Способ получения декапептида в-цепи инсулина человека последовательности 21-30

Ю. Гкудврствениы 9 кватет Фемтв Иеатра КР а доые 4 атпиМ и 6 тнрямйЬ.С 7.7 Винни М. И. ДЕНБтттаИ Овтзтнта 3 Вттро;:, т=. щтв".тро 1 й уЯИВЕОСИТЕТ ИМ .А тт,. ,".,ДВЯО 73, Ц Зйиннт Изобретение Относится к усоверщенствованию спОсОба получения декацептида В.сулина человека. Это соединение может тть использовано при синтезе как природ- НЫХ ИНСУЛИНОВт ТаК И ИХ аиалОГОВИзвестен способ получения деканептида В инсулина, закдючающийся в том,Ы-ъочто известными методами проводят последовательное наращивание пептидной цепи с С конца конденсацией соответственно защищенных ао аминогруппам и карбоксидьным группам аминокислот, причем в качестве защиты группы используют тозидьную защиту с последующим удалением защитчых групп натрием в жидком аммиаке. Недостатками такого способа являются исподьзоваиие тозильной защиты для бдокирования гуанидиногруппы аргинина и Е аминогруппы лизина, которая удадяется в жестких условиях, приводящих к деструкции молекулы; обработка натрием в жидком аммиаке либо насыщенным раствором бромистого водорода в ледяной уксусной кислоте при 70 С. Лена Н 1 т уГ, Д;.йонт ;-, т Я тт т тГ т тЯ ь, В т"т 1т,"тт тт" ттЯцт .т,."тт.;,. тт,,фъ( -т;т, ту,- у "ттсъ ттрб-,тц".ЪК г .ттттттттдд:От;)тттт ) тттт,ЧИ Дт 1 ттт;ттттт; тттт,. тттттт 1 ттттсикафтонтаттЬЩ)фуцр. тОГ)тт тнт -:т ,"тттаозт тттцтт 3 лзтнт.т ттт дт,.тлт т тттт " Ортттр" тЕттттнттнщда В -тттт Пттт ИБСуттина Ч РЛГВ-"а БС"Лцт 1 ЪБТЕ Ч.НОСТИ 2 1, .;," тт,ттн,ттЕттсацттт" тт "Ет патут- ; тр фрНидалатнтитД-:фЕНтидадантттИв - :; Б,тт-.тттЕОНБЛ.-.ПРОдил т",эет -бутчлОксихарбОНБллнзГл тоеОнилэп 3 олитт тРебУтилт)ксикаРбОниллтзюР"тгтттеонина с карбобензоксигдипитномти трикарбобензоксиаргинином или трикаботсензоксиаргн-НИЛГЛИцином, Б С РтрЕТт бттртттдсВЫт Ефрром карбобензоксиглутаминовой кислоты сПОСЛЕДУЮЩИМ СБятттЕтт Затцит т т атаЛИттрлкнргидрогенолизом и выдедением птедевсгс продуКТа ИЗВЕСТНЫМ СттособомдП р и м е р 1, Карбобензакси-глицидфЕНИДа тта Нттр:.фтнидадаттт-Л ттредавит ТрЕОЧИПротПЦтмтрЕТ. (рттидохоиттт т,Якут ттт З" т т-,.гр.т ЧИН0,37 гкарбобензокси-фенилаланил-фенилаланил-тирозил-фгреонил-пропил-фгрет,бутилоксикарбониллизил-треонинарастворяютв 10 мл 5 О г карбобензоксифенилаланил-фенилаланил-тирозил греонил-пролил- грет,-бутилоксикарбониллизиа-треонина растворя 1 от в 40 млмеганола и гидрируют в присутствии 0,3 гпалладия на угле до прекращения выделенияуглекислого газа, Катализатор отфильтровывают, фильтрат упариваюг досуха, остатокрастворяют и 3,95 мл 1,11 н. едкого патра и к полученному раствору при перемешивании добавляют 1,8 г и-нитрофенилового рэфира карбобензоксиглицина в 30 мл диметилформамида.Смесь выдерживают три дня при комнат- ной температуре, охлаждают до 0 С и обрабатывают 0,5 н. серной кислотой. Выпавший 15осадок огфильгровывают, промывают на фильтре водой и сушат, После кристаллизациииз смеси метанол-эфир получаюг 4,7 г (89%)продукта, т.пл, 142-145 оС. с- -31 о(С 1, ДМФА). 20Найдено,%: С 60,15; Н 6,79.ВычислейоЯ: С 60,43; Н 6,73.Трикарбобензокси-аргинил-глицил-фенилаланил-фенилаланил-тирозил-треонил-пролил- Итрет.-бутилоксикарбониллизил-треонин (продукт П ).Остаток, подученный после гидрирования(см, предыдущую методику) 1,6 г продукта1, расгворяюг в смеси 3 мл диметилформамида и 0,2 мл триэтиламина, к полученному расгвору добавляют 1,0 г п-нитрофенилового эфира трикарбобензоксиаргинина в9 мл диметилформамида. Смесь оставляютна три дня при комнатной температуре, охолаждаюг до 0 С и разбавлят 0,5 н, сернойкислогой. Выпавшие кристаллы огфильтровываюг, промывают водой и сушат. Послекрисгаллизации из смеси метанол-эфир получают 1,8 г (77%) продукта, т. пл, 185- 4 О187 С д.1 - 24 о (с 1, ДМФА).Найдено, 4: С 61,22; Н 6,50,С Н 11 дг.Вычислено,%. С 61,58 Н 6 41,Карбобензокси- т ггрет.-бутиловый эфир-глугамил-аргинил-глицилфенилаланил-фенилаланил-тирозил-треонил-пролил-трет.-бутилоксикарбониллизил-треонин.0,77 г продукта П растворяют в 10 млметанола, к полученному раствору добавляют Я0,45 мл 1,0 и, серной кислогы и 0,3 г палладин на угле и гидрируют три дня, Катализатор отфильтровываюг, фильтрат разбавляютводой (10 мл) и обрабатывают ионообменнойсмолой Амберлит ИРА(ОН-форма). Затем смолу огфильгровывают, промывают нафильтре водой до отрицательной нингидринной реакции фильтрата, фильтрат упариваютдосуха и сушат в вакууме над пятиокисьюфосфора, Остаток расгворяют в 5 мл диметилформамида и добавляюг 0,3 г и-нитрс:фенилового эфира-грет-оутилового эфиракарбобензоксиглутаминовой кислоты. Смесьвыдерживают два дня при комнатной температуре, разбавляют абсолютным эфиром, выпавший осадок отфильтровывают, промываютэтилацетатом и сушат. После кристаллизации из смеси метанол-эфир получаюг 0,57 г(1), фенилаланин,П р и м е р 2. Трикарбобензокси-аргинил-глицин,1,18 г п-нигрофенилового эфира трикарбобензокси-аргинина и 0,25 г глицина с0,28 г бикарбоната натрия растворяют всмеси 5 мл воды и 10 мл диоксана, полученную смесь оставляют на ночь при комнатной температуре, разбавляют 2 н. соляной кислотой, выпавшие кристаллы отфильтровывают и промывают на фильтре водой.После двукратной кристаллизации из этанола получают 0,97 г (91%) продукта, т.пл.153-156 С, 3 + 7 (с 1, ДМФА).Найдено,%: С 60,58; Н 5,58,Вйчислено,%: С 60,65; Н 5,56,и-Нитрофениловый эфир трикарбобензокси-аргинил-глицина.2,3 г трикарбобензокси-аргинил-глицинаи 0,6 г п-нитрофенола растворяют в 10 млтетрагидрофурана, охлаждают до -5 оС и добавляют 0,9 г дициклогексилкарбодиимиса.Полученную смесь оставляют на ночь прикомнатной температуре, выпавшую дициклогексилмочевину огфильтровываюг, фильтратупариваюг досуха и осгаток крисгаллизуютиз ацетонитрила. Получают 1,9 г (67%)продукта, т.пл. 188-191 С, Го 1 - 2Заказ 4335/186 Тираж 576 Подписное БНИИПИ Государсгвенного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5филиал ППП Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 метанола и гидрируют в присутствии 0,1 г палладия на угле. Катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают досуха и остаток расьворяют в 0,30 мл 1,11 н. едкого натра.К полученному раствору добавляют 0,3 г 5 и-нитрофенилового эфира трикарбобензокси-аргинил-глицина в 5 мл диметилформамида. Смесь оставляют на два дня при комнатной температуре разбавлиют 0,5 н. серной кислотой, выпавшие кристаллы отфильтровыва ют, промывают водой и сушат. После кристаллизации из смеси метанол-эфир получают 0,39 г (73%) продукта, т. пл. 183- 186 оС. А 3 - 20 (с 1, ДМФА).Найдено,: С 61,54; Н 5,96, 15В 1 ОЬ 1 гИВычислено,Ъ С 61,58; Н 6,41.Следующую стадию проводят так же, как в примере 1. 6 формула изобретенияСпособ получения декапептида В-цепи инсулина человека последовательности 21- 30 конденсацией низшего пептида с защищенными аминокислотами известным способом, удалением защитных групп и выделением целевого продукта известным способом о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью усовершенствования технологического пропесса, в качестве низшего пептида используют гептапептид фенилаланил-фенил лани.тирозил-треонил-пролил-трет;бутилоксикарбониллизил-треонина, который конденсируют с карбобензоксиглипином и трикарбобензоксиаргинином или трикарбобензоксиаргинилглицином, и с у -грет;бутиловым эфиром карбобензоксиглутаминовой кислоты и защитные группы удаляют каталитическим гидрогенолизом.