4(5) карбэтоксиимидазолил-5(4)-амид -п-ди-(2-хлорэтил) аминофенилмасляной кислоты, обладающий противоопухолевой активностью

10т 20 4 Ь )-Карбэтоксиимидазолил(4 )- -амид-1 п-ди-(2-хлорэтил )- амико" фенил 1-масляной кислоты получаютт ацилированием этилового эфира 4(5)-амико-,5 имидазол(4)-карбоновой кислоты хлор- гидратом хлорангидрида 1 -Гп-ди-(2- -хлорэтил)"аминофенил 1-масляной кислоты в с е ер д бензола в присутствии триэтиламина.0 0П р и м е р. К суспензии 3 1г(,02 моль)этилового эфира 4(5)- -аминоимидазол(4)-карбоновой кислоты и 7,2 г (0,0206 моль) хлорангидри да-п-ди-(2-хлорэтил)-аминофенил 1-масляной кислоты в 300 мл без водного бензола при температуре не)выше 5 С прибавляют по каплям 10,8 мл (0,08 моль) триэтиламина, нагревают до кипения и кипятят 1 ч. Горячую реакционную массу фильтруют от осад "40 ка хлоргидрата триэтиламина и бензольный фильтрат упаривают досуха на роторном испарителе.Остаток, по" следовательно обрабатывают разбавленной соляной кислотой (1:1), раз бавленным раствором соды, промывают водой и сушат на воздухе. Выход неочищенного продукта с т.пл. 129-131 С 5,8 г (65,8 Х)Чистый продукт получают двукратной кристаллизацией из спирта. Бесцветные пластинки с т.пл.р ь133-134 С, выход 3,0 г (34,0 Ж),Растворим в спирте, ацетоне, бензоле, нерастворим в воде, эфире. При хранении на воздухе медленно гидролизуется.;5Найдено, Е: С 54,44, Н 5,92, С 1 5,99, Н 12,74. С 10 Нфб С 1114 033 52531Предлагаемое соединение обладаетменее выраженным токсическим влиянием на об ещ е число лейкоцитов крови и имеет несколько инои спектр про 5чтивоопухолевой активности, а такжеоказывает б олее эффективное действиена отдельные штаммы экспериментальныхопухолей, например саркому 45 и ССК,по сравнению с хлорбутином,Целью изобретения является сйн-, тез нового химического соединения(5)-карбэтоксиимидазолил(4)-амида р -п-ди-.(2-хлорэтил)-аминофенил - масляной кислоты, которое может найти применен ие в медицинскои практике дляюлечения злокачественных новообразований. 1 4Вычислено,7: С 54,42, Н 5,89,С 1 16,10, И 2,70.4(5)-Карбэтоксйимидазолил(4) - -амид " -1 п"ди(2-хлорэтил)-аминофенил,1-масляной кислоты в дозе8 мг/г/кг при: введении внутрь обладает значительным противоопухолевымдействием. Индекс торможения при максимальном эффекте составляет, Х:Саркома 45 90,4Карцинома Герена 94Саркома И67, Саркома ССК 100Лимфосаркома Плисса 58Саркома Иенсена 96Саркома 536 80Альвеолярный ракпечени 55Асцитная опухоль Эрлиха 63Саркома 180 69Саркома НК 68Саркома АК 40Судя по химиотерапевтическому индексу., предлагаемое соединение обладает наибольшой избирательностьюпротивоопухолевого действия в отношении саркомы 45 по сравнению схлорбутином и сарколизином. Предлагаемое соединение может найтиприменение в медицинской практикедля лечения определенных форм злокачественных новообразований и расширить ассортимент противоопухолевыхпрепаратов .4(5)-Карбэтоксиимидазолил(4)- с. амид - п-ди(2-хлорэтил) -аминофе-нил 1-масляной ккслоты дляя краткостиназван имбутином.Злияние имбутина на рост экспериментальных опухолей.Противоопухолевая активность имб утина изучена на 8 перевиваемыхопухолях крыс и 4 перевиваемых опухо.лях мышей, Препарат вводят внутрь ввиде взвеси в 1 .-ном крахмальномчклеистере, Лечение солидных опухолейначинают на 5-8 день после трансплантации (альвеолярного рака печени - на144 день), за исключением отмеченныхниже опытов. Противоопухолевую активность оценивают по индексу торможения роста опухолей, вычисленному как отношение разности веса опухолей вконтроле и опыте к среднему весу опухолей в контроле (7). Лечениеасцитной опухоли Эрлиха начинают наследующий день после перевивки. Про- е20 55253 тивоопухолевую активность оценивают по влиянию на накопление асцитической жидкости и асцитных клеток.О.токсичности имбутина судят по. изменению веса животных (за вычетом веса опухоли) и веса селезенки в конце опыта. В некоторых опытах подсчитывают общее количество лейкоцитов в крови. 10Число животных в каждой опытной и контрольной группе составляет 6- 10, в большинстве случаев 8-9.Все экспериментальные данные статистически обработаны путем вычисления 15 средней арифметической и ее стандартной ошибки, Различие между сравниваемыми средними считают статистически значимыми при уровне вероятности р ( 0,05.А. Первичное испытание противоопухолевой активности имбутина.В предварительных опытах на здоровых крысах была изучена токсичность имбутина при однократном введении. 25 Установлено, что ЛД ф для крыс равна 105 мг/кг.Первичное испытание противоопухолевого действия имбутина проведено на трех штаммах опухолей: асцитная 30 опухоль Эрлиха, саркома 45 и саркома 180.Результаты показывают (табл,1), что препарат в дозах 5, 1 О и 20 мг/кг уменьшает накопление асцитической жидкости опухоли Эрлиха на ЗЗХ. В этих же опытах имбутин снижает накопление асцитных клеток на 35-48 Х.В дозе 20 мг/кг препарат тормозит рост саркомы 180 на 76 Х. 40Значительное противоопухолевое действие имбутин проявляет в опытах на крысах с саркомой 45. При длительном введении.(в течение 15 дней) в дозе 8 мг/кг препарат угнетает рост 45 опухоли на 90,4 Х. Во второй серии опытов лечение крыс начинают через 72 ч после перевивки и продолжают в течение 5 дней. Результат оценивают через 10 дней после окончания 50 лечения. В дозах 6, О и 12, 8 мкг/кг имбутин вызывает полное рассасывание опухоли. В дозе 12, .8 мг/кг препарат оказывает токсическое действие на организм, снижая вес тела животных, 55 уменьшая вес селезенки и вызывая ги- бель 10 Х животных.Таким образом, при первичном испы-. тании имбутин проявляет выраженную 11бспособность тормозить рост опухолей,в связи с чем было проведено расширенное изучение его противоопухолевой активности в сравнении с хлор"бутином . - препаратом группы хлорэтил.аминов, применяемым в клиническойпрактике,Б. Сравнительное изучение противоопухолевой активности имбутина ихлорбутина.В терапевтических опытах животныхделят на три группы. В первой группевводят имбутин внутрибрюшинно в дозах8-10 мг/кг, во второй группе - хлорбутин внутрибрюшинно в дозе 3 мг/кг.Выбранная первоначально доза 5 мг/кгоказалась токсичной и была сниженаТретья группа животных служит контролем для двух первых.Результаты показывают (табл.2),что имбутин так же, как хлорбутин,имеет широкий спектр противоопухолевого действия. Оба препарата вызывают сильное торможение карциномыГерена и саркомы Иенсена, При этомотдельные опухоли подвергаются полнои регрессии,Самый высокий эффект достигнутна саркоме ССК. К концу лечения опухоли отсутствовали у всех животныхв обеих экспериментальных группах.Для определения полноты излечения заживотными наблюдают в течение двухнедель после окончания введения препаратов, через две недели у крысы,получивших имбутин, опухоли не появляются. У крыс, леченныххлорбутином,средний вес опухолей составляет 26,0.Таким образом, на этом штамме имбутиноказывается более эффективным, чемхлорбутинМенее чувствительными к обоим препаратам оказались саркома 45, саркома М, саркома 536, лимфосаркомаПлисса и альвеолярный рак печениРС. При сравнении противоопухолевой активности препаратов в отношении перевиваемых опухолей мышей установ/лено, что имбутин оказывает более сильное влияние .на рост саркомы 180. Индекс торможения при максимальном эффекте для имбутина 69, для хлорбутина 44 Х.По влиянию на асцитную опухоль Эрлиха имбутин уступает хлорбутину: индекс торможения соответственно 68 и 84 Х.Саркома НК и саркома АК оказались в одинаковой степени чувствительны к обоим препаратам.При сравнении токсического дейст вия препаратов на организм установ" лено, что имбутин и хлорбутин в оди 1 иаковом числе опытов вызывают уменьшение веса селезенки и падение веса тела животных. Однако имбутин оказы вает более мягкое воздействие на лейкопоэз, Так, после применения имбутина в дозе 10 мг/кг в крови сохраняется 54 от исходного содержания лейкоцитов. После применения хлорбутина 15 в адекватной по эффективности дозе 3,3 мг/кг в крови определяется лишь 18/ лейкоцитов.В. Исследование избирательности противоопухолевого действия имбути на.Изучение избирательности противоопухолевого действия имбутина проводят в сравнении с двумя препаратами группы хлорэтиламинов - сарколизином и хлорбутином. Противоопухолевую активность и токсичность испытывают в одном комбинированном токсико-терапевтическом опыте на саркоме 45 по методике М.Х . Караивановой (1 971). Соединение вводят в пяти-шести различных дозах в течение 5 дней, имбутин - внутрь, сарколизин и хлор,бутин - внутрибрюшинно. Лечение начи.нают через 72.ч после перевивки опухоли. Животных забивают через 1 О днейпосле окончания введения препаратов.Вычисляют процент гибели животных.Противоопухолевую активность выражаютв процентах торможения роста опухоли,Применяют пробит - метод для нахождения значения искомых величин: дозы,вызывающей гибель 10 животных (ДЛ, )и дозы. дающей 90 торможения опухоли (ДТро ). Определяют терапевтиче -ский индекс-ДЛ: ДТ 96Установлено (табл. 3), терапевтический индекс равен у сарколизина1,76, у хлорбутина 2,22, у имбутина2,70. Таким образом, имбутин обладает наибольшей избирательностью действия в отношении саркомы 45.Имбутин обладает высокой противоопухолевой активностью и широкимспектром действия, По силе противоопухолевого эффекта сопоставим стаким алкилирующим препаратом, какхлорбутин, но отличается от него поспектру действия. В опытах на саркоме 45 имбутин проявляет большую,избирательность противоопухолевогодействия по сравнению с сарколизиноми хлорбутином,1 О Таблица 1 525311 Влияние нмбуткна на рост перевнваеюк опухолей Дневнаядоза,иг/кг Вес опухоли, г (обьеи асцктичесхой жидкости) Вес Индекс Число селезенки, г вменение веса животных, г авеле"иий торможенияконтроль опыт контроль опыт контроль Асцитнвя опухоль Эрлиха 2,6 6 0,402,4 т 0,0201,8 т 0,307 1 020 О 22 . О 02 0,22 1 0,02 0,22 ф 0,02 0,22 1 0,02 0,16 80,02 0,20 1 0,03 0,15 + 0,02 0,37 + 0,02-6,0 21,4 19,4 204 15555 861 О2,8 90,4100100100 т в б л и ц а 2Влияние нмбутинв н клорбутина на рост перевиваемых опухолей крыс н мьпаей Числоживот-Вариант Дневнаядоза,мг/кг Число Вес селезенки Вес опухоли, г Индексторможения, Х рирост веса жиотных введений г аркоиа 45 421 Э,В17,0 й 4,66,1 Ф 5,2 7,0 т 1,6,9 110арциноиа Герека Контроль ИмбутинХлорбутин 85 90 1 О 10 0,2 + 3,345 1 4;7,4 140 Контроль Имбутнн Хлорбутнн 061. 0,2 0,87 1 0,0 86 62 0,98 1 009 8,54 х 005 0,64 1 0,06 5014,2-058 2,3 93/ 10 КонтрольИмбутинХлорбутин 4 1 85/ 191 е 56 6,2 12210,0 х 0,7 15Э/1 Контроль ИмбутинХлорбутин 5/ 26,5 т 1,2 11,5 1 1,4 11,7 1 1,2 КонтрольИмбутинХлорбутин 57 54 15 15 Э Саркома СС 64,0 1 12,0 Контроль 8 Имбутин 10 Хлорбутин О 15 15 420 1 4 КонтрольИибуткнХлорбути 00 100 Лиифосаркоиа Пл КонтрольИмбутинХлорбуткн 1,8 4,2 10,4