Способ получения амидов нуклеозид 5-моно-или полифосфатов по концевой фосфатной группе

О П ИС А Н И Й"ИЗОБРЕТЕН ИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Саюз СоеетскиыСьщиалистичесииыРеспублик ии 721453(51)М. Кд С 07 Н 19/04// С 07 Сг 7/03 Гкуурстееыыый иееытет СИР в делам ызабретеыый ы етывнтый(72) Авторы изобретения В, В, Самуков, Г, ф, Сиволобова и Т. Н, Шубина Новосибирский институт органической химии СО СССРи Специальное конструкторско-технологическое бюробиологически активных веществ(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АМИДОВ НУКЛЕОЗИД-- МОНО- ИЛИ ПолифосфАтов ПО КОНЦЕВОЙ фОСфАТНОГ ГРУППЕИзобретение относится к усовершенствованному способу получения амидов нуклеозид-моно- или полифосфатов по концевой фосфатной группе, которые широко применяются в качестве реагентов в аффинной хроматографии.5Известен способ получения амидов нуклеозид-моно- и полифосфатов по концевой фосфатной группе, основанный на активации концевой фосфатной группы превращением ее в смешанный ангидрид при действии избытка хлорангидрида 2,4,6-триметилбензойной кислоты в сухом пиридине в течение 10-20 мин,.Выход смешанного ангидрида для 5-мою-, ди- и трифосфат нуклеозидов дости 15 гает 60 90%. Последующая обработка смешанного ангидрида аминами в водном растворе или сухом диметилформамиде приводит к получению соответствующих амидов с выходом 60-90%, Синтезированные соединения выделяют хроматографией на бумаге, Недостатками существующего способа являются; а) двух 2стадийность процесса, б) проведение каждой стадии процесса в определенном растворителе, в) значительная продолжительность реакции смешанного ангидрида саминами: 2-3 суток в воде или 18-20 чв сухом диметилформамиде, г) очисткасинтезированных соединений хроматографией на бумаге, что усложняет выделениецелевого продукта.Целью изобретения является упрощение процесса,Поставленная цель достигается использованием конденсирующего агента:трифенилфосфина,2 -дипиридилдисульфида, 5-10-кратного избытка амина(рКа 5), что позволяет провести процесс в одну стадию и уменьшить время процесса до 1-2 ч, и веделением целевого продукта осаждением.Предлагаемый способ получения амидов нуклеозид-моно- или полифосфатов по концевой фосфатной группе заключается в том, что реакцию проводят всмеси 5 -моно- или полифосфатов нуклео721453 20 55 зидов в сухом полярном впротонном растворителе ( диметилформамид, диметилсульфоксид, ацетонитрил, пиридин), 3-5-кратного избытка конденсируюшего агента-трифенилфосфина,2-дипиридил-дисульфида и 5-10-кратного избытка амина (рКаЖ) при комнатной темпера(туре в течение 1 ч для 5 -моно и дифосфатов нуклеозидов и в течение 2 ч для трифосфвтов нуклеозидов. Соответствующие Аи(, 1 и -амиды образуются с выходом 80-90%. Выделяют целевой продукт осаждением эфиром из реакционной смеси.П р и м е р 1 . Синтез тимидин(-5-фосфопиперидина.К раствору 26 мг (0,08 ммоль) тимидин-фосфорной кислоты в 1 млдиметилформамида добавляют 0,03 мл лииерииини (0,3 ммель(, 30 мг (0,33 ммоль) 2,2-дипиридилдисульфида и 60 мг (0,23 ммоль) трифенилфосфина. Через 1 ч отбирают аликвоту и хроматографируют на пластинке " МОТОР сначала в системе СНС 1 - СНЕОН (9:1), затем до 1/2 длйны в системе СНСМ-НО (4:1), Результаты анализа показывают количественное образование тимидин-фосфопиперидидв. Реакционную(смесь разбавляют 2 мл пиридина и выливают по каплям в 20 мл эфира. Осадок растворяют в 1 мл пиридина и снова осаждают в 20 мл эфира. Осадок центрифугируют, промывают дважды эфиром, .высушивают в вакуум-эксикаторе, Анализируют продукт ТСХ нв пластинкеиЪ 1 Ц 08 в системе СНСК-НО (4:1)и Продукт хроматографически однородный (Р 0,45), выход 92% (810 ОЕ(о ). (П р и м е р 2, Синтез уридин- -5-бензиламидофосфата.К раствору 0,1 ммоль уридин-, монофосфорной кислоты в 1 мл сухого пиридина добавляют 0,5 ммоль бензил амина, 0,3 ммоль трифенилфосфина и 0,3 ммоль 2,2-, дипиридилдисульфидв и выдерживают в течение 1 ч при комнатной температуре. Превращение количественное (по данным ТСХ), Реакционную смесь по каплям выливают в 20 мл эфира, осадок отделяют центрифугированием,промывают эфиром, (Зх 10 мл) р высушивают в вакууме. Продукт анализируют тонкослойной хроматографией на пластинках в системе изопропвнол: аммиак: вода;1;2, По результатам анализа продукт гомогенный (Ру 0,73), выход80% (760 ОЕ 6 У ). 4П р и м е р 3, Синтез ) -морфолида уридин-дифосфата.К раствору 40 мг триэтиламмонийной(соли уридин-дифосфатв (0,056 ммоль) в 1 мл диметилформамида добавляют 0,030 мл (0,45 ммоль) морфолина, 50 мг 2,2-дипиридилсульфидв (0,23 ммоль) и 60 мг трифенилфосфина (0,23 ммоль), Смесь встряхивают до образования прозрачного рвстворв. Через 1 ч аликвоту реакционной смеси анализируют бумажной хроматографией в системе этвнол - 1 М СНСООЙН(, рН 7,5 (7;3). Анализ показывает количественное образование (-морфолидв уридин-дифосфвтв.(Реакционную смесь по каплям выливают в 20 мл эфира, осадок центрифугируют, промывают дважды эфиром, сушат в вауумэксикаторе. Анализируют продукт Р-ЯМ 8 спектроскопией (два дублета с центрами при+ 3,7 м.д. и+ 10,6 м.д., соотношение интенсивностей 1;1) и бумажной хроматографией в системе этвнол - 1 М СНЕСООЙН(, рН 7,5 (,7:3). Продукт однородный (10,65). Выход 450 ОЕ 2 бу 90%.(триэтилвммонийной соли вденозин-трифосфатв в 1 мл диметилформамида добавляют 0,1 ммоль бензиламинв, 0,075ммоль трифенилфосфинв и 0,075 ммоль2,2 -дипиридилдисульфида, встряхиваютдо образования прозрачного раствора ивыдерживают в течение 2 ч при комнатной температуре,Анализ аликвоты .на пластинке "ИоИв системе изомаслянвя кислота МН,НО;1;33, показывает количественное образование продукта.Реакционную смесь по каплям выливают в 20 мл эфира, осадок отделяют45 центрифугированием, промывают эфиром(й 0,65 в системе изомаслянвя кислотаЯН,Н 00-66:1:33,формула изобретения 1 Способ получения вмидов нуклеозид-моно- или полифосфвтов по конце вой фосфатной группе в сухом полярном апротонном растворителе в присутствии амина (рКа 5)и о т л и ч а ю ш и й с я тем, что, с целью упрощения процесса,721453 Составитель Л. НикулинаРедактор Л. 1 Ьвожилова Техред Н, Ковалева Корректор Г. Назарова Тираж 495 Подписное Ш 1 ИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская Фаб., д. 4/5Заказ 79/22 Филиал ППП Патент", г, Ужгород, ул. Проектная, 4 реакцию проводят в смеси нуклеозид-моно- или полифосфата, 3-5-кратногоизбытка трифенилфосфина,2 -дипиридилдисульфида и 5-10-кратного избытка амина с последующим выделением целевых продуктов, осаждением. 6 Источники информации,принятые во внимание при экспертизе