждой стадии И-Вос-защитной группы кислотным реагентом, с последующим отщеплением конечного 45пептида от полимерного носителя с одновременным аимонолизом и выделением .целевого продукта, о т л нч а ю щ и й с я тем, что, с целью Юповыщения выхода упрощения техноло 1гнческого процесса и обеспечения защиты окружающей среды, в качестве аминоацилполииера используют Нд- -Вос-глицил-сефадекс, отщепление Вос-защиты проводят 0,5-1 н раствором ерной кислоты в уксусной кислоте, а конденсацию ИВес"аминокислоты с аинноацил-сефадексом осуществляют при иолярных соотнощениях Мф"ВосСоставитель. Г,ЖелтухииаРедактор Н.Лазаренко Техред И,Рейвес КорректорГ,Назарова Заказ 134 36 Тираж 443ВНИИПИ Государственного комивета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, ЖРаушская наб., д, 4/5 Подписное Филиал ППП Патент , г. Ужгород, ул. Проектная,9 8571 -амйнокислрты, дициклогексилкарбодиимида и аминоацил-сефадекса 3:1, 5:1.Источники информации, принятые во внимание при экспертизе1. Микста С.Я., Крустиня Дэ,П.1 Яунземе А.В. и Папсуевнч О.П. Усовершенствованный синтез С-концевого фрагмента окситоцина. - "Известия АН Лат"1 вийской ССР, Серия "Химия", 1975,Ф 5, с. 618-62.2. ИлоднсЬ Т. 5 Ьдечапе К.,Тасавнга М. 5 о 1 д - рЬаэе зупйЬеэзевр 1 оупд Ьа 1 оасу " ро 1 уьугепеаь а ро 1 увег энррогй. - СЬев. РЬагвВн 11., 1970, ч. 18, У 7, рр. 1465-1474 (прототип).