Способ количественного определения проросших спор бактерий

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН АВТОРСКОМУ С 2. Способ по п.1, о ю щ и й с я тем, что д ную активность определя метрическим методом с и ем резазурина.или снект рическим с использовани золия,л гидрогеназ т флуорипользовани офотометем соли тет ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(54) (57) . СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГООПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОРОСШИХ СПОР БАКТЕРИЙпутем активации суспензин спор с по.С 12 И 1/00, С 12 Ц, 1/00следующим инкубированием в присутствии инициатора прорастания и определением состояния спор до и после инициации, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения точности способа при исследовании суспензий спор Вас 11 пв йЬигЫц 1 епввсодержащих светорассеивающие примеси, до и после инициации определяютдегидрогеназную активность спор иколичество проросших спор определяют по разности величин ферментативных активностей.П р им е р 2. 4,0 мл суспензииэнтобактерлна (препарат У 2) на физиологическом растворе (0,57 НаС 1),содержащей 44 мг сухого препаратав мл, прогревают при 75 С в течение5 мин, затем разливают в .две пробирки по 1,6 мл прогретой суспензии. В первую пробирку добавляют0,4 мл дистиллированной воды, а во О вторую - 0,2 мл водного растворааденозина (0,01 М) и 0,2 мл водногораствора Г-аланина (0,05 М). Вторуюпробирку инкубируют при 30 С в течение 30 мин, Затем в обе пробирки добавляют по 0,5 мл раствора метилтиаэолилтетраэолия бромистого, инкубируют при 42 С в течение 15 мин,добавляют в них по 2 мл 963-ногоэтанола, встряхивают смесь, фильтруют ее через бумажный фильтр, промывают фильтр 2 мл 967.-ного этанолаи измеряют оптическую плотность объе/диненных спиртовых экстрактов при .560 и 700 нм. Получают величины 25 оптической плотности на этих длинахволн 0,13 и 0,10 соответственно дляпервой пробирки и 0,59 и 0,13 длявторой. Прирост величины оптической плотности при инициации равен 30 (О 59 03) (О 3-0,10) = 0,43 ипо калибровочному графику находятконцентрацию живых прорастающихспоровых клеток в первоначальнойсуспензии препарата, равную3,610 кл/мл, а затем рассчитывают835содержание клеток в сухом препара 1 е: 3,6 10 кл.: 0,044 г =8,1 1 О кл./г.Время проведения анализа - 0,51 ч. Сравнительные данные по точности 40определения приведены в таблице. 1 1194873Изобретение относится к микробиологической промышленности и можетбыть использовано для контролябактпрепаратов, в частности энтобактерина.Цель изобретения - повышение точности способа при исследовании суспензий спор Вас 111 из 1 пшпуепз 1 з,содержащих светорассеивающие при.меси.П р и м е р 1. 4 мл суспенэииэнтобактерина (препарат У 1) в1/15 М фосфатном буфере рН=6,5,содержащей 12 мг сухого препарата вомл, прогревают при 75 С в течение5 мин (активация прорастания) затем разливают в 2 пробирки по 1,5 млпрогретой суспензии. В первую пробирку добавляют 0,4 мл дистиллированной воды, а во вторую - по2 мл водных растворов аденозина0,0 М) и Р-аланина (0,05 М). Вторую пробирку инкубирают при 30 Св течение 30 мин (инициация прора-стания). Затем в обе пробирки добавляют по 0,1 мл раствора резазурина (0,6 М), инкубируют при 45 Св течение 10 мин и определяют величины фпуоресценции проб при 580 нмна спектрофлуориметре. Величинафлуоресценции первой пробы равна9 единицам, а второй - 95 единицам, прирост флуоресценции - 86 единиц. По калибровочному графику находят концентрацию живых прорастаю- .щих споровых клеток в первоначальной суспензии препарата, .равную7,6 10 кл/мл, а затем рассчитывачют содержание клеток в сухом препарате: 7,61 О кл,: 0,0126,3 10 кл/г.1194873 1 очность определения количества прорастающих спор бактерий двумя способами, предлагаемым и прототипомпрепаратаэнтобактерина 7 6,9 230 5,110 3,5 П р и м е ч а н и е : стандартное отклонение вычислялось из данных 1 О измерений каждого препарата обоими способами. Составитель Г.СмирноваТехред М.Гергель Корректор М.Самборская Редактор Ю.Середа Заказ 7380/29 Тираж 524 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Стандартное отклонение при определении предлагаемым способом, флуориметрический вариант, 7 Стандартноеотклонение, приопределении способом-прототипом