Способ определения свободного витамина в растительных материалах

(56) Методы определения витаминов в кормах, И.: Колос, 1967, с.149-153.Островский Ю.М. Экспериментальная витаминология, Минск, с.173-223. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СВОБОДНОГО ВИТАМИНА В(57) Изобретение относится к биотехнологии и касается методов определеЦелью и ия витами яется сок обретения яв ни определеащение врем ение способ Для достижествлении спония и упро ния этой ц соба экстр В и осажд ли при осущкцию свобоение белко ого витамин ведут одноиспользуислоту,исляют иохрома ническименсивность станавли витаминатабл.,ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ССПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТ ОПИСАНИЕ И А ВТОРСКОМУ СВИДЕ временно, причем из кислотют 5-77-ную метафосфорнуюзатем отмывают экстракт, онем свободный вытамин В 1 дэкстрагируют последний орграстворителем, измеряют инфлуоресценции экстракта ивают количество свободногопо показаниям последней2127 10 25 30 Формула 35 40 45 50 Изобретение относится к биотехнологии и касается методики определения витаминов,Цель изобретения - сокращение времени определения и упрощение способа,Способ осуществляется следующим образом,П р и м е р 1, Навеску измельченного растительного материала 250 мгзаливают 10 мл 5-7%-ной метафосфорной кислоты и нагревают 15 мин пакипящей водяной бане. Осадок удаляютцентрифугированием 5 мин при 15003000 оборотах в минуту. К центрифугату добавляют 10 мл изобутиловогоспирта, перемешивают в течение 24 мин, К тиамину (витамин В,), содержащемуся в нижнем водном слое, добавляют 0,3 мл 2 -ного раствора ферици"анида калия, 4 мл 30 -ного хлористого натрия гидроокиси натрия и 9 млиэобутанола, Экстрагируют в течение2 мин, нижний слой сливают, а к верхнему изобутиловому экстракту добавляют 10 мл дистиллированной воды, перемешивают и после отстаивания сливаютнижний водный слой в два приема, Изобутиловый экстракт иэ делительной воронки сливают в сухую мерную пробиркуна 10 мл, в которую предварительнодобавлен 1 мл этилового спирта, Еслиполученный объем меньше 10 мл, тоего доводят изобутиловым спиртом дометки,Параллельно обрабатывают контрольную пробу аналогично опытной, котораявместо экстракта ткани содержит 10 млметафосфорной кислоты. Интенсивностьфлуоресценции измеряют против стандартного раствора тиамина (1 мгк/мг),окисленного до тиохрома, аналогичноопытной пробе.П р и м е р 2. Осуществляют определение свободного витамина В аналогично примеру 1, но с различнойконцентрацией метафосфорной кислоты.Результаты представлены в таблДанные табл,1 свидетельствуют отом, что максимальное извлечение свободного витамина В из анализируемой пробы достигается при использовании для экстракции метафосфорнойкислоты в концентрации 5-7 . 2252 2П р и м е р 3 Осуществляют определение свободного витамина В, аналогично примеру 1, анализируя усредненный образец травяной люцерновой 5 муки. Параллельно проводят анализ этого же образца по известному способу, Результаты представлены втабл.2.иТаким образом, при сравнении обоих способов выявлено, что предлагае"мый способ позволяет значительно упростить определение свободного витамина В благодаря исключению рядаопераций (доведение раствора до определенного рН, осаждение оставшихсябелков 20 .-ной трихлоруксусной кислотой на кипящей водяной бане) и,как следствие этого, сократить времяанализа в два раза,Кроме того, использование 5-7%-нойметафосфорной кислоты позволяет одновременно провести экстракцию свободного витамина В иэ анализируемого образца и осаждение белковПриэтом отпадает необходимость их дальнейшего удаленияНаряду с сокращением времени анализа, предлагаемый способ повышает точность определений, уменьшает разброс между отдельными определениямиизобретения Способ определения свободного витамина В в растительных материалахпутем экстракции пробы сырья кислотой, осаждения белков из экстракта,отмывки экстракта, окисления в немсвободного витамина В 1 до тиохрома,экстракции последнего органическимрастворителем, измерение интенсивности флуоресценции экстракта и установление количества свободного витаминаБ по показаниям последней, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с цельюсокращения времени определения и упрощения способа, экстракцию свободного витамина В 1 и осаждение белковведут одновременно, причем из кислотиспользуют 5-72-иую метафосфорнуюкислоту,1272252 Т а б л и ц а 1 Концентрацияметафосфорнойкислоты, Е О Таблица 2 Способ Продол- жительКоличест во определений ностьанализа, мин 90 80 Редактор А. Козориз Подписное Заказ 6334/44 Тираж 778 ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам. изобретений и открытий 113035, Москва) Ж, Рауюская наб д.4/5Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул, Проектная, 4 Определениесвободноговитамина Вмкг/г 2,0 3,1 4,2 4,4 5,6 5 ю 6 5)5 5,2 , в Количество свободного митамина В в 1 г травяной муки мкг Предла- гаеммый 5,6+0,28 6о 0,051 Известный 5,6+0,52 6о0,096 Составитель Е, БуданцеваТехред И.Ходаиич Корректор Л. Пилипенко