Способ выявления солей кальция в хряще при электронно микроскопическом исследовании

ится орфологии, и ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИИ(56) Теггас 1 о 1 ЗсЬюглупя апй йгупе ой Ьяцез Гог е 1 есггоп ппспе апй ИесаЬо 1, Кея.,р.1021-1028.Вегпагй С.У. Ргоп шсгоясорхс зпсгашешЬгапопя оЛ. Апай., 1969,(54) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ СОЛЕЙ КАЛЬЦИЯВ ХРЯЩЕ ПРИ ЭЛЕКТРОННО-МИКРОСКОПИЧЕСКОМ ИССЛЕДОВАНИИ(57) Изобретение отмедицины, а именно может быть использовано, в частно для приготовления препаратов для товой и электронной микроскопии из биологических объектовЦелью изобретения является выявление водорастворимых соединений кальция. Образцы эмбрионального кальцифицирующегося хряща человека фиксируют в 1-ЗХ-ном растворе четырехокиси осмия в смеси эфира этилового и ацетона абсолютного в объемном соотношении 2:1 при 3-5 С в течение 30-60 мин, затем производят дегидратацию в безводной смеси эфира и ацетона при последовательных соотношениях 2:1, 1:1, 1:2 соото. ветственно при 4 С. Следующим этапом дегидратации является троекратное погружение образцов каждый раз в свежие порции ацетона абсолютногоо по 30 мин в каждую при 4 С. Далее образцы заливают в эпоксидные смолы с применением абсолютного ацетона. Получаются сериальные ультратонкие . гистологические срезы.1 12869Изобретение относится к областимедицины, а именно к морфологии,и может быть использовано, в частности, для приготовления препаратов длясветовой и электронной микроскопиииз биологических объектов,Цель изобретения - выявление водорастворимых соединений кальция засчет фиксации раствором четырехокиси осмия в смеси органических растворителей и дегидратации в смесиэтих растворителей с изменяющимся соотношением ингредиентов.Способ осуществляют следующим образом.Осуществляют фиксацию в 1-Зономрастворе четырехокиси осмия в смесиэфира этилового и ацетона абсолютного в объемном соотношении 2; 1 в течение 30-60 мин при 3-5 С и произоводят дегидратацию в безводной смесиэфира и ацетона при последовательных соотношениях 2;1, 1:1, 1:2 соответственно, Затем в три смены, в течение 20-40 мин каждая, погружают образцы в заливочную среду, Четыреэтапа дегидратации осуществляют при3-5 С.П р и м е р 1. Обработке подвергают образцы эмбрионального кальцифицирующегося хряща человека размерами 1 х 1 х 1 мм, Фиксацию образцов проводят в 27-ном растворе четырехокиси осмия в смеси эфира этилового иацетона абсолютного в объемном соотоношении 2:1 при 4 С в течение 60 мин.Затем образцы последовательно переносят в ряд дегидрирующих жидкос"отей, имеющих температуру 4 С. Перваяиз них представляет собой смесь эфира этилового и ацетона абсолютногов объемном соотношении 2: 1, В нейобразцы находятся 1 ч. Затем переносят их в смесь эфира этилового иацетона абсолютного в объемном соотношении 1; 1 также на 1 ч. Третья жидкость представляет собой смесь эфира этилового и ацетона абсолютногов объемном соотношении 1;2. В ней50образцы находятся 1 ч.Следующим этапом дегидратации яв"ляется троекратное погружение образцов каждый раз в свежие порции ацетона абсолютного по 30 мин в каждуюо 55при 4 С. 31 2Далее образцы заливают в эпоксидные смолы с применением абсолютного ацетона по известным методикам.В результате такой обработки получают сериальные ультратонкие гистологические срезы. Полностью сохраняется и четко выявляется структура из изучаемой ткани как на уровне свето" вой, так и электронной микроскопии.П р и м е р 2, Обрабатывают образцы эмбрионального кальцифицирующегося хряща человека размерами 1 х 1 х х 1 мм. фиксацию осуществляют в 1 Х-ном растворе четырехокиси осмия в смеси эфира этилового и ацетона абсолютного при их объемном соотношении 2:1 в течение 30 мин. Температура фиксатора 3 С.Далее проводят дегидратацию в трех смесях эфира этилового и ацетона абсолютного с различными их объо емными соотношениями при 3 С по 30 мин в каждой. 1 смесь - эфир этиловый и ацетон абсолютный в соотношении 2:1, 2 смесь " эфир этиловый и ацетон абсолютный в соотношении 1:1, 3 смесь - эфир этиловый и ацетон абсолютный в соотношении 1:2.Продолжают дегидратацию в трехо сменах ацетона абсолютного при 3 С по 20 мин в каждой.Затем заливают в эпоксидные смолы.В результате получают ультратонкиегистологические срезы.Формула и з о б р е т е н и яСпособ выявления солей кальцияв хряще при электронно-микроскопическом исследовании, путем фиксации в1-З -ном растворе четырехокиси осмияопри температуре 3-5 С с последующейдегидратацией, заключением в смолыи определением кристаллов кальцияна препарате, о т л и ч а ю щ и й -с я тем, что, с целью выявления водорастворимых соединений кальция,фиксацию проводят в течение 30-60 минпри этом используют четырехокисьосмия на смеси эфира и ацетона приих соотношении 2:1, а дегидратациюведут в смеси эфира и ацетона припоследовательных соотношениях 2:1,1;1, 1:2 соответственно, ВНИИПИ Заказ 7704/41 Тираж 776 Подпис ноеПроизв,-потигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4