Способ получения n-3-(n-циклопентакарбонил-d-аланилтио)-2 d-метилпропаноил-l-пролина

. 1 Н САНИЕ ОБР Я АТЕНТУ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫ ТИПРИ ГКНТ СССР(57) Изобретени касается получения й-(йциклопентакарбонил-О-аланилтио)-2-О-метилпропаноил 1-1:пролина, обладающегопротивогипертоническим эффектом, что моИзобретение относится к способам получения М-(й-циклопентакарбонил-О-аланилтио)-2-0-метилпропаноил-:пролина нового биологически активного соединения, которое может быть использовано в медицине,Цель изобретения - получение нового производного в ряду пептидов, обладающего противогипертонической активностью, малотоксичного, более стойкого к гидролизу, имеющего более длительный срок хранения, не дающего нежелательных побочных явлений,Стадия 1. Приготовление й-циклопентакарбонил-О-аланина,О-Аланин (4,5 г) растворяют в 230 мл водного 1 н. раствора карбоната натрия при 1)5 С 07 О 207/16, С 07 К 5/06, А 61 К 37 жет быть использовано в медицине. Цель - создание нового активного и малотоксичного соединения указанного класса. Синтез ведут конденсацией И-циклопентакарбонил-аланина(полученного из производного циклопентакарбонила с О-аланином) с 3-меркапто-О-метилп ропионовой кислотой в присутствии дициклогексилкарбодиимида и й-окиси сукцинимида с последующей обработкой полученного продукта трет-бутиловым эфиром Е-пролина в присутствии дициклогексилкарбодиимида и далее раствором трифторуксусной кислоты в среде анизола (отщепление трет-бутильной защитной группы). Новое соединение по действию при дозе 40 мг длительнее, чем 100 мг каптоприла, менее токсично и более стойко к гидролизу при более длительном сроке хранения. 1 табл,перемешивании. К раствору по каплям добавляют 100 мл тетрагидрофурана, содер- О жащего 9 г циклопентакарбонилхлорида, О при 5 - 10 С и при этой температуре смесь (",) перемешивают 30 мин, затем перемешива- (Я ют при комнатной температуре 1,5 ч. После этого к реакционной смеси добавляют 2 н, р соляную кислоту, чтобы значение рН было, между 1 и 2. Реакционную смесь экстрагируют этилацетатом, органический слой и ромывают насыщенным раствором хлорида Сд натрия и сушат над сульфатом магния. Фильтрат выпаривают под вакуумом для получения сырого продукта. При перекристаллизации из смеси этилацетат - н-гексан получают 4,65 г й-циклопентакарбонил-О- аланина.Стадия 2. Приготовление 3-(К-циклопентакарбонил-О-аланилтио)-2-О-метилпропановой кислоты.й-Циклопентакарбонил-О-аланин (5,97 г) растворяют в осушенном тетрагидрофуране(100 мл), К раствору добавляют карбонилдиимидазол (5,84 г) при температуре между -20 и -15 С, смесь перемешивают при этой температуре в течение 1 ч. После этого добавляют 3-меркапто-О-метилпропановую кислоту (3,60 г) и смесь перемешивают при температуре между -15 и -10 С в течение 1 ч, затем при комнатной температуре еще 1 ч, Смесь выпаривают под вакуумом для удаления растворителя, К остатку добавляют 40 мл воды и к смеси добавляют 2 н. соляную кислоту, подкисляя ее до рй между 1 и 2. Смесь экстрагируют этилацетатом, органический слой промывают насыщенным раствором хлористого натрия (2 раза) и сушат над сульфатом магния, Филь- трат выпаривают под вакуумом для получения неочищенного соединения, При его перекристаллизации из смеси этилацетат - /н-гексан получают бесцветные призматические кристаллы указанного соединения,Стадия 3. Приготовление й-(й-циклопентакарбонил-О-аланилтио)-2 О-метилпропаноилпролина,3-(й-Циклопентакарбонил-О-аланилти о)-2-О-метилпропановую кислоту (1,51 г) растворяют в осушенном тетрагидрофуране (40 мл), К этому раствору добавляют 0,61 г тризтиламина и 0,65 г этилхлорформиата при -5 С и перемешивании, Спустя 5 мин добавляют раствор, содержащий 0,58 г Е- пролина и 0,61 г триэтиламина в 5 мл воды, и смесь перемешивают при 0 С в течение 1 ч, затем при комнатной температуре в течение 30 мин. Смесь выпаривают под вакуумом для удаления растворителя, После добавления к остатку воды к смеси добавляют 2 н, соляную кислоту, подкисляя ее до рН между 1 и 2. Реакционную смесь экстрагируют этилацетатом, органический слойпромывают насыщенным раствором хлористого натрия (2 раза) и сушат над сульфатом магния. Фильтрат концентрируют под вакуумом, для удаления этилацетата, а остаток разделяют хроматографически на силикагеле, используя смесь хлороформа и метанола в соотношении 100;1 - 100;2 в качестве элюанта. Собирают фракцИи, содержащие конечное соединение, и выпаривают под вакуумом, получая смолистый образец указанного соединения (0,3 г, 49 ), Чистоту и однородность полученного продукта определяют хроматографией на силикагеле,йц=.0,62 (хлороформ - метанол - уксусная кислота 2;1:0,003)Я =0,74 (н-бутанол - уксусная кислота - вода 4;1:1), а) =-47,2(С=1, метанол),Проведены биологические испытанияполученного предлагаемым способом К(й-циклопентакарбонил-О-ананилтио)-2-0-метилпропаноила 1-:пролина на крысах.Б таблице приведен средний процентингибирования индуцированного повышенного давления, вызванного введением соединения, полученного предлагаемымспособом, и каптоприла в количестве0,4 ммоль/кг.Из таблицы видно, что полученное предлагаемым способом соединение проявляетпротивогипертонический эффект, сопоставляемый с эффектом каптоприла при выбранном уровне дозировки. Однако укказанноесоединение более стабильно, чем каптоприл, как в биологических средах, так и вдругих условиях. Проведенные испытанияпч тго показывают стабильность этого соединения в условйях разлагающих сред тканевых и плазменных гомогенатов.Эксперименты показали, что каптоприл быстро разлагается до своего дисульфида идругих метаболитов, которые неактивны какингибиторыПо прошествии 60 мин инкубирования с плазмой крыс, человека, обезьян исобак количество 353 каптоприла неизменно - 0; 7, 10, 25% соответственно; основным продуктом был дисульфид.Надосадочная фракция 9000 хд гомогената печени, почек и кишечника крыс почтиполностью переводит каптоприл в егодисульфид и другие продукты в течение120 мин. Период полураспада каптоприла в водных растворах 30 мин, Приэтом й- И-циклопентакарбонил-О-аланилтио) 2-О-метилпропаноил -Е-пролин показывает неснижающуюся эффективностьна протяжении 90 - 180 мин после оральноговведения,Каптоприл достигает пиковой эффективности к 90 мин, затем она падает. Попрошествии 180 мин й- (й-циклопента, карбонил-О-аланилтио)-2-О-метиф:пролин - более эффективный ингибитор без каких-либо признаков ослабления его реакции,Сравнительные исследования на здоровых людях показали, что действие 40 мг55 (0,096 ммоль) й-(й-циклогексилкарбонилО-аланилтио)2-О-метилпропаноиол 1-Е-пролина продолжается дольше, чем действие100 мг (0,46 ммоль) каптоприла.1 бб 0578 Таким образом, полученный предлагаемым способом й-(й-циклопентакэрбон ил-О-алан илтио)-2-О-метили ропа ноил 1- :пропин - соединение малотоксичное, более стойкое к гидролизу, чем каптоприл, 5 имеет более длительный срок хранения и более прост в обращени.ф о р мул э изобретенияСпособ получения й-(Й-циклопентакарбонил-О-аланилтио)-2-О-метилпропано ил.-пролина формулыс-те-сн-с 0- я-св, - сн- с 0-П0 СБз СБз15 отличающийся тем,что М-циклопеитакарбонил-О-аланин формулы карбодиимида и й-оксисукцинимида с 3- меркапто-О-метилпропионовой кислотой и полученный продукт конденсации ЗМ- циклопентакарбонил-О-аланилтио)-2-О-метилпропановой кислоты С-ЗН- Ж - СО-. СН -СН-СООН1гО СН, СН,вводят во вразимодействие с трет-бутиловым зфиром 1:пролина в присуствии дициклогексилкарбодиимида и от полученного продукта И- (3-(й-циклопентакарбонил-О- алэнилтио)-2-О-метилпропаноил-:пролин л-мн - сн-со- сн - сн - со - я10 з сиз СООсд тРелт ВС-;ОН- СНСООН1Ш 20 Время, минХ 1 1 Соединение 0 20 30 60 90 120 180 Б-(циклопетакарбо, нил-аланилтио) -2-0 метилпропаноил -Ь-пролинКаптоприл 42 3 г 35 42 56 58 42 48 12 12 2146 15 23,Составитель С.ВолковаТехред М. Моргентал Корректор Э.Лончакова Редактор А.Огар Заказ 1859 Тираж 250 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбивзт "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 101 путем обработки раствором трифторуксусполученный взаимодействием производно- ной кислоты в анизоле отщепляют трет-буго циклопентакарбонила с О-аланином, кон- тильную защитную группу.денсируют в присутствии дициклогексил 25