Способ получения тимозина из тимусов млекопитающих

.; ф с 1 г 1 ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН ием, у биль нь ифугирова та термол ии, освоб огенных в продукта чисткой п цен нат ле бе е из суперов при наггментных ение целе- следующей фракциони- отлицелью упждение ществ, цетоно т пи сажд с по пел ина, И.К.Шпр тем солевого т а,ования, гель-хрома а ю щ и й с я тем ощения способа и п евого продукта, ра роводят при переме о скоростью 500-20 огра шович,ий что, с ышения ыход лето тво ССС 6, опуб шени ивании гомогената 0 об/мин в течебильные белки уда в течение 15-20 к ТИМОЗИН ючающий ение кле ИЗ ние 1-1,5 ч, термол ляют при нагревании мин, в качестве элю ом гель-хроонат амта при бихар ок,тмато ии испол ист н мо стиц ткани ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТ ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТИМУСОВ МЛЕКОПИТАЮЩИХ,вкл генизацию тимусов, разруш экстракцию раствором хлор рия, осаждение твердых ча 11 4 А 61 К 35/55, 35/00Изобретение относится к медицине,в частности к получению гормонального фактора тимуса,Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта и упрощение способа путем использования определенного режима клеток и приемов очистки.П р и м е р 1. Получение сырцатимозина.500 г слегка дефростированных же Олез (тимуса телят) измельчают на мя.сорубке. Измельченный тимус порциями гомогенизируют в размельчителетканей РТ, добавляя частями (1,5 лу0,15 М раствора хлористого натрия. 15Каждую порцию гомогениэируют в течение 3 мин, Полученный гомогенат перемешивают в течение 1 ч с помощью механической мешалки при 8- 10 С скорость перемешивания 500 об/мин . По 20окончании экстракции жмых отделяютцентрифугированием при 2500-3000 об/мин в течении 30 мин при 4 С. Супернатант нагревают в водяной бане с температурой 100 С до 80 фС в течение 15 25мин, Горячую смесь охлаждают в банесо льдом, осадок термолабильных белков отделяют центрифугированием при2500-3000 об/мин в течение 30 мин прио4 С, а супернатант фильтруют через 30асбесто-целлюлозную пластину типа ЕКС,Прозрачный, охлажденный экстракт(1,24 л) вливают при постоянном перемешивании в 5 объемов .(6,2 л) хо-,лодного (-10 С) ацетона, помещенногов фарфоровую емкость и оставляют вхолодильнике.Через 12-16 ч надосадочный растворсифонируют. Осадок высушивают на воронке Бюхнера, промывая 3-4 раза ацетоном (около 1 л). Высушенный порошок тщательно растирают в течение2-3 ч, сушат на воздухе до полногоудаления ацетона. Получают 9,0 г сырца тимоэина,45Получение субстанции тимозина,1) Солевое фракционирование.Полученный сырец растворяют в0,01 М натрий-фосфатном буфере срН 7,0 в соотношении 1:10 - 9,0 г 50сырца в 90 мл буфера - и в течение30 мин перемешивают на магнитной мешалке при комнатной температуре.Полученный раствор центрифугируютв течение 15 мин при 3000 об/мин и 554 С.К супернатанту добавляют насыщенный раствор сульфата аммония из расчета 3 объема супернатанта и 1 объемнасыщенного раствора, в котором предварительно установлен рН 7,0 с помощью водного раствора аммиака. Смесьперемешивают при 6-8 С в течение 1 ч.Центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 мин при 4 С.Затем в супернатанте устанавливают рН 4,0-4,05 с помощью 107-ногораствора уксусной кислоты, В полученный раствор добавляют 15,8 г сульфата аммония из расчета 14,6 г сульфата аммония на 100 мл раствора. Смесьперемешивают в течение 1 ч при 6-8 Си оставляют в холодильнике на ночь(18-20 ч), Осадок отделяют центрифугированием в течение 15 мин при3000 об/мин и 4 С,2) Обессоливание и лиофильное высушивание.Влажный осадок растворяют в 90 мл0,01 М теис -НС 1 буфере (рН 8,0) в течение 30 мин, перемешивая на магнитной мешалке при 6-8 С, нерастворившуюся часть отделяют центрифугированием при 3000 об/мин и 4 С. Растворнаносят на колонку (50 1000 мм), заполненную сефадексом Ги элюируют0,05 М раствором бикарбоната аммониясо скоростью 100 мл/ч, Фракции, соответствующие первому пику поглощения,объединяют и лиофильно высушиваютПолучают 0,65 г тимоэина.Выход тимозина из тимуса телят составляет 1,3 г из 1 кг железы.П р и и е р 2. Аналогично примеру . Экстракцию проводят 1,5 ч.Выход тимозина 1,35 г иэ 1 кг железы.П р и м е р 3. Аналогично примеру 1. Экстракт после отделения жмыха термостатируют 20 мин, Выход тимозина 1,35 г из 1 кг железы.П р и м е р 4. Аналогично примеру 1. Тимозин получают из свежезамороженных вилочковых желез ягнят. Выход тимозина 1,4 г,П р и м е р 5, Аналогично примеру 8, Тимозин получают из вилочковых желез тюленей, Выход тимознна 1,2 г из 1 кг железы.П р и м е р 6, Аналогично примеру 1. Экстракт перемешивают со скоростью 2000 сб/мин. Выход тимозина 1,35 г иэ 1 кг железы.Положительный эффект заключается в повышении выхода целевого продукта в 5-6 раз.