Пентафторфениловый эфир п-нитробензойной кислоты в качестве реагента для блокирования непрореагировавших аминогрупп в твердофазном синтезе пептидов

СОЮЗ СОВЕТСНИХЩРклвфеОМ А С 10 КОМИТЕТ СССРНИЙ И ОТН АРСТВЕННЫЛАМ ИЭОБ К ТОРСНОМУ СВЮЕТЕЛЬС(У) Пентробензойн ФТОРФЕНИЛОВ 3 Й ЭФИР РОБЕНЗОЙНО 3 КИСЛОТ ЕСТВЕ РЕАГЕНТА БЛОКИРОВАНИЯ РЕАГИРОВАВШИХ АИИНО РДОФАЗНОИ СИНТЕЗЕ фторфениловыи эФир ой кислоты формулы(71) Иосковский ордена.-ТрудовогоКрасного Знамени институт тонкойхимической технологииим. И.В.Ломоносова(56) 1. Химия полипептидов. Под ред.П.Катсояниса, И., "Иир", 1977. с. 406,2. МеггЕ 3 е 1 д И.В. ВоИ РЬавеРерййе ЬупЮев 3 в. 1, ТЬе ВупйЬев 3 воГ а Тейгарерй 3 де". ". 3, Ап. СЬев.ос. 8 ф 2149 1963,3. 343 е 3 ав 3 Т.; 83 гг С., 93 ввепЬасЬ Н,. "3-й 3 йгорЬФЬа 3 вацгеапЬудг 3 оа 3 в 83 о 3 с 3 егцпяв-геаяепв Ье дег Ро 3 урерйй вупйЬеве пасЬ,Иегг 313 еИ"Ап 33 еи. СЬев. ф. 782, 1969.4. ЪЮ 3 вввапп Н Ое 3 дег 33. цАЬйгеппцпд чоп ГеЬ 3 вв 3 цемеп 3 п дег АпЬуЬг 3 д бег 3:-Ьц 3 Горгор 3 опвацге" Аллеи..СЗев , 82, 937 1970.5. Желтухина Г.А., Сидорова И.В.филиппович .Е.И., Евстигнеев Р.П,Твердофазиый синтез пейтидных фрагментов р-цепи гемоглобина человека сиспользованием т 1-нитрофенилацетата.ЖОХ, Я 1171, 1978,.6. Желтухина Г.А., Сидорова И.В.филиппович Е.И.; Лагуткина В.И Евстигнеева Р.Пс, Синтез фрагментовф"цепи. гемоглобина человека. Х. Твердофазныйсинтез додекапвптида соответ",ствующего последовательности 89-100;ЖОХ, 4 Я, 1636, 3978. РУПП ПТИ.дофазном ованияв твер-реагента для блокировавщих аминогрупсинтеве пептидов,ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТ2Поставленная цель достигается пентафторфениловым эфиром и -нитробензойной кислоты формулы 1 1006430Изобретение относится к новому хи,.мическому соединению, а именно к пентафторфениловому эфиру о -нитробензойной кислоты формулы орс-о1 Синтез пентафторфенилового эфира П-нитробензойной кислоты осуществляют путем взаимодействия и-нитробензоилхлорида с пентафторфенолом.Блокирование непрореагировавших аминогрупп осуществляют обработкой пептидилполимера 3-5-кратным избытком пентафторфенилового эфира и-нитробензойной кислоты в диметилформами ба но щ де.П р и м е р 1. Пентафторфениловыйэфир п-нитробензойной кислоты.К раствору 2,85 г (15,5 ммоль)пентафторфенола в 20 мл 3 н. едк го2 З натра приб.-.вляют при перемешивании3,34 г (18,0 ммоль) и -нитробензоилхлорида. Выпавший осадок отделяют,промывают небольшим количеством воды и сушатзр Получают 3,2 г (62,0) пентафторфенилового эфира и -нитробенэойнойкислоты в виде твердого вещества,т.пл. 122 оС, К=0,9 (Силуфол, хлороформ:метанол 2;1), 8=0,47 (Силуфол,хлароформ:гексан 2:1),Элементный анализ:Найдено, . С 46,6;1 3,Э 6С,цН, 5 04Вычислено, /: С 14680, Н 1,М 4,20,П р и м е р 2. К 52,6 мг глицилполимера Ну(Р)(Р - хлорметилированный сополимер стирола с 2 Ф диви 45нилбензола с содержанием хлора 4 5)ос содержанием свободных аминогрупп0,46 ммоль/г аминоацилполимера(1007.) прибавляют 2,6-кратный избыток пентафторфенилового эфира и-нитробензойной кислоты (21,0мг,0,06 ммоль) в 0,5 мл диметилформамида и йеремешиввют 2 ч при 20"С. Количество остаточных аминогрупп после обработки составляет 2,34 отисходного количества свободных амиээ ногрупп, содержащихся в глицилполимере. о Н 1,23,20 ие но- непроердофаз ющего непро- птидилу выдеретения - получе а для блокировки х аминогрупп в т пептидов, позвол пень блокировани х аминогрупп в и простить процеду ого продукта. Цель иэо вого реаген реагировавш ном синтезе повысить ст реагировавш полимере и ления конечПрилполим которое может быть использовано в качестве реагента для блокирования непрореагировавших аминогрупп в твердоФазном синтезе пептидовИзвестен твердофазный метод синтеза пептидов, который применяется для, получения биологически активных пептидов.Одним из недостатков, этого спосополучения пептидов является неполе протекание реакции образования пептидной связи, вследствие чего образуются пептиды с ошибочной последовательностью, которые трудно отде" лить от конечного целевого продукта. Для того, чтобы снизить вероятность образования ошибочных последовательностей в пептидной цепи, все непрореагировавшие аминогруппы в полимере блокируются обработкой различными ацилирующими реагентами 1.1 1. В качестве блокирующих реагентов используют уксусный ангидрид, 3-нитрофталевый ангидрид, сульфопропионо.вый ангидрид 2, 3 3 и 4 1Общим недостатком указанных блокирующих реагентов является недостаточная эффективность блокирования непрореагировавших аминогрупп и опас ность протекания побочных реакций.Известно использование в качест.ве реагента для блокирования непрореаги ровавших аминогрупп в твердофазном синтезе пептидов О "нитрофенилового эфира уксусной, кислоты5 1..Недостатком этого реагента является недостаточно высокая степень блокирования непрореагировавших ами ногрупп. е р 3. К 41,1 мг трипепти Вос-Ча 1-1.ецуОР (РСоставитель С.БеляковаРедактор Н,Гунько Техред Е.Харитончик Корректор Г,Огар г4Заказ 2042/38 Тираж 416 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий13035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 филиал ППП "Патент", г Ужгород, ул, Проектная, 4 3 100643 тефлон с радиационно привитым полистиролом) со степенью посадки стартовой аминокислоты 0,31 ммоль/г аминоацилполимера и содержанием оста" точных аминогрупп 3,84 прибавляют 2,6-кратный избыток пентафторфенилового эфира и -нитробензойной кислоты (11,1 мг, 0,03 моль) в 0,2 мл диметилформамида и перемешивают 1 ч при 20 С. Содержание остаточных свобод Ооных аминогрупп определяют с помощью пикриновой кислоты и составляет 1,5 й, считая на стартовую аминокислоту, присоединенную к полимеру.П р и м е р 3. Бромгидрат .-й-фор"15 миллизил-.-валиллейцил-глицина.Твердофазный синтез тетрапептидилполимера Вос.уз(Гопд)-Ча 1-1 еи-С 1 у(Р)проводят в стандартных условиях 6 1.20Цикл синтеза состоит из следующих стадий: кислотное деблокирование с.-аминогрупп, нейтрализация трифторацетата по аминогруппе, конденсация с защищенной аминокислотой, определе ние количества остаточных аминогрупп с пикриновой кислотой, блокирование непрореагировавших аминогрупп 5-кратным избытком пентафторфенилового эфира И -нитробензойной кислоты в диметил-зв формамиде.Для синтеза тетрапептидилполимера используют тефлон с радиационно при-, витым полистиролом, Присоединение стартовой аминокислоты Восу к хлорметилированному полимерному носителю осуществляют нагреванием 1,9 г полимера с 0,46 г цезиевой соли Вос 61 у в 5 мл диметилформамида до ООоС е течение 17 ч Синтез начинают с 2,0 г Восу содержащего 0,31 чиода 8 ос-чу (1 г Вос-чуДР и последовательно присоединяют к не 0 4му 1,84 ммоль Вос-ец в присутствии 1,84 ммоль дициклогексилкарбодиимида и 1,84 ммоль 1-оксибензотриаэола в 4 мл диметилформамида при -15 С 7 ч (содержание остаточных аминогрупп в расчете на стартовую аминокислоту составляет 1,9 Ф), 1,84 ммоль симметричного ангидрида, полученного иэ Вос-Ча 1, в 4 мл диметилформамида в течение 14 ч при 20 С,(содержание остаточных аминогрупп 3,8), 1,84 ммоль Вос-.уэ(Ропп) в присутствии 1,84 ммоль дициклогексилкарбодиимида и 1,84 ммоль 1-оксибенэотриазола в 4 мл диметил" формамида при -15 С в течение 18 ч. Затем 350 мг тетрапептидилполимера, содержащего 0,09 ммоль тетрапептида, суспендируют в 3 мл трифторуксусной кислоты в присутствии 0,3 мл анизола и пропускают через суспензию ток сухого бромистого водорода в течение 1 ч при 20 С, Смолу отделяют фильтрованием, промывают трифторуксусной кислотой, фильтрат упаривают в ва-" кууме, остаток растирают с сухим эфиром и хроматографируют на колонке с сефадексом .Нв метаноле, Фракции, содержащие целевой продукт, объеди" няют, упаривают в вакууме, остаток растирают с ацетоном.Выход 25,5 мг (54,23 в расчете на стартовую аминокислоту присоеФ диненную к полимеру), т,пл. 208-210 С, Щ=-29,0 (С=1; уксусная кислота), 1=0,63 (хроматография на бумаге марки Б, система н- бутанол : уксусная кислота:вода 4:1:5), 8=0,79 (электрофорез на бумаге марки Б, буфер 2 М уксусная кислота: 1,5 М муравьи" ная кислота 1:1, рН 2, 350 В, 2 ч). Аминокислотный анализ: 61 у 0,92 (1,0);