Способ получения монофосфатов полипренолов

/113 8 С 1924 СО 50 Г(ЮН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ Н АВТОРСКОМ ЕТЕПЬСТ 8. Бвл. У 39т органической химинскогоилов, С.Д.Мальцев ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТ(57) Изобретение относится к химии полимеров и органической химии и может быть использовано в биохимических исследованиях. Изобретение позволяет получать монофосфаты полипренолов с выходом 80-857. и упрощенным способом, что достигается исполвэованиемв способе получения монофосфатов полипренолов путем взаимодействия .поли. пренолов с эамещенными солями ортофосфорной кислоты в присутствии трихлорт ацетонитрила в среде апротонного орга. нич еского растворителя моно-(тетра-нбутиламмоний)-фосфата, проведением процесса при молярном соотнапении полипренол: фо сфат: трихлорацетонитрил, Е равном 1; 4-10: 25-50, последующим осаждением неорганических Фосфатон амин- (/) аком и обработкой суммы фосфорнлиро С ванных производных полипренолов вод ным раствором 4-диметиламинопиридина р или Н"метилимидаэола.чвае14320 б 5 СнаС Сс Снз СНэ,С СОИ,Изобретение относится к химии полимеров и органической хиьыи, а именно к способу получения ионоосфатов погде а фф 1-3 б 1"15; в = 0"1.и может быть использовано в биохимических определениях.Целью изобретения является повыщение,выхода целевых продуктов и упрощение способа.В качестве исходных полифеноловиспользуют фарнеэол, морапренол идолихол,20В качестве органического растворителя используют любой апротонныйрастворитель, в котором хорошорастворим как моно-(тетра-н-бутиламмоний)-фосфат, так и фосфорилнруемый полипренол., например ацфтонитрил, его смесь с бенэолом или четыреххлористым углеродом хлороформили хлористый метилен. Б случае применения для фосфорилирования высшихполипренолов только ацетонитрнлареакционная смесь должна содержатьтрихлорацетонитрил (в котором хоронорастворяются все полипренолы) в та"ком количестве чтобы после прибав)35ления всего количества ацетонитрильного раствора моно-(тетра-н-бутиламмоний)-фосфата реакционная смесьоставапась гомогенной (объемное от"ношение трихлорацетонитрил:ацетонитрил ) 1 в 3).В качестве нуклеофильного катали"затора применяют 4"днметиламнопиридин или К-метилимидаэол.П р и м е р 1. Получение морапренилфо сфата.Иорапренол(д-ненасыщенный С уполипренол иэ листьев шелковицы,100 мг, 130 мкмоль) растворяют в0 5 мп (5 ммоль) трихпорацетонитрилаЭ50и прибавляют при встряхивании 1,2 млраствора моно-(тетра-н-бутиламмоний)фосфата (540 мкмоль) в вбс, ацетонитриле. Через 15,мин растворителиудапяют в вакууме, 2 раза отгоняютот остатка по 1 мп толуола. Остаток 55растворяют в 1,5 мп тетрагидрофуранаи прибавляют 0,3 мп 25 ,-ного аммиака,Через 6-15 мин прибавляют 5 мп толулипренолов, причем последние имеютобщую формулу ола и 5 мп метанола. Перемеинвают, дают отстояться, надосадочную жид" кость отделяют, осадок промывают дважды смесью толуол - метанол 1:1. Раствор и промывную жидкость упаривают досуха, 2 раза с 3 мп пропанола для удаления толуола, растворяют в 1 мп пропанола и постепенно прн встряхивании прибавляют 40 мп дистиллированной воды, К раствору прибавляют 30 мг (245 мкмоль) 4-днметнламинопирндина и кипятят 8 ч с обратным холодильником. Прибавляют при охлаждении 60 мл пропанола, упаривают досуха на роторном испарителе, остаток растворяют в смеси хлороформ: метанол 2:1 (ЭО мп) н перемешивают 1 ч с избытком дауэкса 50 И 8 (Ру+). Смолу отфильтровывают, промывают этой же смесью растворителей, прибавляют 0,5 мп 25 -ного аммиака и упаривают раствор досуха. Остаток растворяют в толуоле и через Э ч при 4 С осадок удапяют. Толуольный раствор упаривают, остаток растворяют в 50 мп смеси хлороорм: метанол 2;1, наносят на колонку с 0 Е(ОАс ), 1 х 10 см, уравновешенную той яе смесью растворителей, промывают колонку ЭО мп этой смеси и 30 мп метанола и элюнруют целевой продукт 40 мМ раствором ацетата аммония в метаноле (50 мп). Продукт однороден по ТСХ в системе хлороформ:метанол: вода 60:25:4 К= 0,50. По данным анализа отношение кислотолабильного осфата и полипренола составляет 1,05:1 (теор, 1:1). Выход 110 мкмоль (85 ),П р и и е р 2. Получение долихнл" фосфата.Долихол (Ы-насыщенный С з-полипренол из печени свиньи, 100 мг, 7 б мкмоль) растворяют в 0,2 мп абс. бензола, прибавляют 0,4 мп (4 ммопь)трнхлорацетонитрила н, при встряхивании, 1,5 мп раствора моно"(тетра-н-бутиламмоний)" фосфата (750 мкмоль) в абсолютном ацетонитриле, Через 10 мин раствори- тели удаляют в вакууме, отгоняют 2раза по 1 мп толуола, растворяют в3,5 мл тетрагидрофурана и прибавляют0,8 мл 25 ,-ного аммиака. Через 20 минприбавляют 10 мп толуола и 5 мп мета"иола, упаривают досуха и 3 раза с2 мп толуола растворяют в 20 мл толуола. Через 10 мин толуольный спой отделяют от сиропообраэного осадка, остаток промывают 2 раза по 4 мп смеситолуол - метанол 11. Раствор упаривают досуха и 2 раза с 3 мп пропанола, растворяют в 1,5 мп пропанола ипостепенно при встряхивании прибавляют 40 мл дистиллированной воды. Копалесцирующему раствору прибавляют60 мг (490 мкмоль) 4-диметиламннопиридина и кипятят с обратным холодильником 10 ч, По Охлаждении прибавляют70 мд пропанола, упаривают досуха 20и 2 раза с 2 мл пропанола, растворяютв 30 мп смеси хлороформ:метанол 2:1и перемешивают с избытком дауэкса50 Яхй (Ру+) в течение 2 ч. Смолу отФильтровывают, промывают этой жесмесью растворителей, прибавляют0,2 мп 25 -ного аммиака, упариваютдосуха и 2 раза с 2 мп толуола растворяют в 20 мп толуола и выдерживают4 ч 4 С, Осадок отделяют, проьывают 30толуолом, упаривают досуха толуольныйраствор, остаток растворяют в 50 мпсмеси хлороформ: метанол 2:1 и наносят на колонку с ДЕ"52(ОАс ), 1 х 10 смуравновешенную той же смесью растворителей. Элюируют долихилфосфат 50 мл З 540 мМ раствора ацетата аммония в смеси хлороформ:метанол 2:. Продукт однороден по ТСХ в системе хлороформ;метанол:вода 60;25-.4; К 0,65. По дан 40ным анализа Отношение долихол:кислотолабильный Фосфат: общий Фосфат составляет 1:0:0,96 (теор. 1:0:1). Принеобходимости ацетат .аммония удапяют .1на колонке с 1 Н(пример 1).Выход 61 мкмоль (80 ),45П р и м е р 3. Получение Фарнезилфосфата.Фарнезол (-ненасыщенный С 1-поли,пренол, смесь иэомеров, 50 мкл,200 мкмоль) растворяют в 0,5 мп50(5 ммоль) трихлорацетонитрнла и прибавляют 2 мл раствора моно-(тетра-нбутиламмоний)-фосфата ( ммоль) вацетонитриле. Через 10 мин раствори 55тели удаляют в вакууме, остаток раст:воряют в 3 мп тетрагидрофурана иприбавляют 0,6 мп 25 ,-ного аммиака.Через 20 мин прибавляют смесь 5 мл,1432065 4метанола;и 10 мп толуола, перемешива"ют, дают отстояться, осадок отделяют,промывают толуолом и метанолом,упариваютдосухаи 2 раза с 3 мп пропаноларастворяют в 1 мп пропанола и привстряхивании прибавляют 40 мл дистиллированной воды. К полученному раствору прибавляют 60 мг (490 мкмоль)4 диметнламинопиридина и кипятят10 ч с обратным холодильником. Послеохлаждения прибавляют избыток дауэкса50 И 8 (Ру+), перемешивают 1 ч, смолуотфильтровывают, прибавляют 0,5 мп25 -ного аммиака, упаривают досуха,прибавив предварительно 80 мп пропанола,и 2 раза со смесью толуол:метанол 1:1. Растворяют в толуоле, через3 ч при 4 С отфильтровывают осадок,промывают толуолом и смесью толуол:метанол 11 и упаривают досуха, Остаток растворяют в 50 мп смеси хлороформметанол 2:1, наносят на колонку(1,515 см) с,ДЕ(ОАс ), уравновешенную той же смесью растворителей,промывают 30 мп этой смеси и 30 мпметанола и элюируют 100 мп 40 мираствора ацетата аммония в метаноле.Продукт однороден по ТСХ в системехлороформ;метанолвода 60:25:4, К0,35, выход 160 мкмоль (803), отношение фарнеэол;кислотопабильный Фосфат 1:0,97 (теор,1:1).П р и м е р 4. Все операции проводят аналогично примеру 3, но из20 мкл (80 мкмоль) Фарнезола,0,2 мл (2 ммоль) трихлорацетоиитрила и 400 мкмоль моно-(тетра-н-бутиламмоний)-фосфата и с использованиемна стадии гидролиз а 40 мкл(500 мкмоль) Н-метилимидазола в качестве нуклеофильного катализатора.Выход 66 мкмоль (83 ) Фарнеэилфосфата.П р н м е р 5. Аналогично примеру3, но моно-(тетра-н-бутиламмоний) -Фосфат растворяют в 0,5 мп хлорофор-ма, предварительно пропущенного через колонку с оксидом алюминия ТТстепени активности. Выход Фарнезилфосфата 162 мкмоль (81 ),П р и м е р б (контрольный), Аналогично примеру 1, но с 250 мкмольмоно-(тетра-н"бутиламмоний)"Фосфата.Выход морапренилфосфата 65 мкмоль1432065 Формула изобретения Составитель В.Полякова Техред И.Дидык Корректор И,Муска Редактор Г, Волкова Заказ 539119 Тираж 434 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж"35, Раушская наб., д, 4/5Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 в трихлорацетонитриле и постепенно прибавляют к этой смеси при переменивании раствор бис-(триэтиламмоний)-фосфата я ацетонитриле, Процесс проводят при молярном отношении полипренол:бис-(триэтиламмоний)-фосфат:трихлорацетонитрил; 1:2,3-15. После удаления растворителей и растворения ос татка в смеси хлороформа и метанола неорганические фосфаты удаляют, экст= рагируя водой, а органический слой подвергают анионообменной хроматографии на ДЗЮ"целлюлозе, Выход фикапренилфосфата составляет 20 Х. Способ получения монофосфатов полипренолов путем взаимодействия полипреьолов, содержащих атомы углерода 15 С з 5 с 3 амещенными аммо ни евыми солями ортофосфорной кислоты в присутствии трихлорацетонитрила в среде апротонного органического растворителя, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения выхода целевых продуктов и упрощения процесса, в качестве замещенной аммониевой соли ортофосфорной кислоты используют моно-(тетра-н-бутиламмоний)-фосфат и процесс проводят при молярном отношении полипренол:моно-(тетра-н-бутиламмоний)-фосфат:трихлорацетонитрил 1,"4-10:25-50 с с последующей последовательной обработкой полученного продукта аммиаком и водным раствором 4- диметиламинопиридина или И-метилимидазола.