Способ получения l-лизина

в) ЯЯ) 1 С Р 139 Н ТЕН ОО сотоз соВетскихСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ РЕСПУБЛИКГОСУДАРСТВЕНПОЕ ПАТЕНТНОЕВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОЛЙСАЯИЕ И(72) Арутюнян СЖ Карабеков Б.ПАкопян З.ММаркарян МА; Дабагян ЗА; Асланян В.ШГабисония ТГЕсаян М.ВМовсесян С.Е; Адиян Н,ГХингоян МО,(57) Исгюльзование: микробиологическая промышленность, получение .-лизина фермента цией Сущность способа заключается в добавлении смеси бактериофагов, специфичных к микроорганизмам рода Рго 1 ецв, на стадии приготовления посевного материала в количестве, обеспечивающем конецную кочцентрацию смесь в ферментационной среде, равную 22 х 10 фаговых цастиц/мп 2 табл2Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается способа получения(.-лизина,Целью изобретения является предотвращение потерь лизина.Это достигается предлагаемым способом, заключающимся в том, что на стадии приготовления посевного материала к нему добавляют смесь бактериофагое ф - 30, ф, ф, ф, ф, ф, ф, специфичных к микроорганизмам рода Рго 1 ецз, в равных соотношениях, обеспечивающем конечную концентрацию смеси фаговых частиц в среде 2 х 10 фаговых частиц/мл (ф,ч,/мл).Эта смесь представляет собой физическую смесь независимо отселекционированных бактериофагов, лиэирующих различные группы - фаготипы бактерий рода Рго 1 ецз и отличающихся между собой по спектру литического действия,Как видно из табл,1, предлагаемая смесь бактериофагов лизирует 7 групп - фаготипов. бактерий рода Рготецз, а бактериофаги. входящие в состав смеси, отличаются между собой по спектру литического действия,В нижеследующей табл.2 представлены данные по деградации-лизина бактериями рода Ргоецз и ее предотвращению специфическими фагами в ферментационных процессах с использованием штаммов - продуцентов Е-лизина Вген Ьастегцв Лачцп Е - 531 и НИТИАв условиях колбочной ферментации.Как видно иэ таблицы (пп.1, 2),.добавление фагов не влияет на выход-лизина, т,е, эти бактериофаги не действуют на клетки самих продуцентов лизина, Добавление в ферментационную среду суспензии бактерий Рготецз (п,З табл,2) приводит к резкому снижению выхода-лизина, а добавление в ферментационную среду, зараженную клетками Рго 1 ецз, смеси бактериофагов Ргоецз, обеспечивает выход лизина на уровне, достигаемом самими продуцентами,П р и м е р 1. Культуру штамма В геч 1 Ьасегц в ар, Н ИТИАвыращивают при ЗО С в течение 24 часов на мясопептонном агаре и петлей высевают в колбу емкостью 750 мл, содержащую 30 мл посевной среды следующего -состава, г/л: меласса 80,0; сернокислый гидролиэат БВК 100,0; рН 7,2-7,4. Колбы помещают на круговую качалку (240 об/мин) и выращивают посевной материал в течение 18 - 24 ч при 30 С, В готовый посевной материал добавляют 0,1 мл смеси бактериофагов в титре 10 ф,ч,/мл5 (по 0,3 10 ф.ч,/мл каждого иэ фагов, составляющих смесь) и этим материалом эасе 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 вают ферментационные колбы емкостью 750 мл, содержащие по 30 мл ферментационной среды следующего состава. г/л; меласса 200,0; сернокислый гидролизат БВК 150,0; мел 20,0; рН 72 - 7,4. Колбы помещают на круговую качалку (240 об/мин) и проводят ферментацию в течение 72 ч при 30 С, При истечении указанного времени концентрация 1:лизина в культуральной жидкости составляет 48 г/л.П р и м е р 2. Культуру штамма СогупеЬастегце дцсащсцгп Афвыращивают при 30 С в течение 24 ч на мясопептонном агаре и петлей высевают в колбу емкостью 750 мл, содержащую 30 мл посевной среды следующего состава, мас,о : меласса 3,0: кукурузный экстракт. 3,0; хлористый натрий 2,0; рН 7,2, Колбы помещают на круговую качалку (240 об/мин) и выращивают посевной материал в течение 18-24 ч при 30 С, В готовый посевной материал добавляют 0,1 мл бактериофагов в титре 10 ф.ч./мл (по 0,3 10 ф.ч,/мл каждого из фагов, составляющих смесь) и этим материалом засевают ферментационные колбы емкостью 250 мл, содержащие по 15 мл ферментационной среды следующего состава, мас. : меласса 20,0 (10% по сахару); гидро лиэат БВК 7,0; мел - 2,0; рН 7,3, Колбы помещают на круговую качалку(240 об/мин) и проводят ферментацию в течение 72 ч, По истечении указанного времени концентрация-лизина в культуральной жидкости составляет 35-47 г/л.П р и м е р 3, Культуру штамма ВгенЬастегце зр, Е, выращенную при 30 С в течение 1 сут на мясопептонном агаре, петлей засевают в колбы емкостью 750 мл, содержащие по 30 мл посевной среды следующего состава, мас,%: меласса 8,0; гидролизат БВК 14,0, рН 7,0. Колбы помещают на круговую качалку и выращивают посевной материал в течение 21 ч при 30 С. В готовый посевной материал добавляют 0,1 мл смеси бактериофагов в титре 10 ф,ч,/мл (по 0,3 10 ф,ч,/мл каждого из фагов, составляющих смесь) и этим материалом засевают ферментационные колбы емкостью 750 мл, содержащие по 20 мл ферментационной среды следующего состава, мас,%: меласса 4,0; гидролиэат БВК 6,0; хлорид аммония 2,5; гидрофосфат калия 0,2: мел 1,0, рН 7,0, Ферментационную среду, разлитую в колбы, перед посевом стерилиэуют автоклавированием. После посева колбы устанавливают на круговую качалку и инкубируют при 30 С. Через 66 ч после начала ферментации в культуральной жидкости накапливается-лизин в концентрации 47,1 г/л (по моногидрохлориду).1839680 Таблица 1 Спектр литического действия бактериофагов и их смеси фСмесь фаговц 9 аг абли ер ан НИТ 7,5 На производстве способ осуществляют следующим образом.Смесь бактериофагов добавляют в колбу с посевным материалом, которым засевают посевной аппарат, Далее выращенный посевной материал вместе с бактериофагами из посевного аппарата передают для засева в ферментеры. Таким путем обеспечивают на всех стадиях биосинтеза лизина защиту от бактерий рода Рготецв.Количество смеси бактериофагов, необходимое для предотвращения контаминации чужеродными микроорганизмами, определено экспериментальным путем, Конечная концентрация смеси бактериофагов в ферментационной среде, равная 2 10 ф.ч./мл, является оптимальной, так П р и м е ч а н и е. Штаммы Рбилисского НПО "Бактериофаг",как при концентрации менее чем 2 10 не обеспечивается взаимодействие фага с бактериями, и потому выход-лизина снижается, а большая чем 2 1 О ф,ч./мл 5 конечная концентрация смеси бактериофагов не приводит к дальнейшему увеличению накопления Е-лизина в культуральной жидкости.Таким образом. предлагаемый способ 10 позволяет предотвратить потери лизина вслучае инфицирования питательных сред контаминантными бактериями, например бактериями рода Рготеоз,15 (56) Авторское свидетельство СССР М 1193169, кл. С 12 Р 13/08 1985 128 и Рг, МгаЬШз М 124 полу аны из му1839680 Продолжение табл. 2 Составитель А. АкопянТехред М,Моргентал Корректор С.Шекмар Редактор Л, Павлова Подписное Тираж НПО "Поиск" Роспатента113035, Москва, Ж.35. Раушская Заказ 3412 наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул Гагарина, 101 Формула изобретенияСПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ :ЛИЗИНА путем засева посевного материала и глубинного культивирбвания лизинпродуцирующих микроорганизмов в питательной среде, содержащей источники углерода, азота, минеральные соли и стимуляторы роста, отличающийся тем, что. с целью предотвращения потерь -лизина, к посевному материалу перед культивированием добавляют смесь бактериофагов ф, ф, ф, ф, ф-Т 7, ф, ф, специфичных к микроорганизмам рода Рготеиз, в равных соотношениях, в количестве, обеспечивающем конечную концентрацию смеси фаговых частиц в среде 2 ф 10 ф.ч,/мл.