Способ получения ариламидов -защищенных аминокислот и пептидов

(51) С 07 С 103/50) С СУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТИ ИЗОБРЕТЕИДЕТ ЕЛЬСТВУ)В Аг - 4-метилк 4-фенила путем взаимодейст щей Формулы А-В-ОН, юл. В 40 ме ологической и диН СССР7(088.8)Ьй 9 4237047,опублик. 1978,ф. Необычное наирав.реацилирования внгидридов карбононых кислот. - МО.,1558 (прототип).УЧЕНИЯ АРИЛАИИДОВИСЛОТ И ПЕПТИДОВи В - значения, укаэанные выше,ламином формулы с где Аг - значения, указ в среде алротонного орг растворителя в присутст го амина и конденсирующ о т л и ч а ю щ и й с я целью упрощения процесс ве конденсирующего реаг эуют диалкилпирокарбона мулы- линейный содераащий нные выше; нического ии третичного реагента, тем, что, св качестнта испольобщей ФорА-В-ЯН-Аг,бенэилоксикарбонил;трет-бутилоксикарбонилФенилаланил, аланил, плил, глицил-пролил) е Уили разветвленный 3-4 атома углерода. где В алкил,АВТОРСКОМУ.С(71,) Институт бицинской химии АМ(56) 1. Патент Скл, 260-112,5 В,2. Позднев В.ление реакции перяду смешанных авых и алкилуголь1978, 14, 9 7, сЦель изобретения - упрощение процесса получения ариламидов М- защищенных аминокислот и пептидов.Постанленная цель достигается способом получения ариламидон М -защиК щенных аминокислот и пептидов общей формулы А-В-МН-Аг,60 ензилоксикарбонил;трет-бутилоксикарбонил;фенилаланил, аланил, пролил, глицил-пролил;4-метилкумарил, 2-нафтил,4-фенилазафенил; где А М ВИзобретение относится к усовершенствованному способу получения ариламидон М-защищенных аминокислот ипептидов, которые могут быть использованы и качестве хромофорных субстратон Ферментов и полупродуктовдля получения хромофорных субстратон Ферментов,Известен способ получения ариламидов Ф-защищенных аминокислот ипептидов, основанный на взаимодей,ствии М-защищенной аминокислотыили пептида с ариламином н присутствии дициклогексилкарбодиимида (1 .Однако дициклогексилкарбодиимидявляется сильным аллергеном и об 15ладает нысокой токсичностью, чтосущественно затрудняет его йспользование.Наиболее близким к предлагаемомупо технической сущности и достигаемому результату является способполучения ариламидов защищенныхаминокислот, согласно которому конденсацию защищенной аминокнслоты сариламином осуществляют в среде 25органического растворителя в присутствии третичного амина и смешанногоангидрида нитрозамещенной бензойнойкислоты и трет-бутилугольной.кислоты в качестве конденсирующего аген- З 0та. Этот процесс состоит из двух стадий. На первой стадии проводят активацию Мф-защищенной аминокислоты вышеуказанным смешанным ангидридом вприсутствии третичного амина. Приэтом в качестве побочного продуктаобразуется соль нитрозамещенной бенэойной кислоты и третичного амина,которая выпадает н осадок и которуюнеобходимо удалять фильтрованием.На второй стадии после удаления 40осадка добавляют к реакционной смеси ариламин, перемешивают до занершения реакции и выделяют целевой продукт,.2) .Недостатком известного способа 45является его двухстадийность. Крометого, используемые в качестве конденсирующих реагентов смешанные ангидриды сравнительно малоустойчивыи гидролиэуются влагой воздуха. 50 путем взаимодействия соединения общей формулыА-В-ОН,где А и В - значения указанные выше; с ариламином формулы НМ-Аг н среде апротонного органического растворителя в присутствии третичного амина и канденсирующего агента, в качестве конденсирующего реагента используют диалкилпирокарбонат общей формулы(В-ОСО) О2где й - линейный или разветвленный алкил, содержащий 3-4 атома углерода.Осуществление предлагаемого способа позволяет проводить процесс получения ариламидов М-защищенных аминокислдт и пептидов в одну стадию.П р и м е р 1. 4-Метилкумариламид-М-бензилоксикарбонил-Ь-фенилала" нина.К раствору 0,6 г М-бенэилоксикарбонил-Ь-фенилаланина, 0,2 мл пири- дина и 0,5 мл ди-трет-бутилпирокарбоната в 5 мл этилацетата добавляют 0,5 г 4-метил-аминокумарина и смесь перемешивают 5 ч, добавляют 10 мл диоксана и оставляют на 12 ч. Осадок отфильтровываю, промывают зтилацетатом, сушат. Получают первую порцию продукта. Маточник разбавляют этилацетатом, промывают водой, 1 М Н 2 ЯО 4,водой, 1 М КСО 3,водой. Выпавший в осадок продукт отфильтровывают, промывают эфиром, сушат и объединяют с первой порцией продукта. Сухой продукт растворяют при нагревании н 25 мл диоксана, фильтруют, источник упаривают н вакууме до объема 5-б мл, разбавляют 10 мл эфира, выпавший осадок отфильтровывают, промывают, сушат. Выхос 0,7 г 76 Ъ); т.пл. 204-206 С, Ы р +57 р 7 (С:1, ДМФА);П р и м е р 2. 4-Метилкумариламид.7-М-бензилоксикарбонил-Ь-аланина.К раствору 0,45 г М-бензилоксикарбонил-Ь-аланина, 0,14 мл пиридина и 0,5 мл ди-трет-бутилпирокарбоната н 3 мл ТГФ добавляют 0,4 г 4-метил-аминокумарина, Смесь перемешивают 20 ч при 18 фС. Осадок отфильтровывают, промывают этилацетатом, эфиром, высушивают и получают 0,50 г (65) целевого продукта с т. пл. 227-228 С;о 110 = -32, б (С" 1, ДМФА) .П р и м е р 3. 4-Метилкумариламид-М-бензнлоксикарбонилглицил- Ь-пролина.К раствору 260 мг М-бензилоксикарбонилглицил-Ь-пролина, 200 мг 4- метил"аминокумарина, 0,05 мл пиридина в 2 мл ТГФ прибавляют 0,3 мл ди-трет-бутилпирокарбоната, переме1051062 Составитель О. ГалкинТехред А,Ач Коррек тор А. ЗимокосовЬ Редактор С. КвяткЬвская Тираж 418. Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Заказ 8594/24 филиал ППП Патентф 1 г. ужгород, ул. Проектная, 4 шивают 20 ч, разбавляют этилацетатом до объема 20 мл, промывают водой, 1 М НЯО 4 водой 1 М КСО, водой, сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают в вакууме, Остаток кристаллизуют из бензола, отфильтро вывают, промывают эфиром и сушат в вакууме.Получают 335 мг (84,5) целевого продукта с т.пл. 140 С (с разложением) и с= 120,7 С(С:1; ДМФА) .П р и м е р 4. 2-Нафтиламид-М- бензилоксикарбонил-Ь-фенилаланина.а) Раствор 0,30 г И-бензилоксикарбонил-Ь-фенилаланина, 0,05 мл пиридина и 0,27 мл ди-трет-бутилпирокарбоната в 3 мл бензола перемешивают 40 мин и добавляют раствор этилацет ата. Реакционную смесь перемешивают б ч, прибавляют 10 мл петролейного эфира, выпавший осадок отфильтровывают, промывают эфиром и сушат в вакууме. Получают 0,26 г (61) целевого продукта с т.пл. 180-181 ФС;М + + 45 5 (С 1 ( ДМФА)б) Раствор 0,60 г Н"бенэилоксикарбонил-Ь-фенилаланина.0,2 мл Ы-метилморфолина и 0,4 мл ди-изопропилпирокарбоната в 3 мл бензола и 1,5 мл ТГФ перемешиивают 1 ч,добавляют 0,3 г кристаллического 2-нафтиламина, перемешивают 3 ч. Затем разбавляют эфиром, образовавшийся осадок отфильтровывают, промы-. вают эфиром и сушат в вакууме.Получают 0,55 г (64,8) целевого соединения с т.пл, 175-176 фС.П р и м е р 5. 2-Нафтиламид-Н- бенэилоксикарбонил-Ь-аланина.Аналогично примеру 48 получают 2- нафтиламид"И-бензилоксикарбонил-Ьаланина с выходом 64,6, т.пл. 185187 С;026,5 (С=1) ДМФА).П р и М е р б. 4-ФенилазоанилидН-трет-бутилоксикарбонил-Ь-пролина.Раствор 1,0 г И-трет-бутилокси карбонил-Ь-пролина, 0,1 мл пиридина,1,0 г 4-фенилазоанилина и 1,3 мл дитрет-бутилпирокарбоната в 10 мл бензола перемешивают 10 ч. Смесь разбавляют эфирой, образовавшийся оса док отфильтровывают, промывают эфиром и сушат.Получают 1,5 г (82) 4-фенилазо- анилида-И-трет-бутилоксикарбонил-Ьпролина с т.пл. 205-206 САГЫЗ в -- -80(С=1; ДМФА)П р.и м е р 7. 4-ФенилазоанилидБ-трет-бутилоксикарбонил-Ь-аланина.Раствор 1,0 г И-трет-бутилокси-карбонил-Ь-аланина, 0,5 мл Н-метилморфолииа и 1,2 мл втор-бутилпирокарбоната в 5 мл бензола.перемешивают 30 мин и добавляют раствор 1,0 г4-фенилаэоанилина в 5 мл ТГФ. Реакционную смесь перемешивают 5 ч, разбавляют этилацетатом до объема 30 мл,промывают водой, 5-ным растворомлимонной кислоты, водой, 1 М.К 2 СО 3,водой, сушат Над безводным сульфатомнатрия и упаривают в вакууме, Остаток перекристаллизовывают из эфира. ЗО Получают 1,3 г (66) 4-фенилазо- анилида-И-трет-бутилоксикарбонил-Ьаланина с т,пл. 172-173 С;о 3= -79 2(С=1; диоксан).Таким образом, предлагаемый спо соб получения ариламидов И-защищенных аминокислот и пептидов представляет собой простбй в технологическом отношении процесс, осуществляемый в одну стадию, который позволяет 40 выделять целевые продукты с высокой степенью чистоты без использования специальных методов очистки.