Способ получения трипептидов

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИ ХРЕСПУБЛИИ П ИЙ ЕТЕНИЯ ПАТЕНТ Нмеетют пе ения,ым эфи амино онил; начения дипепти ые зн де Вос, У и Яения,утемипептде У.отор ободн вым эф лоты о ею чени форм Х, У чения из ко гидри щитну том, орму з ачтолы ГОСУДАРСТВЕННЫИ НОМИТЕТ С ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТН ОПИСАНИБ И 21) 2940703/23-04),71) Рихтер Гедеон Ведьесети ДьярРТ ВНР)(,53) 547.964.4.07(088.8)56) 1. Боданский М., Клаузнер Я.С.Активированные эфиры и стратегия пептидного синтеза.-В сб.: Химия полипептидов. Под ред. П.Кацояниса,М., "Мир", 1977, с. 30.54) ,57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТРИПЕПТИДОВ общей формулыХ-у-н-инг,где Х - Ь-пироглутамил, Ю -пироглутамил,-б-кетопипеколил,-кетоимидазолидин-карбонил,-тиаэолидин-карбонил;У - 1,-норвалил,-лейцил;п - Ь -пролил, Р -пролил, Ь -иэолейцил,-гомопролил, Ь -пипеколил, Ь -тиаэолидин-карбон ил,ключ ающийся вамид аминокислоты общей ф ПС 07 С 103/52 А 61 К 37 0 и-ннг,гдето и указанные энаацил иру нтафторфениловром М -трет-бутилоксикарбонкислоты общей формулыВос-У-ОР 1Ргде Вос - трет-бутилоксикаР 1 Р - пентафторфенил;у имеет указанныеполученного защищенногод общей формулыВос-У-Ъ- ИН г,г имеют указа ацилолиэа получают св ый ид общей формулыН-У-а-ИНги 9/ имеют указанные значения ый ацилируют пентафторфенилоиром Н -карбобензоксиаминокис бщей формулы-Х-ОР 1 р 1бенэилоксикарбонил; Х и Р указанные значения, до полу- защищенного трипептида общей ы И- Нгимеют укаэанные энаорого путем каталитического ования удаляют К -концевую з группу,18 17 1085505 Составитель О.ГалкинТехред А.Бабинец Редактор Н.Джуган Корректор О. Билак заказ 2047/56 Тираж 410 ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб д. 4/5Подписное филиал ППП "Патентф., г. ужгород, ул. Проектная,4 Иэ данных таблицы видно, что описываемые аналоги ТРГ обладают эна чительным действием на центральную нервную систему. С этой точки зрения особенно преимущественными являются такие производные, у которых в положении 2 ТРГ-молекулы стоит алифатическая аминокислота с прямолинейной или разветвленной углеродной цепью. Предпочтительными являются с точки зрения этого действия также такие аналоги ТРГ, у которых в положении 1 находится б-кетопипе колиновая кислота. У этих производных гормональное действие ТРГ либо полностью отсутствует, либо воспроизводится до минимума, причем одно. временно оказываемое на центральную нервную систему действие увеличивается существенно, в некоторых случаях даже в 8 раз.40 Изобретение относится к способуполучения новых трипептидон - биологически активных соединений, которь)е могут найти применение н меди)цине.В пептидной химии широко используют способ получения пептидов путем ступенчатого наращивания пептидной цепи, начиная с С-концевой аминокислоты с помощью активированныхэфирон 8 -защищенных аминокислот, 10например, пентафторфениловых эфирон 1 .Цель изобретения - получение новых трипептидов, обладающих ценными фармакологическими свойстнами. 15Поставленная цель достигаетсяспособом получения трипептидов общей формулыХ-У-)Ч- йН (1)где Х - Ь -пироглутамил, 0 -пироглутамил, Ь -б-кетопипеколил, 1 кетоимидазолидин-карбонил,. -тиазолидин-карбонил;У - Ь -норвалил,-лейцил;ЧЧ - 4 -пРОлил, Э -пролил1 -изолейцил, ). -гомопролил, ) -пипеколил, ), -тиазолидин-карбонил,заключающимся в том, что амид аминокислоты общей Формулын-Ч)- Нн, (ц)30где Ю - имеет указанные значения ацилируют пентафторфениловым эфиром)-трет бутилоксикарбониламинокислотыобщей формулыВос-У-ОР 1 р, (1 ц) 35где Вос - трет бутилоксикарбонил;Р 1 р - пентафторфенил;У - имеет указанные значения,из полученного защищенного дипептида общей формулы:Вос-У-Й- МН Ч)где Вос, У и ЧЧ - имеют указанные значения,путем ацилолиза получают свободныйдипептид общей, формулы 45Н-У/- ЙН(Ч)где У и ЧЧ - имеют укаэанные значения,который ацилируют пентафторфенилоным эфиром )Ч -бензилоксикарбониламинокислоты общей Формулы7, -Х-ОРр, (Я)где Х - бензилоксикарбонил; Х и Р 1- имеют указанные значения,до получения защищенного трипептидаобщей Формулы2; -х-у-а-йнг (Ч 11)где 2,Х, У и ЧЧ имеют указанные значения,из которого путем каталитическогогидриронания удаляют К -концевую зацитную группу.В примерах, поясняющих практическое выполнение предлагаемогоспособа получения трипептидов, использованы следующие сокращения: 65 НРго - ). -гомопролин;К 1 с - Ь -2-кетоимидазолидинкарбоновая кислота;Крс - Ь -б-кетолиперидин-карбононая кислота1ГР 1 р -пипеколиновая кислота;Тса. в ) -тиазолидин-карбоновая кислота;ДЦГК - дициклогексилкарбодиимид;ДЦН - дициклогексилмочевина;Р 1 р-ОН - пентафторфенол;ДМФА - диметилформамид.Оптическое вращение измеряют с помощью поляриметра "РегК 1 п-Е 1 жег 141".Тонкослойную хроматографию проводят на пластинках "Кеяе 1 е 1 0 пас Ва 11 фирмы Мегс) ФРГ н следующих системах растворителей:1, Хлороформ:метанол - 9:1.2. Этилацетат:(пиридин:уксусная кислота:вода - 20;б:11) - 95:5.3. Этилацетат:(пиридин:уксусная кислота:вода - 20;б:11) - 9;1.4. Этилацетат: (пиридин;уксусная кислота:вода - 20:6:11) - 8:2.5. Этилацетат: (пиридин;уксусная кислота: вода - 20:б:11) -3;2.б, Этилацетат: (пиридин:уксусная кислота:нода - 20:б;11) - 2:3.Пятна на хроматограммах детектируют с помощью раствора нингидрина с последующим ныдержинанием н течение 5 мин при 105 С и раствороматолидин-йодистый калий после предварительной обработки газообразным хлором.Очистку конечных соединений осуществляют с помощью колоночной хроматографии с использованием н качестве сорбента "Силикагеля б" Фирмы "МегсВ." (ФРГ) с величиной частиц 0,062 - 0,2 нм. П р и м е р 1. Амид) -пироглутамил-) -лейцил-Ь-пипеколиновой кислоты.Стадия 1Хлоргидрат амида. -лейцил-).-пипеколиновой кислоты,1,54 г (12 смоль) Н Р 1 Р ЙН 2 суспендируют в 20 мл ДМФА, добавляют5,16 г (13 ммоль) Вос-ЬечОРГР,1,68 мл (1 ммоль) триэтиламинапри перемешивании. Полученный раствор упаривают н вакууме и полученное в остатке масло растворяют в60 мл хлороформа, Раствор смешиваютс 0,2 мл 2-(диметиламино) -этиламина, через 5 мин проьивают 1 н. растнором соляной кислоты (3 раза по20 мл, 1 н, раствором бикарбонатанатрия (3 раза по 20 ьж) и водой(3 раза по 20 мл), сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают.Остаток растворяют в 3 мл этилацетата и смешивают раствор с 10 мл5 н. раствора соляной кислоты в этилацетате. Через 1 ч реакционную смесьразбавляют эфиром, выпавший осадОК1085505 О 45 отфильтровывают и сушат в вакууменад безводным сульфатом натрия.В итоге получают 3,12 г (94)Н - Ьец-Р 1 р-ОН 801, Б,=0,46 (5) .Аминокислотный анализ, С 1 д 0,95)15,90,СН О К (мол,вес 352,44)Найдено,: С 57,77; Н 8,20;К 15,83.Стадия 2. Амид бензилоксикарбонил-Ь-пироглутамил-).лейцил-),-пипеколиновой кислоты, .3,13 г (11,2 ммоль Н-Ьеа-Р 1 р-МН 15и 4,94 г (11,5 ммоль) 7, -С 1 р-Ордер растворяют в 35 мл ДНФА и раствор смешивают с 1,57 мл (11,2 ммоль) триэтиламина. Реакционную смесь перемешивают 5 мин, добавляют 1,57 мл 20(11,2 ммоль) триэтиламина, перемешивают в течение 20 мин и упариваютв вакууме. Остаток растворяют в50 мл хлороформа и раствор промывают 1 н. раствором соляной кислоты 25(2 раза по 30 мл), 1 н. растворомбикарбоната натрия (3 раза по 30 мл)и 30 мл воды. Органическую фазу высушйвают над безводным сульфатом натрия иупаривают, Аморфный остаток перемешивают с холодным эфиром, эфир декантируют и оставшееся масло вносятв н-гексан до затвердения. Полученный таким образом аморфный продукт4,7 г) кристаллизуют из смеси этил- З 5ацетат - эфир. Получают 3,32 г (61)2-Ир-Ьео-.Рр-МН 2. Т.пл. 143-144 С,В =0,51 (4),сс 3 и =-97,2 С=1, АсОН)Элементный анализРассчитано,: С 61,71 , Н 7,04,) 11,51.СН ОМ 4 (мол.вес 486,.57)Найдено,: С 61,67, Н 7,05;Й 11,40. Стадия 3, Амид ) -пироглутамил-Ь лейцил-).-пипеколиновой кислоты.2,1 г (4,32 ммоль) Е -С 1 р-),ео-Р 1 рМН 2 растворяют в 40 мл метанола, добавляют 0,2 г 10-ного палладия на активированном угле в качестве катализатора и пропускают в реакционную смесь газообразный водород в течение 1 ч. Затем катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают, 55 остаток растирают с эфиром, Полученный таким образом сырой продукт (1,48 г) растворяют в 2 мл воды, осветляют активированным углем и отфильтровывают. В фильтрате раст- бО воряют 4 г хлористого натрия и раствор промывают хлороформом (3 раза по 10 мп), Органическую Фазу высушивают над безводным сульфатом натрия, унаривают и аморфный оса- б 5 док растирают со смесью этилацетатаи эфира. В итоге, получают 1,33 г(1,0), Ь е 0 1,0 (1,0) Рр 0,95 (1,0).П р и м е р 2, Амид ), -пироглутамил-Ь - лейцил-Ь.-тиазолидин-карбоновой кислоты. Стадия 1. Хлоргидрат амида Ьв лейцил-Ь-тиазолидин-карбоновой кислоты.1,81 г (11 ммоль) Н-Тса-МН НСР сус 2 пендируют в 30 мл ДМФА и смешивают с 3, 97 г (10 ммоль) Вос-), ео-ОР 4 р1,49 г (11 ммоль) 1-окси-бензтриазола и 1,22 мл (11 ммоль) М -метилморфолина. Полученный раствор отстаивают в течение ночи при комнатной темпетратуре, затем упаривают в вакууме и остаток растворяют в 80 мп хлороформа. Раствор промывают 1 н, раствором соляной кислоты (3 раза по 20 мл), 1 н, раствором карбоната натрия (3 раза по 20 мл) и 10 мл воды, .высушивают над безводным.сульфатом натрия и упаривают в вакууме. Хлопьевидный аморфный остаток растворяют в 5 мл этилацетата, смешивают с 10 мл 7 н. раствора соляной кислоты и этилацетата. Через 1 ч реакционную смесь разбавляют эфиром полученный осадок отфильтровывают и высушивают в вакууме над безводной гидроокисью натрия. В итоге получают 1,84 г (65) Н-.ен-Тса-МН х НСС. В 1=0,25 (5), Т.пл . 170-1740 С (разл) . Стадия 2, Амид бензилоксикарбонил),-пироглутамил,-лейцил-Ь-тиазолидин-карбоновой кислоты.1,69 г (б .моль)Н-),ец -Тса-КН-НС 1 суспендируют в 20 мл ДМФА и смешивают с 2,7 г (6,3 ммоль) Е -С 8 р-ОР 1 р и 0,84 мл (б ммоль) триэтиламина. Смесь перемешивают в течение 20 мин при комнатной температуре, затем упаривают в вакууме. Остаток растворяют в 50 мл хлороформа и раствор промывают 1 н. раствором соляной кислоты (3 раза по 10 мл, 1 н, раствором бикарбоната натрия (3 раза по 10 мл и 10 мп воды. Органическую фазу упаривают, остаток растирают с эфиром и полученный сирой продукт очищают многократным осаждением из смеси этилацетат - эфирПолучают 1,64 г (56) 7 в .И р-).ец-ЙН . Т.пл, 108-110 С, 8=0,46 (4),м 1=-130,30 С=1, АсОН).45 Стадия 3, Амид ,-пироглутамиллснцил-(, - тиаолидин-карбоновойкислоты,1,62 г (3,3 ммоль) 2 - СРр-Ьев-Тса 8 Н растворяют н 6 мп охлажденногольлом 3,5 н. раствора бромистоговодорода н ледяной уксусной кислоте. Раствор отстаивают в течение1,5 ч при 0 - 5 С. Затем реакционную смесь разбавляют эфиром, верхнюю Фазу декантируют иоставшееся 0масло растворяют в 20 мл воды.Водный раствор нейтрализуют твердым бикарбонатом натрия и экстрагируют эфиром (3 раза по 10 мл) . Водную фазу упаривают в вакууме, остаток растворяют в 20 мл хлороформа,раствор высушивают безводным сульфатом натрия и упаривают. Аморфныйостаток растирают с эфиром и высушивают. Полученный сырой продукт р 0(1,13 г) растворяют в злюируюшейжидкости (4 , нводят в колонку,заполненную 20 г силикагеля. Колонку элюируют той же самой смесьюрастворителей. Из фракции, содержа- з 5щей сырой продукт выделяют 0,78 гаморфного продукта. Этот продуктрастворяют н 20 мл воды, растворосветляют актинированным углем илиофилизуют. Получают 0,62 г СЮ рЬеО-Тса-КН (53 от теории) . РГ =(8 ммоль) триэтиламина. Реакционнуюсмесь выдерживают в течение ночии затем упаривают. Остаток растворяют н 60 мл хлороформа, растворпромывают 1 н, соляной кислотой(2 раза по 20 мл), 1 н. растворомгидроокиси натрия (3 раза по 20 мп)и 20 мп воды, сушат над безводнымсернокислым натрием и упаривают.Остаток растворяют в 5 мп этилацетата, смешивают с 7 мл 4 н. раствора хлористого водорода в этилацетате. Реакционную смесь через 1 чразбавляют эфиром, образовавшийсяосадок отфильтровывают и сушат ввакууме нац безводной гидроокисьюнатрия. В итоге получают 1,54 г-Г,1 р-ОР 1 р. Реакционную смесь перемешивают 5 мин, добанляют 0,81 мл(5,8 ммоль) триэтипамина, перемешивают 10 мин и упаринают н вакууме.Остаток растворяют н 60 мп хлороформа, растнор промывают 1 н. раствором соляной кислоты (3 раза по 15 мп1 н, раствором гидроокиси натрия(3 раза по 15 мп) и 15 мл воды, высушивают над безводным сульфатомнатрия и упаривают, Аморфн й остаток растирают с эфиром. Полученныйсырой продукт(2,1 г) перекристаллизовынают из 5 мл этилацетата. В итогеполучают 1,8 г (66) Е - Ир-ейРго -МН . Т.пл. 153-157 С, И=0,38(4),(Ы) =-24,5 С (С=1, АсОН),Стадия 3. Амид . -пироглутамил -лейцил-О-пролин.1,5 г (3,25 ммоль) 2 - Д р-Ьео-У-Ро -Н растворяют н 70 мл метанола,раствор смешивают с 0,3 г 10-ногопалладия на активированном углев качестве катализатора и пропускают через раствор водород н течение 1 ч, отфильтровывают катализатор, фильтрат упаринают и аморфный остаток смешивают с эфиром.Полученный сырой продукт 0,94 грастворяют в воде, раствор осветляют активированным углем и отфильтровывают, филътрат лиофилизуют. Получают 0,87 г (79 МСЯ р-ео-РоННРРО 47 1 5 Щ =+8,4 Д (С=1, Асан)Аминокислотный анализ. СРи 1,02(1,0), 3 еи 1,0 (1,0), Р 1 о 0,96(1,0).П р и м е р 4. Амид-пироглутамил- -норвалил- -изолейцина.Стадия 1, Амид трет-бутилоксикарбонилнорвалил-).-изолейцина.3,7 г (19 ммоль) Н- ЗЕе-НННСЕрастноряют в 30 мп ДМФА, добавляют при перемешивании 2,7 мл (18ммоль) триэтиламина и 6,63 г(17,3ммоль) Вос-пса-ОР(р и через 5 миндобанляют 2,4 мп (17,3 ммоль) триэтиламина. Через 10 мин реакционную смесь упаривают в вакууме.Остаток растворяют в 100 мп хлороформа, растнор промывают с 1 н,раствором соляной кислоты (2 разапо 20 мп), 1 н. раствором карбоната натрия (2 раза по 20 мл) и 20 мпноды, высушивают над безводным сульфатом натрия и упаривают. Кристаллический остаток растворяют с эфироми высушивают. В итоге получают 4,7 г(С=1, метанол).Стадия 2. Хлоргидрат амида-норналил, -и з олей цика.4,5 г (13,7 ммоль) Вос-Йча-М е-ЙН 2суспендируют в 20 мл зтилацетата исмешивают с 12 мл 6 н. раствора соляной кислоты н этилацетате, черезделяют фильтрованием и сырой продукт (3,6 г) перекристаллизовываютиз смеси метанола и эфира. Получают3,5 г (96) Н-Мчс -Яе-К 11 . НС 1,Т. пл, 254-255 С, 81=0, 4 5 (5),еД в=+3,8 (С=1, метанол),5Стадия 3. Амид бензилоксикарбонил,-пироглутамил.-норвалил-),изолейцина,3,3 г (12,4 ммоль) Н- Кчае-КН НСРрастворяют в 40 мл ДИФА. К раствору 1 Опри перемешивании добавляют 1,74 мл(13,6 ммоль) 2 -Сйр-ОР 1 р. Через 5 миндобавляют 1,74 мл (12,4 ммоль) триэтиламина. Реакционную смесь разбавляют эфиром, перемешивают, оставляют стоять в течение 2 ч в холодильнике и затем отфильтровывают,В итоге получают 5,11 г .(86) Г, в СгрЪч а, е-ЮН . Т. пл. 252-253 С, й -- 0,60 20(4);1, =-57, 5 (С=1, Асон),Стадия 4. Амид ). -пироглутамил-норвалил.-изолейцина,4,75 г (10 ммоль) Е -СВр-ЙчаМеКН растворяют в 200 мл уксуснойкислоты и после добавления 1 г 10 ного палладия на активированном угле в качестве катализатора в течение 1 ч пропускают через растворгазообразный водород. По окончаниигидрирования катализатор отделяютфильтрованием, фильтрат упаривают иостаток растирают с эфиром. Получают3,34 г (98)СРр-Ича-Зе-ЙН 98 оттеории) . Т.пл . 267-270 (разл .),1=0,61 (5);Я 1 в =-50,2 (С=1, АсОН) .Аминокислотный анализ. СРО 0,94(3 раза по 20 мл), 1 н. растворомбикарбоната натрия (3 раза по 20 мл) 55и 20 мя воды, сушат над безводнымсернокислым натрием и упаривают.Остаток растворяют в 5 мл этилацетата, раствор смешивают с 10 мп5 н. раствора хлористого водорода 60в этилацетате. Через 50 мин реакцйонную смесь разбавляют с эфиром,образовавшийся осадок отфильтровывают и сушат в вакууме над безводной гидроокисью натрия. В итоге по-65 лучвют 2, 42 г 91 ) Ни - Рг п-йи, ф1 НСИ К=О,20 (11Стадйя 2. Амид типволидин-карбониллейцил,-пролива,5,13 г (22 ммодь) Вос-Тса-ОН и 4,05(22 ммоль) Р 1 рОН растворяют в 60 мпэтилацетата и раствор при охпаждениильдом и перемешинании смешивают с4,12 г (20 ммоль) ДЦГК. Реакционнуюсмесь перемешивают в течение 2 чпри 0-5 " С, затем отфильтровываютДЦМ, фильтрат и остаток растворяютв 50 мп-гексана, Раствор промывают 1 н. раствором бикарбоната натрия (5 раз по 25 мл)и 25 мп воды,высушивают над безводным сульфатомнатрия и упаривают. Полученное таким образом 7,32 г Вос-Тса-ОР 1 ррастворяют в 20 мп ДМФА и раствордобавляют к суспензии 5,23 г (20ммоль) Н-(,ек - Ро- КН НСГ в 30 млДМФА. Затем эту сМесь охлаждаютльдом и при перемешивании добавляют2,8 г (20 ммоль) триэтиламина. Через 5 мин добавляют 2,8 (20 ммоль)триэтиламина, перемешивают 20 мини упаривают в вакууме. Полученноев остатке масло растворяют в 100 млхлороформа, раствор промывают 1 н.соляной кислотой (3 раза по 30 мл)1 н, раствором бикарбоната натрия(3 раза по 30 мл) и 30 мл воды, сушат над безводным сульфатом натрияи упаривают. Полученный в остатке8,84 г Вос-Тса в ),е 0-РочН растворяют в 15 мп этилацетата, растворсмешивают с 15 мл 6 н. растворасоляной кислоты в этилацетате ичерез 1 ч разбавляют этилацетатом.Полученный осадок растирают, отфильтровывают и высушивают в вакууме над безводным едким натром,Таким образом получают 8,05 г сырого продукта, который растворяют в80 мл воды, раствор экстрагируютэфиром (3 раза по 20 мл), затемзначения рН водного раствора устанавливают на значении 8 и растворэкстрагируют хлороформом (3 разапо 20 мп). Объединенные экстрактыхлороформа высушивают над безводнымсульфатом натрия и упаривают. Остаток растнрают с эфиром и высушивают.В итоге получают 5,20 г (76) Н-Тса-,1,Ец-Р 1 О-ЯН . Т.пл, 159-160 С, Й=о(44 ммоль 1 Р р-ОН растворяютв смеси 100 мл (1:2) смеси ДМФА идиоксана (1:2). Рставор при охлаждении льдом и перемешивании смешиваютс 9,06 г (44 ммоль) ДЦГК. Реакционную смесь перемешивают при 0,5 С втечение 1,5 ч, затем отфильтровывают ДЦМ, фильтрат упаривают и полученное в остатке масло смешиваютв-гексаном для кристаллизации,Полученный сырой продукт (16,46 г)перекристаллизовывают из 50 мл этилацетата. Получают 12,75 г (74 Х -Кс-ОР 1 р, Т.пл. 146-148 С, 9=0,53ЯЫ в =-42,1 (С=1, этилацетат) .Элементный анализ.Рассчитано,: С 50,25, Н 2,58,й 6,51, Г 22,084С 8 Н 1 Гй О (мол . вес 43 О, 29)Найдено,: С 49,88, Н 2,35,6,66; Г 21,81. Стадия 2. Амид бензилоксикарбонил2-кетоимидазолидин-карбониллейцил- -пролина.2,38 г (9 ммоль) Н 1.еИ-Р 1 о-йН НСГсуспендируют в 30 мл ДМФА и смешивают с 3,87 г (9 ммоль) , -Кс-ОРри 1,26 мл (9 ммоль) триэтиламина,перемешивают 5 мин и добавляют1,26 мл (9 ммоль) триэтиламина, перемешивают 20 мин и упаривают в вакууме, Остаток растворяют в 50 мп хлороформа, раствор промывают 1 н.раствором соляной кислоты (2 разапо 10 мл), 1 н. раствором карбонатанатрия (2 раза по 10 мл), 10 мл воды, высушивают над безводным сульфатом натрия и упаривают. Получен-:.ное в остатке масло вносят в эфирдля кристаллизации и отфильтровывают. Полученный сырой продукт (3,31 г)кипятят в 30 мл этилацетата. Послеохлаждения суспензию оставляютстоять в течение нескольких часовв холодильнике и отфильтровывают.ПолучаЮт 3,0 г (70) Е -К 1 с-еО-Р 1 о 8 Н . Т.пл172-174 С; РГОф 18 4=-102,6 (С=1, АсОН ).Элементный анализ.Рассчитано, : С 58,34, Н 6,60,И 14,79.С НО Н (мол. вес 473, 50 )Найдейо,: С 57,52, Н 6,62,й 14,62,Стадия 3. Амид Ь-кетоимидазо,лидин-карбониллейцилпролина.1,2 г (2, 4 ммоль-Кс-ец-РоВН растворяют в 30 мл воды, растворсмешивают с 0,25 г 10-ного палладия на активированном угле в качестве катализатора и пропускают черезсмесь в течение 4 ч газообразныйводород. Затем катализатор отфиль 10 15 20 25 30 тровывают, фильтрат и аморфный остаток высушивают в вакууме надР О, Полученный продукт (0,75 г)растворяют в воде, раствор осветляют активированным углем и лиофилизуют. В итоге получают 0,61 г (71)К 1 с-Ьеч - Ро- МЯ 2, , В=0,35 (5);(1,0), Рро 0,96 (1, 0),П р и м е р 7. Амид Ь -6-кетопи-пеколил- -лей цйл- -пролина,Стадия 1. Пентафторфениловыйэфир ь -6-кетопипеколил карбоновой4,3 г (30 ммоль)-6 в кетопипеколиновой кислоты и 6,07 г (33 ммоль)Р р-ОН растворяют в 100 мл хлороформа и раствор при охлаждениильдом и перемешивании смешивают с6,8 г(33 ммоль) ДЦГК, Смесь перемешивают в течение 1 ч при 0 С, заотем оставляют стоять на ночь в холодильнике. На следующий день выпавшую ДЦМ отфильтровывают, фильтратупаривают и кристаллический остатокрастирают с Н -гексаном. Полученныйсырой продукт (9,87 г) растворяютв 20 мл этилацетата, раствор оставляют стоять в течение 1 ч в холодильнике, затем осветляют активированным углем, Отфильтровывают и упаривают. Полученное в остатке маслорастворяют в смеси 5 мл этилацетата и 20 мл М -гексана, раствор оставляют на ночь в холодильнике и на следующий день выпавшие кристаллы отделяют фильтрованием. Получают 6,34. Элементный анализ.Рассчитано,%: С 46,62, Н 2,61,М 4,53, Г 30,72.2 Н 8 ОзйГ (мол.вес 309,20)Найдено,: С 46,37, Н 2,88,Й 4,26, В 30,51.Стадия 2. Амиг , -6-кетопипеколил--лейцил-пролина.1,32 г (5 ммоль) Н-ец-Ро-ЙН НС 0 суспендируют в 20 мл и при охлаждении льдом и перемешивании смешивают с 1,61 г (5,2 ммоль Крс-ОРГР и 0,7 (5 ммоль) триэтиламина. Реакционную смесь перемешивают 5 мин, добавляют 0,7 мл (5 ммоль триэтиламина, перемешивают еще 20 мин и упаривают в вакууме. Кристаллический остаток растирают с эфиром, кристаллы отфильтровывают, промывают на фильтре эфиром и хлороформом и высушивают. В итоге получают 1,27 г ф 72) Крс-ец -Рьо-ИН . Т.пл. 214- 216 С, К 1=0,41 (5) , =-83 (С=1,АсОЩ,Аминокислотный анализ. Ь -Амино-адипиновая кислота 0,99(1,01, 1,еи 1,00 (1,0); Рго 0,98 (1,0).(10 ммоль) Восч а-ОР 1 р растворяютв 40 мл ДМФА, выдерживают 5 мин иупаривают в вакууме, Остаток растворяют в 50 мл хлороформа, растворпромывают 1 н. соляной кислотой3 раза по 10 мл), 1 н. растворомбикарбоната натрия (3 раза по 10 мл)10 мл воды, сушат над безводнымсульфатом натрия и упаривают. Остаток растворяют в 10 мл этилацетата,смешивают с 10 мп 5 н. раствора хлористого водорода в этилацетате.Через 30 мин реакционную смесь разбавляют эфиром, выпавший осадок отфильтровывают и сушат в вакууменад едким натром. В итоге получают1,83 г (73) Н-Кча-Рро-НН НС 1.В=Ою 10 (41Стадия 2. Амид (. -б-кетопипеколил4-норвалил-(.-пролина.238 г (9 р 5 ммоль) Н ) ча-Рь о- ЙН:НС 1суспендируют в 30 мл и при охлаждении льдом и перемешивании смешивают с 30,09 г (10 ммоль) Крс-ОР(ри 1,33 мл (9,5 ммоль) триэтиламина. Реакционную смесь перемешивают5 мин, добавляют 1,33 (9,5 ммоль)триэтиламина,перемешивают еще 20 мини уларивают в вакууме, Кристалличес-"кий остаток растирают с эфиром, отфильтровывают, промывают на фильтреэтанолом и высушивают. Полученныйсырой продукт 3,66 грастворяют вводе, раствор осветляют активирован-ным углем и упаривают, кристаллический остаток растирают с 10 мл этанола. Смесь оставляют в холодильнике и затем отфильтровывают. Получают 2,10 г (65) Крс-.ео-Рпо-йНТ.пл192-193 С, В=О, 31 (5; с =(20 ммоль) РрОН растворяют в50 мл этилацетата и раствор при перемешивании и охлаждении льдом смешивают с 4,12 г (20 ммоль) ДЦГК.Реакционную смесь перемешивают, 1 чпри ОфС, затем отфильтровывают ДЦМ,фильтрат упаривают, остаток вносятв Н - гексая для криствллил .ции.Полученный сырой продукт (7,3 г)растворяют в 20 мл этклацетата,раствор оставляют в течение 1 ч вхолодильнике затем осветляют активированным углем и упаривают, Полученное в остатке масло растворяютв 5 мл этилацетата и добавлением20 мл Н -гексана осаждают продукт.10 Получают 6,60 г (85)Е-Э - СГр-ОР 1 р.Т.пл. 81-82 С, 8=0,84 (1)Ыв =- -40,1 (С=1, этилацетатЭлементный анализ.Рассчитано,%; С 53,16 Н 2,82, 15 М 3,26, Е 22,13.С Н 12 О КГ 5 (мол,вес 429,30)Найдено,: С 53,28, Н 3,04,8 3,02, Г 21,86.Стадия 2. Амид бензилоксикарбонил-пироглутамил-Ь-лейцилпролина.3, 24 г (12, 3 ммоль) Неи-Р о-я ННС 1суспендируют в 50 мп ДМФА и приохлаждении льдом и перемешивании 25 смешивают с 5,6. г (13 ммоль) Х -ПИр-ОР 1 р и 1) 72 мл (12,3 ммоль) триэтиламина. Реакц.онную смесь перемешивают 5 мин, добавляют 1,72 мл,( 12,3 ммоль) триэтиламина, перемеЗ 0 шивают 20 мин и упаривают в вакууме,Остаток растворяют в 120 мл хлоро Форма, раствор промывают 1 н. раствором соляной кислоты (2 раза поЗО мл, 1 н. раствором карбоната на-трия 3 раза по 30 мл) и 30 мл воды,высушивают над безводным сульфатомнатрия и упаривают. Остаток вносятв эфир для кристаллизации. Полученный таким образом сырой продукт5,31 г)кипятят с 50 мл этилацета та, полученную суспензию оставляютстоять 3 ч в холодильнике и выпавший в осадок продукт отделяют фильтрованием. Получают 4,61.г (80)Х -Э- СВр-Ьец-Рго-МН Т.пл . 189-194 С45 К=.0,44 (4); сц 1 =-31, 20 (С=1,АсОН) .Стадия 3. Амйд Ь -пироглутамиллейцил-.-пролина.4,48 г (9,5 ммоль)-3- Сбр-Ьец-РойН растворяют в 200 метанола и раст 5 о.вор смешивают с катализатором -0,9 г 10-ного палладия на активированном угле и через смесь пропускают в течение 1 ч газообразный водород. Затем катализатор отфильтро вывают, фильтрат упаривают, остаток растирают с эфиром. ПолученныйПри 30, 60 и 90 мин после указанной обработки была измерена локомоторнаяактивность животных, Установленныезначения приведены в таблице в процентах, считая на значения, полученные с животными, обработанными ТРГ.Для этих опытов используют по 15 мышей-самцов весом 18-22 г.З.Резерпино-гипотермическое возвратное действие на мышей,Мышей-самцов весом 18-22 г, разделяют на группы по 10 животных, внутрибрюшинно вводят резерпином дозами5 мг/кг, Через 16 ч животным вводятдозами по 20 мг/кг ТРГ или трипептида, подлежащего исследованию,Измеряют ректальную температуруживотных перед обработкой резерпином (в таблице: "норм."), через16 ч после обработки резерпиномв таблице: "рез,") и через 1 или2 ч после введения исследуемоготрипептида (в таблице "после обработки") . В таблице указаны средниезначения ректальной температуры,измеренной у групп по 10 мышей,4. Влияние на продолжительностьсна, вызванного гексобарбиталом.Мышам-самцам , разделенным на группы по 10 животных, внутривенновводят по 60 мг/кг гексобарбиталанатрия, через 10 мин после этогоживотным внутрибрюшинно вводят дозами по 20 мг/кг веса ТРГ или исследуемый трипептид, подлежащий исследованию. Время сна указано в таблице в процентах, считая на значения,измеренные у животных контрольнойгруппы (средние значения для групппо 10 животных).5, Этанольный наркоз,Мышам смешанного пола весом по 1822 г, разделенным на группы по 20животных, вводят внутрибрюшиннопо 4,5 этанола, Через 10 мин послеэтого животным вводят внутрибрю 10 шинно в дозе 20 мг/кг исследуемый4трипептид. Время сна в таблице указано в процентах (среднее значениегпя группы по 20 животных), считаяна значения, измеренные у животных15 контрольной группы.б, Гормональная активность (ТРГдействие) у крыс.Крысам-самцам (Ы 18 аг) с весом около 200 г, разделенным на группыпо 7-8 животных, вводят внутривенно дозами по 20 мг/кг ТРГ или исследуемый трипептид, ТРГ-реакцию животных определяют через 15 мин послевведения ТРГ или исследуемого трипептида иэ плазмы животного,в результате радиоиммунного исследования.Относительная эффективность рассчитана по методу четырех пунктов, приэтом эффективность ТРГ принимализа 100.Средние значения биологическойэффективности соединений общей формулы (1), определенные в результате описанных фармакологических методов представлены в таблице.Г