Способ получения п-нитробензойной кислоты

(11 М 2183 Союз Советскик Социелистииеских Республик/31-16с присоединением заявки . 51) М Кл.С 07 с 63/06С 123 13/00 Государственный номитет Совета Министров СССР оо делам изооретеннй(45 р Дата опубликования описания 15. 12. 74. Садырина 72) Авторы изобретен Л.А.Головлева, Е.Л.Головлев, Г,К.Скрябини В.И. Крупянко ганизмов ститут биохимии . и физиологии(54) СПОСОБ ПОЛУЧИ 1 ИЯ В =НИТРОБЕНЗОИНОИ КИСЛОТ 1Изобретение относйтся к мик- робиологическим способам получения медицинских препаратов.Известен способ получения а=нитробензойной кислоты путем автоклавирования й-=нитротолуола, ледяной уксусной кислоты, ацета- тО кобальта, ацетата марганца и броицца аммония при высоком давлении и температуре 204 оС, дальнейшего охлаждения смеси до 25 С, фильтрования, промывания осадка й высушивания целевого продукта.Для упрощения технологического процесса предлагается окисление вести с использованием культуры. Фоса оСс,а .тре.с .е 5 1 А или культуры лгЬс Ь,-Ал,осот.О-й.с-лто Ь.Культура 4 оса ъА.с прес .е 5 20 1 А имеет следующие культурально= морфолагические признаки На обычных питательных средах (мясопептонный агар, сусловый агар, минеральная среда с глюкозой 1 да-, ет колонии розово=охристого цвета, гладкие, блестящие, выпуклые.Размер клеток при росте на мясопептонном бульоне у 24=часовойкультуры 0,15-1 х 8-10 у , Клетки палочковидные, слегка йскривленные, с неровнйми контурами,ангулярные формы ярко выраженй,ветвление редкое, но отчетливое,На вторые-третьи сутки культурараспадается на кокковидные фрагменты диаметром 0,5-1,0,Физиолого=биохимйческие признаки культуры. Аэробо растетпри температуре 1537 С, оптимумоколо 28"С. Дйапазон рН 5-9. Обладает активной каталазной активностьд. Твин = 40 гидролизует.Желатину не разжижает. Крахмал,клетчатку, казеин не голизует,Нитраты редуцирует. Ассимилируетбез кислотообразования следующиеуглеводы: глюкозу, галактозу,ксилозу, арабинозу, сахарозу, мальтозу, трегалозу, лактозу, раффинозу, маннит, сорбит. Ассими лирует глицерий, этанол, ацетат,442183 3пропионат, бутират, сукцинат,цитрат, н=алканы; с нонана погептадекан, олефин, додецен=.,изо=парафий, сквалан. е ассимилирует бензоат, салицилат, никотинат, фенол, йирокатехин, резорций, нафталин, метилпиридины.В качестве источйиков азота усваивает нитриты, нитраты, аммонийные соли, глочевину, аспарагин, юпептон, гицролизат казеина. На среде без источников азота не растет. По своим морфологическими физиолого=биохимическим признакамкультура близка к виду.4 Ъса.ос.а8 сссй но отличается тем, чтоалонии неслизистые, клетк несколько мельче, растет при 37 С, фенол не использует, трансформйруети=нитротолуол в соокислительныхусловиях в соответствующую кислоту.Культура.Фасо.Жа со,а Уп77 А имеет следующие культурально= "морфологические признаки. а обычных питательных средах (мясопептонный агар, сусловый агар, минеральная среда с глюкозой) даетколонии красно=розового цвета,гладкие, блестящие, выпуклые, воздушный мицелий не образует,Культура в молодом возрасте палочковиднэя (10 И и более, В процессе роста распадается на короткиешаровидные палочки.Физиолого=биохимические признак. Аэроб, растет при температуре 15-37 оС, оптимум 28-30 о,циапазон рН 5-9, оптимум 6,5-7,5.Ассимилирует без образования кислоты и газа следующие углеводы:глюкозу, сахарозу мальтозу, галактозу, маннит, Йе ассимилйрует 4,лактозу и ксилозу. Ассимилируетуглеводороды с гексана по гептадекан, сквалан, иаооктан. Не ассими-лирует ароматические ициклическиауглеводороды, Молоко не сбраживает, не коэгулирует, желатину неразжижает, крахмал не гидролизует,инцол и сероводород нв образует.Ассимилирует аминокислоты: валин,лейцин, фенилаланин, норлейцин,изолейцин аспарагий. Усваиваетлактат, пропионат и ацетат. Неассимилирует фенол, метилпидины,бензоат, салицилат, никотинат. Вкачестве источников азота усваивает нитриты, нитраты, аммонийныесоли, пептон, рспэрагйн.5Штаммы Иди. оЬ.а р - сс.е.5 14ь ии,Рос.а о/.о с -а-Ы. 7 а 77 А хра нятся в Лаборатории коллекции культур Института биохимии и Физиологии микроорганизмов АН СССР под указанными номерами.Пример. Культуру Фсс с. .с зас -е. штамм 1 А выращивают нэ эгаризованной среде Ьошина (8-Е) с гексадекэном в качестве источника углерода в течение двух суток, а суспензию выросшей культуры высевают в колбы Эрленмейера на 250 мл с жидкой средой 8-,азлитой по 50 мл. Состав среды- Е в г/л: ФУБЕР.7 Н 20 - 0,8;ЛГэСЙ - 0 5; ЩР 04 - 0,7;0 УН 4)2 НР 14 - 1,5; вода водопроводная до 1 л, гексадекан добавляютв количестве 10 г/л, й =нитротолуол вносят в каждую колбу в количестве 0,2 г. Колбы выдерживают на качалке 200 об/мин при30 оС. Процесс трансформации прослеживают с помощью хроматографиив тонком слое окиси алюминия флисиликагеля .и=Нитробензойная кислота образуется на вторые сутки,Ферментацию прекращают на третьисутки. Культуральную жидкостьцентрифугируют при 6000 об/минв течение 20 мин, затем надосадочную жидкость йодкисляют дорН 2,0 и упаривают на роторномиспарителе. Сухой остаток перекристаллизовывают из воды. Выходкислоты 4 Г 80-87 Я на введенный вреакции н юнитротолуол. 7.нл.выделенной кислоты 241-242 Сот.пл.смешанной пробы 240-242 оС.Идентичность выделенной кислотыс заведомо известным образцомстановлена следующими методами:Б-спектроскопии, УФ-спектроскопии ( усама.кс в метаноле 270 нм,в бензоле 258 нм), методом флуорометрии, Выделенйая кислота хромотографически чистая, имеет одинаковую хроматографическую подвижность с заведомо известным образцом К. 0,60 при хроматографии втонком слое окиси алюминия в системе метанол-аммиак-диметилформамид 2:2:1 и на силикагеле . ( хы 4 оАл марки .о"о-" )0,75 в системерастворителей бензол - диоксан -уксусная кислота 90:25:4.ПРВ У(БТ И 50 БРЕТЕЙИЛСпособ получения - =нитросо с та в н тел ьС3 ав в заслакторТ КаРаНОВа Техред Н СЕНИЯЙ Заказ 3 О Тираж Ф Изд. РЬ Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, 113035, Раушская наб., 4 Предприятие Патент, Москва, Г 59, Бережковская наб., 24 бензойной кислоты путем окисленияи =нитротолуола, отличающийся тем,что, с целью упрощения процесса,442183окисление осуществляют с использованием культуры лосо мь:.а-,у еи,в 1 А или культуры 44 калзб:а. мьАЖ м 77 А.