Способ получения экстракта желчных кислот

ОП ИКАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДИТВДЬСТВУ Союз Советских Социапистицеовх Республик(5) М. 33/16 Госудерстеенный иоиитет СССР по делам изобретений и открытий(53) УД убликовано 15,0 6-003.088. 8) ата опубликования описания 18.02 ксимова, Б. Р, Гецулина 72) Авторы изобретения Ф. Блю Сл оголь жский медицинский институ вите(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭКСТРЛКТА ЖЕЛЧНЫХ КИСЛОТбра 1 ат м,О г гомогефосф ном буфере1:4, К 1 мл гомомл этанола и 0,1 м дроксида аммония,ечени весов 0,1 Моотношенииавляют 20раствора г ь низируютрН 7,4 вгената до2 5%-ного комнатной температу Изобретение относится к области медидины и касается получения желчных кислотиз ткани печени,Известен способ получения экстрактажелчньх кислот из ткани печени путемгомогенизации ткани, экстракции этанолом при нагревании, очиогки экстрактамиОднако известный способ не обеспечивает высокого выхоца и чистоты целевого продукта,Целью изобретения является повышениеОвыхода целевого продукта и степени очистки.Цель цостигается тем, что по предлагаемому способу экстракцию этаноломосуществляют в присутствии гидроокисиаммония, а очистку - смесью хлористогометилена и дистиллированной воды,Способ осуществляют слецующим озом. Смесь помещают в ультратерлтостатна 15-20 мин при 50-60 С. Полученныйэкстракт фильтруют, к фильтрату цобавляют 20 мл хлористого метилена и 15 млдистиллированной Воды Смесь Встр 5 хивею2-3 мин и оставляют на 10-12 ч прикомнатной температуре, Полученная слесьимеет следуюип 1 е объемные соотношениякомпонентов - этанол: гицроксиц млония: хлористый метилен: воца - 2:0,01::2:1,5,В течение этого времени смесь делится на цве фракции, которые разцеляют,Верхняя фракция состоит из этанола,гидроксида аммония и воцы и ооцержитэстрагированные и очиценные желчныекислоты,Нижняя фракция содержит хлористыйметилен с небольшой примесью этанолав котором содержится незначительное количество желчных кислот, К этой фракциидобавляют 8 мл цистиллированной воцы,встряхивают и оставляют на 3-4 ч приЗаказ 298/37 Тираж 1089 ПоцписноеЦНИИПИ Госуцарственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., ц, 4/5 Фттлиал ППП Патент, г, Ужгороц, ул. Проектная, 4 В течение некоторого времени смесьцополцительцо разцеляется тта верхнююи нижнюю фракции, Дополнительная верхнятт фракштя состоит из этацола и ВОдыи содержит желАттьте кислоты, Эту фракцию желчных кислот присоецттттяют к ранеепОлучеттттой,Общий экстракт желчных кислот выпа" ривают досуха на вакуумном испарителе,Осадок растворяют в 0,3 мл бутанола. В Оосадке содержатся свободные и коныогированные желчныекислоты.Качественное определение желчных кислот осуществляют с помощью восходящейтонкослойпой хроматографии на силикагеле,Для разцеления желчных кислот используют систему растворителей слецующегосостава; 2,2,4 - триметилпентан, циизопропиловый эФир, уксусная кислота, изо- опропиловый спттрт, этилеттхлориц, - воца всоотношении 2: 1: 1: 1; 1:0,26,Хроматографию проводят на стекляттттьтхпластинах размером 50 х 18 см, покрытыхслоем силикагеля, толщина слоя 0,25 мм,5На пластину наносят О, 1 мл экстрактажелчттых кислот, выделенного из тканипечени, Рядом с опытными образцами наносят 0,02 мл смеси стандартов желчттыхкислот в концентрации 1 мг/мл, После30разцелеция пластину высушивают на возцухе, затем опрыскивают 0,1%-ным раствором концентрированной серной кислоты,ов 96 этаноле, Пятна желчных кислотицентифттцируют в Уф-свете (360 мм),Для количественного определения соцержаттия желчных кислот в ткани печениметодом спектрофлуориметрии участкипятен силикагеля с желчными кислотами(опытные и контрольные) снимаютс плас 40тины,растворяют в 2 мл концентрированной серной кислоты, инкубируют воулБтратермостате в течение 1 ч при 60 С,Силикагель осаждают центрифугированиемпри 1500 ф . Нацосацочная жидкость со 45цержит желчные кислоты в концентрированной серной кислоте, флуориметрцюпроводят при цлине волцы 470 мм, Количество желчных кислот в ткани печенивычисляют по формулео1(с"осгце Ко- концентрация желчных кислот вэкстракте рассчитанная в мкг ца 1 гткани печени;Э- показания прибора при исслецовании экстракта, мЛ;К - концентрация желчных кислот встандартном растворе (2 0 мкг);Э - показания прибора при исслецовании станцартов желчных кислот, мА;Р - вес исследуемой печени,г,Грецл.гаемый способ обеспечиваетвысокий выход (цо 91%) желчных кислот,соцержаших свобоцттьте и конъюгированттые желчные кислоты, хорошо очищенныеот липицных и цругих примесей,Способ может применяться цля изучения процессов биосинтеза и обмена желчттьтх кислот у ряда различных животных,а также у человека, и может сыгратьбольшую роль в решении вопросов патогенеза поражений печени и в установлениипрогноза исходов поражений печени формула изобретения Способ получения экстракта желчныхкислот из ткани печени путем гомогенизации ткани, экстракции этанолом принагревании, очистки экстракта, о т л и -ч а ю ш и й с я тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта и степени очистки, экстракцито этанолом осуществляют в присутствии гицроокиси аммония, а очистку - смесью хлористого метилеца и дистиллированной воцы,Источники информации, принятые вовнимание при экспертизе,1 Ьтрт 38,1974, 9, 4, 294-297.