Способ получения пептидов или их солей

(11) Союз Сбеетсннк Соцналнстнчеснни Республнк(2 л.7 С 103/ 1 К 37/ 4.127 осударствеииый комит СССР по делам изобретеиии и открытий(72) Авторы изобретения ыди, Винце Варрф Нафради Иностранное предприятие Рихтер Гедеон Ведьесети Дьяр РТ(71) Заявите ИДОВ ИЛИ ИХ СОЛЕЙ способам соединеой актив примене оединенигде А имеет Х - пент Фторфеноксиг Исходные формулыначения; т езе пепуют разнапримерКарбо 10 етодовпозволя- бладающие з нов сными е принири необхоти, груп- гидролиеского гидуппу защией бензиом или чения пе РЬд - ИНбутилокси 2-(Ь,П) -оокси)про рретоВ - метио 2-аминодекано или их сол что тетрапепт Н - Тгр -где В имеет уя в томлы- ВНния, по 1) 11 ополннтельний к2) Заявлено 23.12.773) Приоритет31) ВЗ Опубликовано 25,05 Ин остра штван Шен, Лайош Кишфал Ласло Варга и Йо54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ П Изобретение относится кполучения пептидов - новыхний, обладающих биологическностью, которые могут найтиние в медицине.В пептидной химии в синттидных цепей широко использличныеметоды конденсации,метод активированных эфировдиимидный и т,п, 11.Использование известных мконденсации пептидных цепейет получить новые пептиды, обиологической активностью,Цель изобретения - синтепептидов, обладающих интеремакологичесхими свойствами,Предлагаемый способ полугидов общей формулыА - Тгр - В - Азргде А - 2- (1, О) - (третбониламиноокси)ацетил,-бутилоксикарбониламиннил; ил, лейцил, норлейцил,л,й, заключаетсд общей форму- Азр - РЬЧазанные значе двергают взаимодействию с сем общей формулыА - Хуказанные захлорфенокси- илируппа.тетрапептидамиды о Н - Тгр - В - Аэр - Р)тп - 1 Н где В имеет указанные значения, по чают известным способом частичной конденсации или постепенным удлине нием цепи азидным методом, методом смешанных ангидридов, карбодиимидным методом, методом активированны эфиров и т.п.функциональные группы, н мающие участия в реакции, п димости защищают, в частнос пами, отделяемыми с помощью за, ацидолиза или каталитич рирования. Карбоксильную гр щают, например, этерификаци ловым спиртом, трет-бутанол п-хлорбенэиловым спиртом. Для эащи ты аминоокси- и аминогрупп испол зуюг Формильную, тозильную, тритил ную, трифторацетильную, о-нитросул Фенильную, фталильную, п-хлоркарбо бензоксигруппу, однако предпочтите(с 1,0, н диоксане).Найдено, : С 55,56; Н 5,96;Г 20,89С 2 Н 280 л ууГрВычислено, : С 55)63 у Н 6,22 уГ 20,95,2. 2-Ь-(трет-Бутилоксикарбониламино)деканоксил"Ь-аспарагил- ф -в (трет-бутиэфир) -Р-фенилглицинамид.0,96 г (3,0 ммоль)Н.Абр-ОВи-Р-РЬД-ЙН 2(пример 9.2) и 1, 36 г (3, О ммоль)ВОС-(.-Аде-ОРГР растворяют в 10 млдиметилформамида, к раствору добавляют 0,42 мл (3,0 ммоль) диэтиламина,Реакцу(онную смесь оставляют на ночь,затем упаринают и к остатку добавляют эфир. Суспензию фильтруют и осадок промывают эфиром. Получают 1,53 г,раствора уксусной кислоты в солянойкислоте, Спустя 1 ч реакционную смесьупаринают в вакууме. Твердый остатокобрабатынают эфиром и фильтруют. Получают 1,0 г (89,3 Ъ)Н-г.-Аде-Аэр-З-РИф-г"(ННСЯ т,пл. 177-178 Су В 0,35 ус(. -58,9 (с 1,0, в диметилформамиде) .4. Б-Ь-трет-Бутилоксикарбонил-Н-индформил-Ь-триптофил-Ь"аминодеканоил-Ь-аспарагил-Р-фенилглициламид.0,90 г (1,90 ммоль)Н-Ь-Аде-Анр-З-РИД;ИН 2 НСЯ и 0,94 гЗОС-Ггр Гог-ОРДЕРрастворяют в 15 мл диметилформамидаи добавляют 0,53 мл (3,8 ммоль)трулэтиламина. Яа следующий день реакционную смесь упаринают в вакууме,остаток обрабатывают водой и фильтруют, затем проиынают водой. и эфиром.Получают 1,26 г (92,0) ВОС-Тгр-Гог-(,- -Аде-Анр-Э-РЙ-НН 2,т.пл. 210 С (с разложейием) у Н 0,45; а 6и -50,5 о(с 1,0,в диметилформамиде) .Найдено, Ъ: С 62,52; Н, 6,81В 11,38.С 9 Н 2 Одеть (М, 748,89)Вычислено, : С 62,55; Н 7,00;И 11,22.5, Ь-Триптофил-Ь-аминодеканоил-Ь-аспарагил-Р-фенилглицинамид-гидрохлорид.1, 15 г (1,53 ммоль)ВОС-ТгрГог-Аде-Аьр-РИЯ-ЮН обРабатывают 10 мл4 н. раствора диоксана в солянойкислоте н присутствии 0,53 мл(7,5 ммоль) меркаптоэтанола, Через15 мин реакционную смесь упариваютв вакууме, остаток обрабатывают эфиром и отфильтровывают. Таким способом получают О, 98 г (9 8 ) Н-Тгр- -Аде-Абр-Э-РуД.НН 2 НСС Гидрохлорид плавится при 225 оС (с разложением) уй 7 0,45 у.о.,-47,6 (с 1,0, н диметилформаииде).б, Трет-Бутилоксикарбониламино"5 ,оксиацетил,-триптофил -2-Ь-аминодеканоил.-аспарагил-Р-фенилглицинамид.0,85 г (1,24 имоль)Н-Т.гр-Ь-Аде-Аьр-РИ-ИН 2 НСР и 0,55 г (1,24 глглоль)ЗОСу - ОРСР (пример 1,9) раст 10 воряют в 10 мл диметилфориамида нприсутствии 0,52 мл (3,72 ммоль)триэтиламина, На следующий день реакционную смесь упаривают в вакууме,остаток фильтруют, осадок промываютводой и зфирогл. Продукт (0,82 г)растворяют н небольшом количествесмеси 10 растворителей и обычным способом осуществляют хроматографию наколонке с силикагелем. Получают0,42 гВОС-ОДОЙ-Ру р-).-АдЕ-Абр-З-РОД-ИН,т,пл, 194-1980 С (с разложением);Вн 0,35; В 0,25; сс в - 35,9 о(с 1,0,в диметилформамиде).Найдено, : С б 0,54; Н 6,87;Б 12, 16.СфонуО(о И 1 (М 793,99)(4, О ииоль) ЭОС-Р-Аде-ОРГР растйоряют в 10 мл дииетилформамида в присутствии 0,56 мл (4,0 миоль) триэтил 45 амина. Через 30 мин реакционную смесьупаривают н вакууме и остаток фильтруют, Получают 1,95 г (88,8)ВОС-Аде-Мр-ОЬц-Р-РЯ-КН 2, который плавитсяпри 156-1570 С; В О, 85;сби -47,550 (с 1,0, в диметилформамиде) .Найдено, Ъ: С 63, 14; Н 8,60;М 9,56,Сз НОуМ 4 (М 590,74)Вычислено, : С 63,02 у Н 8,53 у55 Н 9 ф 493. 2-Р-Аминодеканоил-Ь-аспарагил-Р-фенилглицинамид-гидрохлорид.1,83 г (3, 08 глмоль)ЗОС-АДЕ-Авр-ОЪц)- -О-РИ-МН 2 обрабатывают 11 мл 4 н.раствора уксусной кислоты в солянойкислоте. Спустя 1 ч реакционнуюсмесь упаринают в вакууме, Остатокфильтруют. Получают 1,45 г (99)Н-О.Аде-Азр-Р-РЩ-ЯН 2 НСР который плавится при 150-153 оСу В 0,4 Ъу с 6 Р,465 (с 1,0, н диметилформамиде) .664560 21 22 Формула изобретения Составитель В, ВолковаРедактор О. Кузнецова Техпед М.Петко Корректор Е.ПаппЗаказ 2839/56 Тираж 512ПодписноеЦЯИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035 Москва Ж - 35 Ра кая наб. д, 4 5 сушиФилиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 4. И-трет-Бутилоксикарбонил-Ь-триптофил-Р-аминодеканоил-Ь-аспарагил-Р-фенилглицин-амид,К раствору 1,40 г (2,97 ммоль)Н-Р-Аэр-711 Д-ННКСЯ и 1,44 г(9, 0 ммоль) триэтиламина. Реакционную смесь выдерживают в течение ночи,упаривают в вакууме, остаток на холоде обрабатывают эфиром и суспензиюФильтруют. Осадок промывают эфиром, 10затем водой, содержащей небольшоеколичество уксусной кислоты и чистойводой, Получают 1, 72 (80,4)ЗОС-Тгр-Э-Аде-(.-Аьр-О-РИД-(Уг т.пл. 170 С(с 1,0, в диметилформамиде),Найдено, :. С 63,39; Н 7,21;И 11,58.Сев Н ОИ (М 720, 84)Вычислено, : С 63,31; Н 7,27;Н 11,66.5. Ь-Триптофил-Р-аминодеканоил"Ь-аспарагил-Р-фенилглицинамид-гидрохлорид,1,60 г (2,22 ммоль)ЗОС-Тгр-АИЕ-Авр.Р-РЬф-МН обрабатывают 15 мл 4 н,раствора диоксана в соляной кислотев присутствии 0,78 мл (11,1 ммоль)меркаптоэтанола. Через 10 мин реакционную смесь упаривают и остатокфильтруют. Этим способом получают 301,37 г (93,8)Н-Тгр-Р-Аде-Авр-р-РЬф-МЙ НСЗ который, .разлагаясь, плавится при 243 С 1 Н О 401 (сс ) -317 ф(2,1 ммоль)ВОС-ОДОц -ОРСР (пример 1.9) в 15 мл диметилформамидадобавляют 0,84 мп (6,0 ммоль) три"этиламина. На следующий день реакционную смесь упаривают в вакууме. Маслообразный остаток обрабатывают водой. Суспензию фильтруют и остаток промывают водой, содержащей небольшое количество уксусной кислоты. Продукт перекристаллиэовывают из 80-ного этанола, Получают 0,96 г (61, 2) ВОС-ОДОу-Тгр-Аде-Аэр-И-РЬД-МН т.пл. 200-203 С (с разложением) 1о Д с 7 В 0,451 (сс ) -26,90 (с 1,0, в диметилформами) .Найдено,С 60,50; Н 6,50;И 12,19.Со Н 55 О ю И 1 (М 793,90)Вычислено, : С 60,51; Н 6,98;И 12,35. Способ получения пептидов общейформулы 1-Тгр-В-Явр-РОД-МН 2где А - 2- (Ь, Р) - (трет" бутилоксикарбониламиноокси) ацетил, 2- (Ь, Р) -трет-бутилок сикарбониламиноокси) пропионил;В - метионил, лейцил, норлейцил,2-амянодеканоил,или их солей,о т л и ч а ю щ и й,с я тем, что тетрапептиды общей формулы Н-Тгр-В - Абр-РК 5 - ЯКгде В имеет укаэанные значения,подвергают взаимодействию с соединением общей формулыА - Хгде А имеет указанные значения;Х - пентахлорфенокси- или пентафторфеноксигруппа. Источники информации, принятые вовнимание при экспертизе 1. Шредер Э., Любке К. Пептиды, ч. 1, М., Мир, 196 7,с116,но применять карбобензокси- и третбутилоксикарбонильные группы. Атомазота в индольйой основе триптофаназащищают формильной группой.Соответствующим подбором защитныхгрупп осуществляют селективное или.одновременное отделение их известнымспособом (например, гидролизомацидолизом, каталитическим гидрированием) .Для присоединения защищенной (аминоокси)ацильной группы на аминномконце применяют пентагалогенфениловые эфиры, активный эфир вводят в реакцию с Н - Тгр - В - Азр - Рп 9 - ННримеющим карбоксильную группу на конце цепи. Для синтеза последнего используютЕ - Ь - РЬ 9 - ОН или Е - Р - РЬд - ОНгде Е - зацитная группа,и после отделения защитнОй группы Е постепенно наращивают тетрапептид защищенными (И-оксисукцинимид) аминокислотными эфирами или(пентагалогенфенил)аминокислотнымиэфирами. Защитную группу Е отделяютобработкой уксуснокислым бромистымводородом или каталитическим гидрогенолизом. Вместо защитной группы Еиспользуют ВОС-группу, которую отделяют обработкой в более слабо кислойсреде.Фрагмент, защицающий 5 -карбоксильную группу аспарагиновой кислоты,отделяют селективно на стадиях дипепхлороформ : метанол 95:5 (1) 1хлороформ : метанол 9:1 (2);хлороформ : н-гексан : уксусная кэтилацетат : (пиридин : уксуснаяэтилацетат : (пиридин : уксуснаяэтилацетат : (пиридин ,: уксуснаяэтилацетат : (пиридин : уксуснаяэтилацетат : (пиридин : уксуснаяэтилацетат : (пиридин : уксуснаяэтилацетат : (пиридин : уксуснаяДля обнаружения пятен на тонкослойных хроматограммах применяют раствор нингидрина. Пластины после обрызгивания просушивают в течение5 мин при 105 С. Затем хроматограммы помещают в камеру с газообразнымхлором и после аэрации обрабатываютраствором о-толуидин/КЮ.Для очистки веществ колоночнойхроматографией применяют силикагель(кизельгель 6)с зернами размером62-200 мкм,Пример 1.1. М-(Бензилоксикарбонил) -Р-фенилглицинамид.К раствору 24,0 г (84 ммоль)Е - Р - Рп 9 - ОН в 170 мл хлороформадобавляют 11,6 мл (84 ммоль) триэтил"амина. Затем к полученному растворуприкапывают 8,9 мл (84 ммоль) этилового эфира хлоругольной кислоты при"10 С и смесь перемешивают еще в течение 10 мин при -10 С, далее вводятгазообразный аммиак в течение 1 ч. тида, трипептида или тетрапептидаили вместе с группой, защищающей аминогруппу, ацидолизом или каталитическим гидрогенолизом.Конечные продукты очицают кристаллизацией, переосаждением, адсорбцион"5 ной хроматографией на силикагеле илиионообменной хроматографией на кар-,боксиметилцеллюлозе.Новые соединения получают в видесвободных кислот или солей в зависи 10 мости от метода их получения. Соли,образованные с помоцью органическихили неорганических кислот, могут бытьпревращены во внутренние соли известными методами или при очистке,В приведенных далее примерах используют следуюцие сокращения:091 у - Ф в (аминоокси)уксуснаякислота,ОА 1 а - сб -(аминоокси)пропионоваякислота,РСС - дициклогексилкарбодиимид,РСРОН - пентахлорфенол,РРРОН - пентафторфенол,ЯцОН - оксисукцийимид,РМР - диметилформамид,НМГА - гексаметилентриамид ортофосфорной кислоты.Тонкослойную хроматографию проводят на слоях силикагеля (торговоенаименование - кизельгель 9), приго 30 товленных по Италю. Для проявленияхроматограми применяют следующие смеси растворителей:1 ислота 8:1:1) (3);кислота: вода 20: б: 11) 9: 1 (4); кислота: вода= 20: б: 11) 8: 2 (5); кислота: вода 20: б: 11) 7: 3 (6); кислота: вода 20: б: 11) 3; 2 (7); кислота : вода 20:6:11) 1.1 (8); кислота : вода 20;6;11) 2:3 (9); кислота : вода 20:б:11) 85:15 (10); фСмесь оставляют на ночь и затем упаривают в вакууме, твердый остаток 45 обрабатывают водой. Продукт кристаллизуют из этанола. Получают 11,8 г(с 1,0, в диметилформамиде) .НайАено, Ъ: С 67,43; Н 5,70;Б 9,98.С ь НОИ (М 284,30)Вычислено, В." С 67 р 59 Н 5 уб 7И 9,85.2. Р-Фенилглицинамид-гидробромид.К раствору 20,0 г (70 ммоль)Е - Р - РЬд - ИН пример 1.1), В 40 млуксусной кислоты добавляют 70 мл 8 н,раствора бромистого.водорода в уксус ной кислоте. Спустя 1 ч реакционнуюсмесь разбавляют эфиром, гидробромидотфильтровывают. Соль, содержащуюбольшое избыточное количество бромистого водорода, перекристаллизовываютиз десятикратного количества этанола.664560 25 К раствору 5,0 г (14 ммоль) Н - Аэр - (ОВц) - Р - Рйу - ЫННСЙ (пример 1,4) и 4,85 г (14 ммоль) ВОС-Ме-ОЯц в 60 мл диметилформамида добавляют 1,96 мл (14 ммоль) триэтил- . амина. На следующий день суспензию упаривают в вакууме и остаток обрабатывают водой. Получают 7,83 г продукта, который осветляют, обрабатывая горячий раствор в 40 мл этанола при60 кипении 40 мл воды, Получают 6,57 г (84) хроматографически чистогоВОСАА 81-АЯЯ-О Вц)-1) Р)1 - ХН плавя- л цегося при 194-196 оС. После перекристаллизации из этанола т.пл. 197- 65 р Получают 14, 15 г (87, 5 )Н - Р - РЬ 9 - ИН НВг, т,пл. 263,0263,5 оСу Н 8 0,40 у сс ) -75,6 (с 1,0,в диметилформамиде) .Найдено, ; С 41,40; Н 4,82;И 12,01.СВНю ОЫ Вг(М 231,10)5Вычислено, : С 41,60; Н 4,77;И 12,13.3. И-(Бензилоксикарбонил)-Ь-аспарагил-о в (трет-бутилэфир)-Р-Фенилглицинамид.6,31 г Б - Азр - (ОВц) -ОЯц,3,89 г (16,8 ммоль) Н - Р - Рйд(15 ммоль) триэтиламина суспендируют в 150 мл хлороформа и реакционную 15массу оставляют на ночь. Загустевшуюсуспензию упаривают в вакууме и остаток перекристаллизовывают из этанола. Получают 5,02 г (73,6) хроматографически чистого Е - Аяр - (ОВц)- Р - РЬд - МН 1 плавящегося при 17920о181 С, После перекристаллизации изэтилацетата продукт плавится при188-189 оС. Н 4 0 75. 6 ) 59 9 о(с 1,в диметилформамиде)Найдено, : С 63,22; Н 6,60;и 8,96.С 24 Н 29 Оь Из (М 455, 50)Вычислено, : С 63,28; Н 6,42;и 9,23.4. Ь-Аспарагил- в (трет-бутилэфир)-30(пример 1,3) в 200 мл диметилформами"да при охлаждении добавляют 2,46 мл 35(28,2 ммоль) концентрированной соля-ной кислоты, а затем 2 г палладия наактивированном угле. При постоянномперемешивании через суспензию про"пускают водород в течение 2,5 ч, Катализатор отфильтровывают, фильтоатупаривают и остаток растворяют в этаноле. Раствор осветляют, растворитель отгоняют в вакууме и остатокобрабатывают эфиром. Получают 10,0 г(99) хроматографически чистогоН - Авр - (О Вц) . - Р - РЬ 9 - БН НС 8плавящегося при 169-170 С, В 4 0,15.5. Б-(трет-бутилоксикарбойил)-Ь-метионил-Ь-аспарагил-о в (трет-бутилэфир)-Р-фенилглицинамид. 50 6198 С; Вф 0,75; (6) -67,2 (с 1,0,в диметилформамиде),Найдено, : С 56, 81; Н 7, 34;И 9,98; Я 5.69СЬН 4007 И 4 Я (М 552,69)Вычислено, : С 56,51 у Н 7 30 уИ 10,14; Я 5,78.б. Ь-Метионил-Ь-аспарагил-Р-фенилглицинамид-гидрохлорид,К раствору 5,6 г (10,1.ммоль)ВОС-Ме 1-АЯр-ОВц 1-Р-РЬД- ХН 2 (пример 1.5) в 10 мл уксусной кислоты добавляют 3,5 мл (35 ммоль) меркаптоэтанола и 50 мл 4 н. раствора НС 1 вледяной уксусной кислотеЧерез 30 минреакционную смесь упаривают в вакуумеи твердый остаток обрабатывают безводным эфиром. Получают 4,84 гН-Ме-Аэр -Ц-РНД - ХН 2 НСР (В О, 1),содержащего избыточную соляную кислоту.7, М-(трет-Бутилоксикарбонил) -Ь-триптофил-Ь-метионил-Ь-аспарагил-Р-фенилглицинамид.К раствору 4,4 г (10,2 ммоль) Н-МеВ-Аьр-РЬ 5 - ХН - НС 8 (пример 1.6)и 4, 10 г (10, 2 ммоль) ВОС - Т г р - 05 цв 100 мл диметилформамида добавляют2,85 мл (20,4 ммоль) триэтиламина.На следующий день суспензию упаривают. в вакууме и остаток обрабатывают водой. Получают б,бб г (95,8)ВОС-Тр-МеФ - Аьр -Р-Рп-ХН ,т. пл. 216218 оС (с разложением) . После перекристаллизации из 80-ного этанолапродукт плавится с разложением при222 оСР Вф О,ЗУ о 6и -65,5 (с 1,О,в диметилформамиде).Найдено, ,: С 58,23; Н 6,30;И 12,60; Я 4,86,СЭЭН 4208 ИьЯ (М 682,81)Вычислено, : С 58,05; Н 6,20;И 12,31; Я 4,68,8. Ь-Триптофил"Ь-метионил-Ь-аспарагил-Р-фенилглицинамид.6,0 г (88,8 ммоль)ЭОС-Тр - Ме 1-4 ф-В -7 ИД - ИН . (пример 1. 7) обрабатывают 60 мл солянокислого раствора диоксана в присутствии 3,1 мл(44 ммоль)меркаптоэтанола. Через15 мин реакционную. смесь разбавляютбезводным эфиром. Гидрохлорид, содержащий 6,23 г избыточной солянойкислоты, отфильтровывают. Затем изэтой смеси готовят суспензию в 150 млводы. рН суспензии доводят до 7 с помощью триэтиламина, после чего перелешивают смесь, отфильтровывают осадок и, наконец, промывают его водой.Получают 4,0 г (78) Н-Тр - А 1 е 1 -Азр-Э-РИ -ХН который, разлагаясь,плавится при 230-232 С; В 0,3.9. Пентахлорфениловый эфир третбутилоксикарбониламинооксиуксуснойкислоты,8,0 г (41,8 ммоль)ВОС-ОД 19-ОНи 11,1 г (42,0 ммоль) пентахлорфеноа растворяют в 160 мл безводногодиоксана. Раствор охлаждают до темпеатуры не менее 5 С и затем к немуПолучают гидробромид, выход 88,8,В 0,25 у дсн +76,5 (с 1,0, н диметилформамиде) .3, И-(Бензилоксикарбонил)-Ь-аспарагил-в (трет-бутилэфир)-Ь-фенилглицинамид,5 8,65 г (37,5 ммоль) Н-РИД - МН- -НВг (пример 2.2) вводят во взаимодействие с 21,6 г (37,5 ммоль)2-Аер-(ОВц-ОРСР н 160 мл диметилформамида в присутствии 5,15 мл10 (37,5 ммоль) триэтиламина. После30 мин перемешивания н суспензию добавляют еще 5,15 мл (37,5 ммоль) триэтиламина. Реакционную. смесь выдерживают в течение ночи, затем упаривают н вакууме, остаток обрабатываютэфиром. Осадок отфильтровывают, промывают водой, продукт (13,9 г) перекристаллизовывают из водного этанола.Получают 10,6 г (65,8) хроматограФиче ски чистого Е - Авр - (О ВО) - Ь -РИф 20 -МН 2, т,пл, 207-208 С. Дополнитель- .ная перекристаллизация из этанолаповышает температуру плавления продукта до 209 С; В. 0,75; (с( в+21,60(с 1,57, в диметилформамиде).25 Найдено,С бзр 50 Н бу 38 уВ 9,23.С 4 Б ОИз (М 455,50)Вычислено, : С 6328; Н 642;И,9,23.30 осадок, полученный из эФирного маточного раствора первичного продукта, отфильтровывают, промывают водой,перекристаллизовывают из этанола.Получают 0,47 г (2,9) Е-Аьр-(О ВО)- -0-РИД - ЙН, т.пл. 188-189 ОС;В 075; ( ас-590 (с 10, в диметйлформамиде).4. Ь-Аспарагил- /б в (трет-бутилэфир) --Ь-фенилглицинамид-гидрохлорид.Применяют 9,6 г (21 ммоль) Е -Абр.-(ОВц - Ь-РИф- ИН (пример 2.3),отщепляют защитную группу в условияхописанных для П-диастереомера (пример 1.4). Получают 8.,03 г хроматографически чистого Н- Абр-(ОВи) -Ь-РИЯ 45 -8 Н 2 НСЕ содержащего избыточную соляную кислоту, Н 0,35.5, И-(трет-Бутилоксикарбонил)-Ь-метионил-Ь-аспарагил-(3 в (трет-бутилэфир)-Ь-фенилглицннамид.50 К раствору 3,95 г (10,5 ммоль)Н-Аер -(Орви)-Ь-РЬД -Нн -Нс 8 (пример 2,4) и 5,22 г (12,6 ммоль) ВОС-Ме(,-ОРДЕР н 50 мл безводного диметилформамида добавляют 2,94 мл (21 ммоль)55 триэтиламина. Смесь экстрагируют гексаном, гексановый экстракт отделяюти промывают водойЭкстракт упаривают, 5,38 г первичного продуктарастворяют в 25 мл кипящего метанола и осаждают 25 мл воды. Получают4,70 г (81)РОС-ЯеС-Юр-(ОВи)-4-РЬД.НИнебольшое количество которого очищают переосаждением из смеси метанола с эфиром, получают продукт ст.пл. 162-163 С; В 4 0,75; (А-5,565 (с 1,0, в диметилформамиде),664560добавляют 8,6 г (42,0 ммоль) дициклогексилкарбодимида. Реакционнуюсмесь оставляют на ночь при комнатной температуре, выпавший осадок отфильтровывают, фильтрат упариваютн вакууме, а остаток перекристаллизовывают из смеси диоксана и этанола;Получают 13,7 г (74,3) ВОС в ОДСу-ОРСР т.пл. 167-168 оС; В О, 7.Найдено, 3 С 35 р 37 Н 2 р 90 фМ 3,31 у СЕ 40,12.С ц Н 1 ОИСе (М 439;51)Вычислено, : С 35,52; Н 2,75;И 3,18 СЕ 4 О,ЗЗ.10 2-(трет-Бутилоксикарбониламинокси)-ацетил-Ь-,триптофил-Ь-метионил-Ь-аспарагил-Ь-фенилглицинамид,К суспензии 1,50 г (2,57 ммоль)Н-Тгр-Ме-Анр-РИф - 1 Н 2 (пример 1.8),в 15 мл диметилформамидадобавляют 2,26 мл (5,11 ммоль) триэтиламина и 1,20 г (2,73 ммоль)ВОС- ОДЮц - ОРСР (пример 1.9) . Суспензию перемешивают до полного растворения всех веществ, раствор оставляют на ночь, Затем упаринают, к остатку добавляют эфир. Получают 2,12 гсырья,:которое растворяют в небольшомколичестве смеси 5 растворителей ипропускают через колонку, приготовленную из 20 г силикагеля. Затемсмесью 5 растворителей осуществляютэлюирование при скорости 15 мл/час.Фракции, содержащие продукт, упаривают, остаток дважды перекристаллнзовывают из 20 мл 80-ного этанола,Получают 0,82 г (41,4)РОС-ОбЕЧ -У р-Ме 1-Азр) -Рп.Й),кот орый, р азл ага я сь,плавится при 199-200"С; В 0,15Н 0,40 р (сс-40,3 (с 1,0, в диметилформамиде).Найдено, : С 55,91; Н 6,18;М 13,35; Я 4,16.СЗ 5 Н 45 ою И 7 Я (М 755,86)Вычислено, : С 55 уб 2 Н б 001М 12,97; Я 4,24.фПример 2.1. И-(Бензилоксикарбонил)-Ь-фенилглицинамид.К раствору 27,6 г (97 ммоль)2,-Ь-РЬ - ОН в 300 мл безводного тетрагидрофурана добавляют 13,55 мп-10 С 12,1 мл (97 ммоль) пивалоилхлорида. Суспензию смешанного ангидридаперемешивают при -10 С в течение10 мин, Охлаждение убирают, реакционную массу оставляют на 1 ч при комйатной температуре и вводят газообразный аммиак. Реакционную смесьоставляют на ночь, упаривают и остаток обрабатывают, как описано дляО-энантиомера, Получают 18,90 г(68,7) Е -1, -РИД - )(Н, т,пл. 172173 С, В 4 0 75 у Ч с р +80,7 О (с 1,0,в диметилформамиде) .2. Ь-фенилглицинамид-гидробромид.Продукт обрабатывают в условиях,описанных в примере 1.2, применяяв качестве исходного 2,-).-РИф -МН.6645 20 Пример 5.1. И- (Бензилоксикарбонил) -Ь-лейцил-Ь-аспарагил- /5 - (трет-бутилэфир) - -В-фенилглицинамид.К раствору 5,0 г (14,0 ммоль) . Н-Аьр - (О Ви) -Ю-РЬ 5 - ИНт НСИ (пример 1.4) и 5,13 г (14,2 ммоль) 5 Е-ЬЕцц в 60 мл диметилформамида добавляют 1,96 мл (14,0 ммоль) триэтиламина, Реакционную смесь оставляют на ночь и затем упаривают в вакууме, остаток растирают с водой. 10 Полученные 7,32 г первичного продукта растворяют в этаноле, осветляют и кристаллизуют, Получают 6,05 г (77,7)Е-Ьеи-АБр-(ОВц)-Р-РИЯ-йН 2 т.пл. 192-194 фС; Вф 0,75. Небольшую пробу подвергают перекристаллизации из,этанола, дополнительно очищенный продукт имеет т,пл. 195-196 оС; () 1, -б 9, 5 (с 1, О, в диметилформамиде) .Найдено, : С 63,54; Н 7,38;0 10,07.СЭОН 4 ООтИ 4 (М 568,67)Вычислено, з С 63,36 р Н 7,09 р В 9,8.2. Ь-Лейцил-Ь-аспарагил-фенил глицинамид.К 5,20 г (9,15 ммоль)2,-ЬЕи-Абр-ОВи)-Э-РЬД- ИН (пример 5, 1) добавля.ют 50 мл 1 н. раствора бромистого водорода в уксусной кислоте, смесь вы держивают 1 ч. Реакционную массу упаривают в вакууме и гидробромид изолируют безводным эфиром. 5,33 г гидробромида суспендируют в 50 мл хлороформа, рН суспензии дбводят до 35 7 с помощью триэтиламина, полученный гелеобразный продукт отфильтровывают и промывают этанолом.Получают Н-Ьец-Авр-В-РИЯ - ЙН 2 выход 2 45 г (70,5); т,пл. 218 в 2 С; " В 0,25,3, И"(трет-Бутилоксикарбонил) -Ь- -триптофил-Ь-метионил-Ь-аспарагил-Р- -фенилглицинамид. 60 122,8 г (4,2 ммоль) ВОС-Тгр-Ьец-Аер-РЬ- КН 2 (пример 5, 3) обрабатывают30 кл солянокислого диоксана в при"сутствии 0,59 мл (8,4 ммоль) меркаптоэтанола. Через 15 мин реакционнуюсмесь разбавляют безводным эфиром.2,60 г гидробромида суспендируют в150 мл воды, рН суспензии доводятдо б с помощью триэтиламина, осадокотфильтровывают и промывают водой.Получают 2,22 г (93,7) Н-Тгр-(.еи -А 5 Р-Р-ТЪф-МНкоторый, разлагаясь, плавитя при 246 248 С В О 35. 2-(трет-Бутилоксикарбониламиноокси)-ацетил-Ь-триптофил-Ь-лейцил-Ь-аспарагил-фенилглицинамид,К раствору 1,10 г (1,95 ммоль) Н(пример 1.9). Смесь оставляют наночь, упаривают в вакууме и остатокрастирают с безводным эфиром. Первичный продукт (1,46 г) в горячем состоянии отфильтровывают из десятикратного количества этилацетата. Полученные 1,31 г вещества растворяютв небольшом количестве смеси 10 растворителей и пропускают через колонку, приготовленную из 80 г силикагеля. Элюирование осуществляют смесью 10 растворителей со скоростью8 мл/ч. Фракции, содержащие чистыйпродукт, собирают, упаривают и получают 0,52 г продукта, который перекристаллизовывают из 80-ного этанола, Получают 0,45 г (31,3)ЭОС-ОДОЦ-Тгр-цец-Азр-Р)я- МН 2 которыйплавится при 206-208 С; В 0,75;К раствору 2,.25 г (5,93 ммоль) Н-цец- АБР-З-рпф - яН (пример 5.2) в смеси из 50 мл диметилформамида и 10 мл гексаметилентриамида ортофосФорной кислоты добавляют 0,84 мл(5, 93 ммоль) триэтиламина и 2,65 г 50 (6,6 ммоль ВОС-Тгр- Обц, Реакционную смесь перемешивают 4 ч и полученный прозрачный раствор оставляют на ночь. Затем в вакууме отгоняют диметилформамид, к остатку добавляют воду и ос,тавляют на холоде, выпавший осадок отфильтровывают, Первичный продукт (4,31 г) суспендируют в воде, суспензию дважды доводят до кипения, затем Фильтруют в горячем состоянии. Получают 2,87 г (72,8) ВОС-Тгр-Ьеи-Аьр-Э-РЬД - Й Н 2т, пл. 195-200 ОС; ВО, 55. Продукт перерабатывают без дальйейшей очистки,4. Ь-Триптофил-Ь-лейцил"Ь-аспарагил-фенилглицинамид. 65 Пример б,1. И-(Бензилоксикарбонил)-Ь-лейцил-Ь-аспарагил-(трет-бутилэфир)-Ь-фенилглицинамид.В качестве исходного вещества бе-.рут 4,0 г (11,2 ммояь) Н- Аьр -(ОВи)-(;.1 ЪД -ИН НСО (пример .2.4) и обработкуосуществляют способом; описанным впримере 5,1Раствор первичного продукта (5,42 г) в эфире осветляют.Получают 3,0 г (47)Е-Ьеи-Аэр-(ОВи)-),-Щ-ИНкоторый разлагаясь, плавитсяпри 193-194 ОС; В+ 0,70; В 0,65;2, 75 г (4, 84 ммоль) Ъ- ец - Авр(0 Во)-Ь-РЙД- МН (пример 6. 1) растворяютн 50 мл диметилформамида и защитнуюгруппу отделяют гидрированием в присутствии 0,45 мл (5,2 ммоль) концен"трированной соляной кислоты с использованием в качестве катализатора палладия на активированном угле. Спустя2 ч катализатор отфильтровывают, Фильтрат упаривают в вакууме. Остатокобрабатывают безводным эфиром. Получают 2, 25 г (98,5) Н-Ьеи- Аэр-(ОВо-и.Рйф-ЙН НСРкоторый плавится при 182183 С; В 0,15.3, Ь-Лейцил-Ь-аспарагил-Ь-фенилглицинамид-гидрохлорид.2,25 г (4, 80 ммоль)Н-(ец-Аьр-ОВц)- 16РИД -ЮИНСР(пример 6.2) обрабатывают 20 мл солянокислой уксуснойкислоты. Спустя .40 мин реакционнуюсмесь упаривают в вакууме и остатокрастирают с эфиром, Получают 2,0 г(99) Н-(,еи-АвР-).-РИД-ЙНл НСР,который,разлагаясь, плавится при2100 Ср В 0,20.4. И-(трет-Бутилоксикарбонил)-Ь-триптофил-Ь-метионил-Ь-аспарагил-Ь-фенилглициламид.К, раствору 2,2 г (5,3 ммоль) Н-,еи-Аер-(.-РИД-МН ХСР (пример 6.3)в 60 мл диметилформамида в присутствии 1,48 мл (10,6 ммоль) триэтиламина добавляют 2,32 г (5,8 ммоль)ВОС-Тгр-Оби . Реакционную смесь упаривают в вакууме, остаток растворяют водойПервичный продукт (3,30 г)растворяют в 70 мл 80-ного этанола,осветляют и кристаллизуют. Получают 352,30 г (65)ВОС-Тгр-).еи-АБр-Ь-РЬД-МН,который, разлагаясь, плавится при205 в 2070 й 0,40 р о 6 д -7,3 (с 1,0,в диметилформамиде) .5. Ь-Триптофил-Ь-лейцил-Ь-аспарагил-ь-фенилглицинамид.2,23 г (3,25 ммоль)ВОС-Тгр-,еи.Аэр-Ь-РИД-МН(пример 6,4) обрабатывают 25 мл солянокислого диоксана вприсутствии 0,47 мл (6,7 ммоль) меркаптоэтанола. Через 10 мин .реакционную смесь разбавляют безводным эфиром, Гидрохлорид отфильтровывают исуспендируют в воде, с помощью триэтиламина доводят значение рН суспензии до 7, отфильтровывают осадоки промывают водой. Получают 1,16 г(пример 1.9) в.15 мл диметилформамида добавляют 0,14 мл (1,0 ммоль) триэтиламина; Смесь оставляют на ночь,упаривают в вакууме и остаток обрабатывают эфиром. Полученный первичный продукт (0,81 г) очищают способом,описанным уже для О-днастереомера,Получают 0,30 г (40,5) ЭОС-ОДРУ -Тгр.-Ьеи-Аэр-)-РЬД-ЬНПродукт, разлагаясь,плавится при 196-198 С; В 0,35;Ф и 0 (с 1,0, в диметилформамиде) .Нандено, : С 58,35; Н 6,20;М 13, 07.СдьН 4 уОю Ж 7 (М 737,82)Вычислено, : С 58,60; Н 6,42;И 13,29.Пример 72-0- (трет-Бутилоксикарбониламиноокси)пропинил-Ь-триптофил-Ь-лейцил-Ь-аспарагил-П-фенилглицинамид.К реакционной смеси из 1,15 г(1,56 г) растворяют в 50 мл 80-ногоэтанола, содержащего 0,3 мп уксуснойкислоты, Перед кристаллизацией раствор осветляют. Получают 0,86 г (56)ВОС-Р-ОАРа- игр-( Еи в Аер -Р-РНД-НК 2,который, разлагаясь, плавится при213-214 С; й 4 0,2; В 0,4;с 4, -28,7(1,0 ммоль) триэтиламинаСмесь оставляют на ночь и затем упаривают ввакууме, остаток растирают с эфиром,первичный продукт (0,77 г) растворяют в небольшом количестве смеси 10растворителей и пропускают через колонку с 30 г силикагеля. Элюированиеосуществляют смесью 10 растворителейсо скоростью 5 мп/ч. Фракции, содержащие продукт, объединяют, упариваюти получают 0,46 г продукта, Последнийрастворяют в 10 мл метанола и осаждают, добавляя 70 мп эфира, Получают0,26 г (34,2)ЗОС-З-ОАРа-Тгр-Ьеи-АэрРИД-ЙН,который, разлагаясь, плавится при 184-185 фС; й 0,4;сс , +18,817 П р и м е р 10.1, М-трет-Бутилоксикарбонил-Ь - -норвалин-пентафторфениловый эфир.8,0 г (20 ммоль)ВОС-Мча -ОН ЗЭСНА с 60 мл эфира и 20 мл 2 н. серной кислоты встряхивают до полного растворения, Эфирный раствор промывают 20 мл 2 н, раствора серной кислоты, сушат и упаривают в вакууме, Оставшееся масло вместе с 3, 70 г (20 ммоль) пентахлорфенола растворяют в 25 мл этилацетата. К раствору добавляют1 О 3,92 г (19 .ммоль) дициклогексилкарбодиимида и смесь выдерживают 1 ч при ОС. Суспензию Фильтруют, Фильтрат упаривают в вакууме и остаток растворяют в 50 мл н-гексана. Раст вор промывают 2 раза (по 20 мл) 5- ным раствором бикарбоната натрия, а затем 2 раза (по 20 мл) водой. Раствор упаривают в вакууме. Маслообразный остаток кристаллизуют на холоде. Получают б, 21 г (81) ВОс- Мча- ОРР который плавится при б 0-62 С;В 0,70; оС р -32, 3 (с 1, О, в диоксане),Найдено, :,С 50,06; Н 4,641 Р 24,63.С 1 Ь Н 8 04 ИГБВычислено, : С 50,14; Н 4,73; Г 24.,78. 2, И-трет-Бутилоксикарбонил-Ь-норвалил-Ь-аспарагил- / в (трет-бутилэфир)-0-фенилглицинамид.1,60 г (5,0 ммоль) Н-Абр-ОфВц-РИЯ-МН (пример 9.2) и 1,91 г(5 ммоль) триэтиламина, Смесь оставляют на ночь, затем упаривают ввакууме и остаток обрабатывают эфиром. Получают 2,36 г (87,4)ЗОС-Кча-Аэр-ОВ 0-0-РИ 5- МНд который плавится при 200 в 2 Ср Еф 0,75 уА п,7(с 1,0, в диметилформамиде)Найдено, : С 60,08; Н 7,68;И 10,96,С Ь Н 40 07 144 (М 520, б 1)Вычислено, : С 59,98; Н 7,7;И 10,76,3, Ь-Норвалил-Ь-аспарагил-фенилглицинамид-гидрохлорид.2,0 г (3,84 ммоль)ВОС-Нча"Аэр-ОфВи)-1)-РИ-ЙН обрабатывают 15 мл 4 н. 50раствора уксусной кислоты в солянойкислоте. Через 1 ч суспензию разбавляют эфиром и фильтруют холодной.Получают 1,52 г (98)Н-Кча-Абр-З-РИф-ЙН НС 6 Гидрохлорид плавится, разлагаясь, при 204 Су й 0,15; сС п,0(7,5 ммоль) триэтиламина. Реакцион,ную смесь оставляют на ночь, затем65 664560 18упаривают в вакууме, остаток обрабатывают водой и фильтруют. Продукт(2,36 г) перекристаллизовывают иэ300 мл 80-ного этанола. Получают1,54 г (66,2)ВОС-Тгр-йча-Аэр-Р-РИ-НН;,т.пл. 2400 С (с разложением)," Вр 0,35;сс,.в -60,5 (с 1,0, в диметилформамиде).Найдено, : С 60,66; Н 6,59;И 12,57.СЗЬН 4 гОВНЬ (М 650,71)Вычислено, ; С 60,91; Н 66,51;14 12,92.5, Ь-Триптофил-Ь-норвалил-Ь-аспарагил-фенилглицинамид-гидрохлорид,1, 50 г (2, 30 ммоль) ВОС -Т Г р-й ча- Я зр-РИ-ИН обрабатывают 20 мл 4 н.раствора диоксана в соляной кислоте в присутствии 0,77 мл (11 ммоль)меркаптоэтанола, Спустя 30 мин суспензию упаривают в вакууме, твердыйостаток обрабатывают эфиром и отфильтровывают, Получают 1,34 г (99)Н-Тгр-Мча-Аьр-Э-РИД-ННгНСР,т, пл. 216 С.(б;3 ммоль) триэтиламина. Реакционную смесь оставляют на ночь, затемупаривают и остаток обрабатывают водой и фильтруют, промывают водой иэфиром, Продукт (1,40 г) перекристаллизовывают из смеси пиридина,уксусной кислоты и воды, приготовленной в соотношении 20:б:11. ПолучаютО, 72 г ЗОС-ОАРа-игр -йю-Азр-Р-РИб )(Н 2т.пл. 2100 С; 20,28; сь и -26,58(14, 5 ммоль) дициклогексилкарбодиимида, Реакционную смесь 1 ч перемешивают при комнатной температуре и1 ч при 00 С. Выпавший осадок отфильтровывают и фильтрат упаривают в вакууме. Оставшееся маслянистое веШестворастворяют в 40 мл н-гексана, Раствор в делительной воронке промывают5 раз (по 20 мл) 5-ным растворомбикарбоната натрия в 2 раза (по 20 мл)водой сушат и упаривают в вакууме,Остаток кристаллизуют на холоде. Получают 5,82 г (87,5)ВОС.-Аде)РРР