Способ получения пептидов

(088.8) во делам изобрет и открытий 2.78. Бюллетень ЛЪ 47 иковано 2) Дата опубликования описания 31.08ностранц Абрахам ельсон, К (Канада) ли Иммерестандж Неда ВерГанс Взимир 7) Заявител Иностранная фирмат Маккенна энд Харрисон(Канада) митед 54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТ линейногоЯизобретениявых пептидюмакологичес ептнда иодом илн ствующег роданидо Целью лучения ными фаспособ отов с 1 х,со мененилолуче- матостаедин,ений,в медиявляетоя способ нов, обладающих ценкими свойствами. око используют идного мости,ка сления соответьСНСНБ )СО-Ъуо-Мь-Р 1 те-РЪеЯз - ТЬ -РЬ- 3 егНСН Н,5 Ю где К - Н - 01 у - Ыу - А Н; Н - (л 1 у - 61 у - 61 у - А 1 а - 61 у -- 1.ец - 6 у - Сеу - А 1 а - 61 у - ЮК - Н или СООН;или Я - Н или ХНКз где Р - ацил или бензоил; К - Н;или К - Н - Аа - Ыу - ХН; К - СООА 1 К где АП - лрямоцепочечный или разветвленный алкил С 1 - С,4.Способ заключается в том, что линейный пептид формулыТг - ЯСНСН (К 4) СО - .уз (ВОС) - Азп -- РЬе - РЬе - Тгр - 1.уз (В ОС)8 СНОНЯ"1 СО- Ьц 81 ВОС-А 5 п-рте-РЬеИзобретение относится кния,новых пептидов - аналтина, биологически активнкоторые могут найти прицине.В пептидной химии ширметоды замыкания дисульфв лептидной цепи путем ок Это достигается предлатаемым способоолучения пептидов общей фор 1 мулы- ТЬг (Вц ) - РЬе - Т 1 тг (Вц ) - Ьег (Вц) -- 1 ЧНСН (К) СНЬ - Тг (И),где К - Н или СООН; К" - ВОС - кту- -- 61 у - А 1 а - Ыу - 1 ЧН; В ОС - Яу - б 1 у -- Яу - А 1 а - 61 у - ИН или ВОС - 1.ец -- Сту - Иу - А 1 а - 61 у - М Н;5 или К 2 - Н; К 4 - Н или ХНКа, где Вимеет вышеуказанное значение;или К 2 - СООАП; К 4 - ВОС - А 1 а -- ау - ЫН;окисляют иодом или роданидом с получением соответствующего циклического дисульфидного ктроизводного формулы р-Ьцд (ВОЮ) -ТЬг (В и )-Рйе-ЧЪ 1 Ви)-ьет 1 Вис)639446 19 20 рс-Ср-р - Л 5 гг - Гье - Ии - Тг р-т уЗ-ТЬг -Р 1" е-ТЪ, - 5 ег - 1 Щ 0 Н СН Я 1 К этснму соединению добаваяют 23 мл холодиой,концен гримированной соляной кислоты, смесь охлаждают,на ледяной бане и в атмосфере азота при сильном перемешиваниив течение 10 мин, добавляют 300 мл ледяной уксусной кислоты и раствор лиофилизуют. Остаток,растворяют в воде и снова лиофилизуют. Остаток растворяют в 0,01,н, водном растворе ацетата аммония, помещают в колонку с карбоксиметилцеллюлозной (Ватман бМ - 23, 2,5 ХЗО см), Чистое соединение элюируют 0,06 н, ацетатаммонийным буфером. Очищенное вегцество лиофилизуют нз воды и получают уксуснокислую соль, вышеуказанного соединения в виде белого твердого вещества; УФ- спектр: л, . (МеОН) 282 мк (в 5120), 289 мк (е 4610). Повторная лиофилизация продукта,из воды дает вышеуказавное соединение в виде свободного основания. Аминокислотный анализ: 1.уз 2,06; Азр 1,02; Туг 1,75; Бег 0,91; цистеиновая кислота 0,73; Сг 1 у З,ОО; А 1 а 1,10; РЬе 3,11,Применяя вместо,иода роданид по методу Хиски и Смита также можно получать вышеуказанное соединение.П,р и м е р 31. Метиловый эфир ацетил- (5-тритил) - цистеинил-Х- трет,бутоксикарбонил-лизил - аспарагинил - фенилаланилфенилаланина (Ас - Суз (Тгг 1) - 1.уз - (ВОС) - Азп - Рйе - Рйе - ОМе) .Раствор 0,191 г (0,5 ммоля) и-нитрофенилацетата в 4 мл диметилформамида добавляют при 0 С к раствору 0,750 г (0,698 лгмолей) Н - Суз (Тп 1) - уз (ВОС) -- Азп - Р 1 ге - РЬе - ОМе НОАС и 0,1 мл И- эгилморфолина. После перемешивания,при 0 С и течение 24 час растворитель отгоняют в,вакууме. Остаток расгворяют в 3 мл метанола, и медленно добавляют к 200 мл диэтилового эфира, Осадок собирают и крысталлизуют,из метанола, получают вышеуказанное соединение с т. пл. 219,5 - 221 С; а" ,= - 21,6 (с=1, диметилформамид),Таким же образом, применяя и-нитрофениловые эфиры муравьиной, пропноновой, масляной, изомасляной, триметилуксусной, капроновой или бензойной кислот, вместо п-нипрофенилацетата, получают соответствующие соединения вышеуказанной формулы, где вместо Ас - форсил, пропиоаил, бутаноил, изобутаноил, пивалоил, гексаноил или бензоил,5 го 15 го 25 30 35 40 45 50 55 П ри м е р 32, Гидразид ацегил-(Я-тратил)-цистеинил-Х - бутоксикарбонил - лизил - аопарапинил - фенилалавил-фенилаланина (Ас - Суз (Тгй) - 1.ув (ВОС) -- Азп - РЬе - Р 1 ге - ,ИНМНг) Раствор 0,40 г (0,379 лглго,гя) Ас - Суз -(Тп 1) - 1.уз (ВОС) - Азп - Рйе - Р 1 ге -- Оме и 0,37 мл (7,58 ммолей) тидразингидрата в метаноле (15 мл) перемешивают пр,и 0 С 48 час. Осадок собирают, сушат и получают, вышеуказанное соединение, с т. пл.236 - 237 С; а 1 о = - 28,6 (с=1, диметилформ амил) .Таким же образом, применяя соответствующие,исходные вещества, получают соединения, где вместо Ас - формил, пропионил, бутаноил, изобутаноил, пивалоил, гексаноил или бензоил.П р и м е р 33. Ацетил-Я-тритил-цистеинил-Х-трет.бутоксикарбонил - лизил - аспарагинил-фенилаланил - фенилаланил - триптофил- Х" - трет. бутокси кар бонил - лизил-О- трет,-бутил - треонил-фенилаланил О-трет.- бугил-тр еонил-серил- тритилтиоэтиламид (Ас - Суз (Тгй) - 1.уз (ВОС) - Азп -- Р 1 ге - Р 1 ге - Тгр - 1 уз (ВОС) - Т 1 гг (Вц ) -- Р 1 ге - Т 1 гг (Вц ) - Бег (Вц) - ИНСН 2 -- СНЬТп 1) .К распвору 0,240 г (0,227 ммоля) Ас - Суз (Тп 1) - 1.уз (ВОС) - Азп - Р 1 ге - Р 1 ге -- ХНЫ Н 2 в сухом дисметил форм амиде (2 мл),и диметилсульфоксиде (1 мл), охлажденному,до - 20 С добавляют 2 н. соляную кислоту в этилацетате (0,273 ммоля), затем 0,0312 мл (0,273 ммоля) трет.-бутилнитрита. Смесь перемешивают 15 мин при - 15 С. Раствор 304 г (0,227 ммоля) Н -- Тгр - 1.уз (ВОС) - Т 1 гг (Вц ) - Р 1 ге - Т 1 гг - (Вц ) - Бег (Вц ) - ХНСН 2 СН 5 - Тгй в диметилформамиде (3 мл), содержащем 0,097 мл (0,568 ммоля) Х-эпилдиизопропиламина, охлажденного до - 15 С по каллям добавляют к вышеуказанной реакционной смеси. Смесь перемещивают при - 15 С 1 час и цри 25 С 20 час. Растворктель отгоняют,в,вакууме, остаток растирают с охлажденной на льду 1 н. лимонной кислотой, фильтруютпромывают водой и сушат над пятиоиисью фосфора. Твердый остаточек растирают с метанолом, фильтруют и сушат над пятиокисью фосфора, получают вышеуказанное соединение; аминокислотный анализ: 1.уз 1,82; Азр 1,00; Бег 0,76; цистеиновая кислота 0,93; Т 1 гг 1,87; РЬе 3,10.Таким же образом, применяя соответствуюгцие исходные вещества, получают соединения формулы 11, где вместо Ас - формил, пропионил, бутаноил, изобутаноил, пивалоил, гексаноил или бензоил.П р,и,м е р 34. Циклический дисульфид ацетил-цистеинил - лизил-аспарагинил - фенилаланил - фенилаланил - триптофил - ли зил - треонил-фенилаланил - треонил-серил 2-тиоэтиламида;21 22 Ас-СЧ 5-г.цБ(М 4 - ЛЗп- Рггг-РМе-Тгр - 1.цз (ЬОС 1 - ТЬг (Ви ) - Р 1 е, -- Туг (Зи ) - 5 ег (Зи , - ЪЯСН,СН 5и Раствор 0,250 г (0,110 ммоля) Ас - Суз - (Тг 11) - 1.уз (В ОС) - Аэп - Р 1 ге - Рйе - Тгр - 1.уз (ВОС) - Т 1 гг (Вц ) - РЬе - Т 1 чг (Вп ) - Бег (Вп ) - ХНСН,СН,Ь - Тг 11 в уксусной кислоте (61 мг) медленно добавляют при перемешивании (0,278 г) 1,1 ммоля,иода в метаноле (56 мл) при 25 С. По окончании добавления ,раствор продолжают перемешивать при 25 С в теК циклическому пептиду вводят 9,1 мл концентрированной соляной кислоты при 0 С в атмосфере азота в течение 10 лгия, прои сильном перемевивании добавляют 119 мл уксусной,кислоты и раствор тут же лиофилизуют. Остаток растворяют в воде и вновь лиофилизуют. Затем остаток растворяют в верхней фазе смеси растворителей бутанол/уксусная кислотавода (4: 1: 5) и помещают в колонку с химически модифицированным сшитым декстраном (Сефадек.6 - 25 М), приготовленным в виде суспензии в нииней фазе смеси растворителей, Верхнюю фазу смеси растворителей применяют для десор 6 ции ундек а и ептида. Фр а кции, содержащие чистый продукт, объединяют и упаривают в,вакууме, Остаток растирают с диэтиловым эфиром, растворяют в 5% уксусной иислоте, лиофилизуют и получают,вышеуказанное соединение в виде уксуснокислой соли;УФ-спектр: Х, (МеОН) 290 лгк (в 4990), 282 мк (е 5455), 274 мк (в 5095).Соедчнение в виде уксуснокислой соли повторно лиофилизуют из воды и получают вышеуказанное соединение в виде свободного основания; аминокислотный анализ: 1.уэ 1,93; Азр 1,00; Ьег 0,84; цистеиновая кислота 0,80; ТЬг 1,84; Р 1 ге 2,97.Таким же образом, применяя другие исходные вещества, получают соответствую. щие соединения формул 111 и 1, где К - это Н, а К 4,и К - это МНКз, где Кз - это формил, пропионил, бутаноил, изобутаноил, пивалоил, гексаноил или бензоил.П р,и м е р 35. Пентахлорфениловый эфир 3-тритилтиопдопионовой кислоты (Тп 1 - ЯНгСНгСООКЬС 15) .К раствору 1,0 г (2,87 млголя) 3-тритилтиопропноновой кислоты в суком тетрагидрофуране (25 мл) добавляют 0,765 г (2,87 ммо гя) пентахлорфенола. Смесь охлаждают до 0 С, вносят в нее 0,596 г (2,87 ммогя) дициклогексилкарбодиимида перемешивают 1 час при 0 С, затем 1 час при 25 С. Затем смесь охлаждают до 0 С, фильтруют, фильтрат упаривают в вакууме. Остаток иристаллизуют из этилацетата и получают вышеуказанное соединение с - пл. 154 - 156 С. 1 О г 5 20 25 зо 35 40 45 50 55 чение часа. Раствор охлаждают до 0 С к медленно добавляют 1,н. раствор,гипосульфита натрия в воде дгтя разрушения избытка иода (обесцвечивание раствора). Растворитель отгоняют в,вакууме, остаток растирают с водой, отфильтровывают, промывают,водой, сушат нагд пятиокисью фосфора, получают циклический защищеигный ундекапептид формулы П р и м ер 36. Метиловый эфир 3-тритилтиопропионил-М - трет.бутоксикарбониллиэил-аспарагинил - фенилала,ни.ч - фенил. аланина, (Тг 11 - ЬСН,СНгСО - 1.ув (ВОС) -- Лап - Р 1 ге - Р(че - ОМе) .Раствор 0,579 г (1 ммоль) 4 чентаклорфенилового эфира З-трити.чтиопропионовой кислоты, 1 ммоль Н - 1.уэ (ВОС) - Аэп - Р 1 че -- РЬе - ОМе НОАС и 0,14 мл (1 ммоль) триэтнламина перекгеш)ивают при 25 С 3 дня. Растворитель отгоняют в вакууме, остаток растирают с охлажденным на льду 1 н. водным раствором лимонной кислоты, фильтруют, промывают водой:и сушат над елкином калием. твердое вещество,кристалл 1- зуют пз метанола,и получают вышеуказанное соединение с т. пл. 215 в 2 С.П р и м е р 37. Гидразид 3-тритилтиопропионпл - Х -трет.бутокспкарбонил - лиэил-аспарапинил - фенилаланил - фенилаланина (Тг 11 - 5 СНгСНгСО - 1.уз (ВОС) -- Аэп - Р 1 ге - Р 1 че - ХНХН,) .Раствор 0,900 г (0,9 ммоля) ТгИ - ЯСН,СНгСО - 1.уэ (ВОС) - Лзп - РЬе -- Р 1 ге - ОМе и 1 м,г гидразингидрата в дпгетилформамиде (20 м.г) перемешивают при 25 С 20 час. Растворитель отгоняют в вакууме. Остаток растирают с холодной водой, фильтруют, промывают водой,п сушат, получают вышеуказанное соединенне с т. пл. 225 - 235 С,П р и м е р 38. 3- тритилтпопроппонил- К -трет.бутоксикарбонил - лпзпл-аспарагинил-фенилаланил - фенплаланпл - триптофил-Х: -бутоксикарбонил - лч 1 зил - О-третбутил-треонпл-фенилаланпл - О-трет.бутилтреонпл-О-трет.бутил серил- тритилтпоэтплампд (Тп 1 - ЬСНгСН.СО - 1. з (ВОС) - - - Азп - Р 1 ге - Р 1 че - Тгр - 1.уз (ВОС) -- ТЬг (Вп ) - Р 1 ге - Т 1 гг (Вц) - Бег (Вц ) - ХНСН,СН,5 - Тп 1).К раствору 0,5 г (0,5 лглголя) Тп 1 - 5 СНгС 1-1 гСО - 1.уэ (ВОС) - Азп - Р 1 ге -- РЬе - МНН., в 20 мл диметплформамида и 5 мл диметилсульфоксида, охлажденному до - 20 С, добавляют раствор 1,4 н. 0,895 мл соляной кислоты в этилацетате, затем 0,069 мл (0,6 лглголя) трет.бутилнитрита. Сьмесь перемешивают при - 15 С 15 мин и добавляют охлажденный до - 15 С раст- ТЬг (Зц ) - 5 ег (Ви ) - ЖНсН СН 20 35 40 4550 вор 0,67 г (0,5 льиоля) Н - Тгр - 1.уз (ВОС) -- Т 11 г (Вц) - Рйе - Тйг (Вц) - Ьег (Вц) -- КНСНСН 23 - Тп 1 1 и 0,214 лл (1,25 ммоля) К-этилдиизопропиламина в 10 мл диметилформамида. Реакционную смесь перемешивают при - 15 С 1 час и при 25 С 20 час, затем упаривают в вакууме. Остаток растирают с охлажденным на льду водным раствором 1,н. лимоввой кислоты, фильвруют, промывают водой и сушат над пятиоиисью Раствор 0,5 г (0,216 ммоля) Тг 11 -- ЬСН,СН,СО - 1.уз (ВОС) - Азп - Рпе -- Р 11 е - Тгр - 1.уз (ВОС) - ТЬг (Вц) - Рпе - - - Тпг (Вц) - Яег (Вц) - ХНСН 2 СНЬ - Тг 11 в 100 мл уксусной кислоты медленно добавляют к перемешиваемому раствору 0,547 г (2,16 ммоля) йода в 110 мл метанола при 25 С, По окончании добавления раствор продолжают перемешивать при 25 С 1 час. Декапейтид перемешивают в 18 млконцентрированной соляной кислоты при 0 С в атмосфере азота в течение 10 мин, добавляют 200 мл уксусной кислоты и раствор сразу лиофилизируют. Остаток растворяют в воде и лиофилизируют, затем остаток растворяют в верхней фазе смеси растворителей бутанолуксусная кислота/ вода (4: 1; 5) и помещают в колонку с химически модифицированным сшитым декстраном (Сефадекс СМ), приготовленным в нижней фазе смеси растворителей. Верхнюю фазу этой смеси применяют для десорбции декапептида. Фракции, содержащие чистый продукт, объединяют и упаривают в вакууме, Остаток растворяют в 5%-ной уксусной кислоте и лиофилизуют, получают вышеуказанное соединение в виде уксуснокислой соли.УФ-спектр: Лаах (МеОН) 290 лк (е 4920), 282 люк (е 5390), Это соединение в виде уксуснокислой соли повторно лиофилизуют из воды и получают вышеуказанное соединение в виде свободного основания; аминокислотный анализ: 1.уз 1,97; Азр 1,00, Тпг 1,64; Бег 0,65; Рйе 2,94.П р и м е р 40. Метиловый эфир а,а-диметил - 3,5 - диметоксибензилоксикар бонилтриптофил-И -трет.бутилоксикарбонил - лизил-О-трет.бутил - треонил - фенилаланил- О-трет,бутил-греонил-О-трет,бутил - серил. Я-тритил-цистеина. (00 СЬо - Тгр - 1.уз -- (ВОС) - Тпг (Вц) - Рпе - Тпг (Вц) -- Зег - (Вц) - Суз (Тг 11) - ОМе),фосфора. Твердый остаток растирают с холодным метанолом,и сушат, получают вышеуказанное соединение; аминокислотный анализ: 1.уз 1,99; Аэр 1,15; Тпг 1,73; Бег 0,67; Рпе 3,00.П р и и е р 39. Цикличесюий дисульфид 3-тиопропионил-лизил-аспарагинил - фенилаланил - фенилаланил - триптофил - лизилтреонил - фечилаланил - треонил - серил- тиоэтиламида; Раствор охлаждают до 0 С и медленно добавляют 1 н. водный раствор гипосульфита натрия для разрушения избытка иода (до обесцвечивания раствора). Растворитель отгоняют в вакууме и остаток растирают с водой. Осадок отфильтровывают, промывают несколько раз водой и сушат над пятиокисью фосфора, получают циклический защищенный декапептид формулы Раствор диазометана в эфире добавляют к раствору 12,6 г (0,795 млсоля) Х)РСЬо - Тгр - 1.уз (ВОС) - Т 11 г (Вц) -- Рйе - Тйг (Вц) - Бег (Вц) - Суз (Тп 1) -- ОН в 10 мл метанола при 0 С. Смесь перемешивают 1 час и упаривают, Остаток хроматографируют на силикагеле, применяя для элюирования 3% метанола и 0,5% пиридина в хлороформе, Упаривая элюат, получают вышеуказанное соединение, ЯМР (СОС 1 з); 61,13 (8,18 Н), 1,27 (8,9 Н)1,48 (3,9 Н), 1,7 (5,6 Н), 3,68 (Ь,ЗН), 3,79 (5,6 Н), 7,1 - 7,6 (гп, 23 Н).Таким же образом, применяя вместо диазометана диазоэтан, 1-диазопропан, 2- диазопропан, 1-диазобутан, 1-диазоизобутан, 1-диазопентан, 4-диазо-метилбутан, 1-диазогексан, 1-диазогептан или 1-диазооктан, получают соответствующие втил-, пропил-, изопропил,- бутил-, изобутил,- амил-, 2-метилбутил-, гексил-, гептил- и октиловый эфиры указанного соединения,П р и м е р 41, Дециловый эфир Я-трптилцистеина (Н - Суз (Тп 1) - ОСН 2 - ,СН,) вСНз),Раствор 0,894 г (3 ллсоля) хлоргидрата децилового эфира цистеина 0,78 г (3 л 1 моля) трифенилкарбинола и 0,42 мл этарата трифторида бора в (5,2 мл) уксусной кислоте перемешивают при комнатной температуре 1 час. Растворитель отго 25 039446няют в вакууме и остаток хроматографируют на силикагеле, применяя для элюирования 40-ный раствор этилацетата вгексане, содержащем 0,1% триэтиламина.После упаривания элюата получают в виде масла вышеуказанное соединение1 а 1-" =+25,84 (с=1, СНС 1 з) ЯМР(СРС 1 з) б 0,89 (1,1=5 НХ, ЗН), 1,3 (8,16 Н),1,55 (т,2 Н), 2,55 (гп,2 Н), 3,25 (2 д,1=5 НХ,1 Н), 4,1 (1,1(6 НХ, 2 Н),Таким же образом, но заменив исходное вещество эквивалентным количествомхлоргидрата тетрадецилового эфира цистеина получают тетрадециловый эфиртритилцистеи на, а 1 л = + 13,8 (с = 1,СНСз) ЯМР (СЭСз) 60,89 (1,1=5 НЕ, ЗН),1,3 (8,24 Н), 1,56 (гп,2 Н), 2,55 (т,2 Н), 3,25(2 с 1,1= - 5 НХ, 1 Н), 4,1 (1.1=6 НХ, 2 Н).Таким же образом получают соответствующие нонил, ундецил, додецил и тридециловые эфиры Я-тритилцистеина.Сочетание вышеуказанных эфиров5-тритилцистеина с гидразидом гексацептида формулы 1)ЭСЬо - Тгр - 1.уз (ВОС) -ТЬг (Вц) - РЬе - ТЬг (Вц) - Ьег (Вц) АНИН, по азидному методу дает нонил-,децил-, ундецил-додецил-, тридецил- и тетрадециловый эфиры соответствующих соединений,П р и м е р 42. Формиат метилового эфира триптофил-Х. -трет,-бутилоксикарбониллизил-О-трет. бутил - треонил-фенилаланил- О-трет.бутил треонил-О-трет, бутил-серил-тритил-цистеина; (Н - Тгр - 1.уз (ВОС) - ТЬг (Вц ) - РЬе - ТЬг (Вц ) - Бег (Вц ) - Суз (Тг 11) - ОМе НСООН) .Раствор 1,11 г (0,685 ллголя) ИЭСЬо -- Тгр - 1.уз (ВОС) - ТЬг (Вц ) - РЬе -- ТЬг(Вц ) - Бег(Вц ) - Суз(Тг 11) - ОМе в 10 мл смеси муравьиная кислота/уксусная кислота/вода (1; 7: 2) перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Смесь упаривают и остаток растирают с водой. Твердое вещество отфильтровываюг и сушат в вакууме, получают вышеуказанное соединение.УФ-спектр; Л (МеОН): 290 мк (е 6335), 280 мк (е 8470), 273 мк (е 3720), 216 мк (е 78400).Таким же образом, применяя другие гептапептиды из примеров 40 и 41 в качестве исходных веществ, получают этил-, прогшл-, изопропил-, бутил-, изобутил-, амил-, 2-метилбутил-, гексил-, гептил-, октил-, нонил-, децил-, ундецил-, додецил-, тридецил- и тетрадециловый эфиры указанных соединений.П р и м е р 43. Метиловый эфир трет.- бутилоксикарбонил-аланил-глицил-Б - тритил-цистеинил-М.-трет. бутилоксикарбониллизил - аспарагинил-фенилаланил - фенилаланил-триптофил-У -трет, бутилоксикарбонил-лизил-О-трет.-бутил - треонил-О-трет.- бутил-серил- тритилцистеина (ВОС -10 5 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 Аа- - С 1 - С з (Тпг) - 1.уз (ВОС) - Азп -- ГЬе - РЬе - Тгр - 1 уз(ВОС) - ТЬг(Вцг ) - Яег(Вц ) - Суз(Тг 11) - ОМе).раствору 0,775 г (0,624 ммоля) гидразида гептапептида ВОС - Аа - С 1 у -Суз (Тгг - 1 уз (ВОС) - Азп - Р 1 те - РЬс - ИНИН, в 9 мя дпметплформамида, охлажденному до - 20 С, добавляют 2,1 н. безводный хлористый водород в этилацетате (1,56 ммоля), затем 0,0863 дгл (0,749 ммоля), трет.бутилнитрита, смесь перемешивают при - 15 С 15 лгин. Раствор 0,900 г (0,624 ммояя) метилового эфира гептапептида Н - ТЬг - 1.уз (ВОС) ТЬг (Вц ) РЬе - ТЬг (Вц ) - 8 ег (Вц ) - Суз (Тг 11) -- ОМе НСООН и 0,373 лгл (2,184 лглголяг Х-этилдиизопропиламина в 5 лгл диметилформамида охлаждают до - 15 С и добавляют к указанному выше раствору прн - 15 С.Полученную смесь перемешивают при - 15 С 1 ч и при комнатной температуре 3 дня, Растворитель отгоняют в вакууме, остаток растирают с 1 н. лимонной кислотой, фильтруют, осадок промывают водой, и сушат над пятиокисью фосфора в вакууме. Высушенный остаток растирают с небольшим количеством метанола, отфильтровывают и сушат, получают вышеуказанное соединение, аминокислотный анализ;1.уз 2,06, цистеиновая кислота 1,75, Азр 0,9, ТЬг 1,93, бег 0,97, Сг 1 у 1,00, А 1 а 0,88, Рйе 3,10.Таким же образом, применяя другие алкильные эфиры гептапептида, получают также этил-, пропил-, изопропил-, бутил-, изобутил-, амил-, 2-метилбутил-, гексил-, гептил-, октил-, нонил-, децил-, ундецил-, додецил-, тридецил- и тетрадецпловый эфиры указанных соединений.П р и м е р 44. Метиловый эфир циклического дисульфида трет. бутилоксикарбонил-аланил-глицил - цпстеинил-Р -трет. бу- тилоксикарбонил-лизил-аспарагинил-фенилаланил-фенилаланил-триптофил-Х- -трет.бутилоксикарбонил-лизил-О-трет, бутил-треонил-фенилаланил-О-трет. бутил-треонил-О- трет.бутил-сернл - цистеина (ВОС - А 1 а --- Сг 1 у - Суз - 1.уз (ВОС) - Азп - РЬе - РЬе -- Тгр - 1.уз (БОС) - ТЬг (Вц ) - РЬе - . ТЬг (Вц) - Бег (Вц) - Суз - ОМе),0,898 г (0,345 лгмоля) метилового эфира тетрадекапептида ВОС - А 1 а - Сггу - Суз (Тг 11) - 1.уз (ВОС) - Азп - РЬе - РЬе - Тгр -- 1.уз (ВОС) - ТЬг (Вц г ) - РЬе - ТЬг (Вц) -- Ьег (Вц) - Суз (Тг 11) - ОМе растворяют в 200 м,г теплой уксусной кислоты. Раствор охлаждают до комнатной температуры и по каплям добавляют к раствору 5%-ного пода в метаноле (175 м.г, 3,45 лглголя) в течение 1 ч. Смесь перемешивают еще 1 ч, охлаждают до 0 С и добавляют 1 н. 15 дгл водного раствора гипосульфита натрия для разрушения избытка иода. Растворитель отгоняют, остаток рас27 28 Г 1111-Л а- Иц- Суз-,-.лБП-т)ге Е-Тг -1 р -1 ЬгЕ-ТЬП - Бег- С.в -О."1 е 1 К раствору 0,345 ммоля циклического дис ьда 1р 1 дв от е -,э1 г,АЗ 1 г 1 тч 1 Пвт) р е Т)11 1 у) Я 0 Ас Ц.Ц -1 1 з Гат3Б ег 1 эц) - Сц 3 - О.т: СД ЯБ 1 СО-).уз-ЛЯ:-1)Ье-РЬе - Тгр-Хуз-ТЬ -Р 1)е-Т 1 тг -Бег-ЗНСН(З, )СН ) (;) тирают с водой и сушат над пятиокисью фосфора в вакууме, получают вышеуказанное соединение. Таким образом, применяя другие линейные защищенные эфиры тетрадекапептида, получают этил-, пропил-, изопропил-, бутил-, изобутил-, амил-, 2-метилбутил-, три(0,345 ммоля) в 29 мл концентрированной соляной кислоты при псремешивании в атмосфере азота в течение 10 мин при 0 С добавляют ледяную уксусную кислоту (290 мл) и раствор лиофилизуют. Остаток растворяют в 5% -ной уксусной кислоте и снова лиофилизуют. Остаток снова растворяют в 0,2 М растворе я 1 етата аммония, вносят в колонку с карбокси)летилцеллюлозой (Ватман СМи элюируют 0,2 М аммоний - ацетатным буфером. Элюат лиофилизуют, остаток подвергают разделительной хроматографии колонке с хи)лически модифицированныч сшитым декстраном (Сефадекс Ст) М), уравновешенным вначале нижней фазой смеси бутанол/уксусная кислота/водя (4: 1: 5), затем для десорбции метилового эфира соматостатина применяют верхнюю фазу, Чистые фракции объединяют, упаривают и лиофилизуют, получают вышеуказанное соединение в виде уксуснокислои соли; УФ-спектр: Х, (МеОН): 290 мк (е 4345), 287 мк (е 4385), 268 мк (е 4090)265 мк (е 3900), 215 мк (е 38305), ЯМР (ДМСО - с 1 с) б 3,63 (5 ЗН ОСНз)Г 1 овторная лиофилизация этой соли из воды дает вышеуказанное соединение в виде свободного основачия. Аминокислотный анализ: 1.уз 2,00; цистеиновая кислота 1,28, Азр 0,95, Т 11 г 1,91, 8 ег 0,97, С)1 у 1,00, А 1 а 0,94, половина Суз 0,30, Р 1)е 3,01.Таким же образом, применяя другие циклические дисульфиды формулы 111, получают также этил-, пропил-, изопропил-, бутил-, изобутил-, амил-, 2-метилбутил-, гексил-, гептил-, октил-, нонпл-, децил-, ундецил- и тетрадециловый эфиры, соответствлЬщих вышеуказанному соединению,П р и м е р 45. Метиловый эфир соматостатина; метиловый эфир циклического 5 дисульфида аланил-глицил - цистеинил-лизил-аспарагинил - фенилаланил - фенилаланил-трпптофйл-лизил - треонил - фенилаланил-треонил - серил-цистеина; децил-, додецил-, тридецил- и тетрадециловый эфиры, соответствующие вышеуказанному соединению.10 Г 1 р и мер 46, Метиловый эфир соматостатина; метиловый эфир восстановленной формы аланил-глицил - цистеинил-лизиласпараганил - фенилаланил - фенилаланилтриптофил-лизил - треонил - фенилаланил.треонил-серил - цистеина (Н - А 1 а - С)1 у -- Суз - 1.уз - Азп - Р 1)е - Рйе - Тгр - 1.уев - Т 1)г - Р 1) е - ТЬг - Бег - Суз - ОМе) .Г 1 о методике примера 45, но заменивциклический дисульфид эквимолярным ко.,мп; с; ом соединения ВОС - А 1 а - С)1 у -- Суз (ТГР) - 1.уз (ВОС) - Азп - Р 1)е - - - Рг,с -- , 1 р - - уз (ВОС) - Т 1)г (В 11) - Р 1 С - Тг (Бн ) - Ьег (Вц) - Сузт-;ТГ 1) - 11 С, получают вышеуказанное соеД 111.111Обработ 1 сой метилового эфира соматоСТят)П 1 а ИЗ Прн 1 ЛЕра 45 днтИОтрЕИтОЛОМ ИЛИ бисульфито 1 т 1 натрия с Гидролизом Дитиосульфатного производного, полученного при этом, по .учают вышеуказанное соединение,;яКИ)т 1 жЕ образоМ, Но ПриМЕ 11 яя друГИЕалкильные э 1 риры соматостатина формул) , тт А 1 Я 1, 11 Н РСООА 111, полученные по примеру 45, или другис линейные защищенные тетрадекапеп тидные эфиры, получают также этил-, пропил-, йзопропил-, буГил-, изооутил-, амил-, 2-метилоу Гил-, гексил-, гептил-, октил-, нонил-, децил-, ундецил-, додецил-, тридецили тетрадециловый эфиры, соответствующие вышеуказанному соединению. Формула изобретения Способ получения пептидов формулы639440 29 30 РСН С(е(Г)СО - Ее (РОС)-ГЕг. - Рге - РЕе-г.рее(РОС) - гьг (Ее )-Рее-РГ г (ее) - Бег (Ре)-Г)(СРе) СРР -;Составитель В. ВолковаТехред С, Антипенко Корректор И. Симкина Редактор Р. Антонова Заказ 1090/151 б Изд.341 Тираж 517 Подписное 11110 Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, )К, Раушская наб., д, 45Тип. Харьк. фил, пред. Патент где К) - Н - Иу - 1 д 1 у - А 1 а - С 1 у - МН,Н - Иу - Иу - Иу - А 1 а - Иу - Г)Н илиН - 1.ец - Иу - Иу - А 1 а - Иу ХН; К - Нили СООН; или К - Н или МНК, где Кз - ацил или бензоил; К - водород;или К - Н - А 1 а - Иу - МН; К 2 - С ООАЬ, где АВ - прям оценочный или разветвлен, ый алкил С) - С)4, о т л и ч а ющ и й с я тем, что линейный пептид формулы Тг 1 - ЯСНСН(К 4) СО - 1.уз (ВОС) Азп - Р 1)е - Р 1 О- - Т р - 1 тз (ВОС) - Т 1)г -где К и К 4 имеют вышеуказанные значения, с последующим удалением всех оставшихся защитных групп соляной кислотой,04.06.75 и ри К - Н - ,Иу - Иу - А 1 а -- Иу - МН, Н - Иу - Иу - Иу - А 1 а - Иу -(Вц( ) - Р 1)е - Тпг (Вц) - Бег (Вц) - .чНСН (К) - СН,5 - Тг 1 (11),где К-" - Н или СООН; К 4 - ВОС - Иу - Иу - Аа - Иу - МН; ВОС - Иу - Иу - 5 - Иу - А 1 а - Иу - ХН плп ВОС - 1.ец -- Иу - И - А 1 а - С) 1 - М Н;или Кз - Н; К 4 - Н или МНКз, где Кзимеет вышеуказанное значение;илп К - СООА 11.; Кл - ВОС - А 1 а - 10 СР 1 - МН;окисляют иодом или роданидом с получением соответствующего циклического дисульфидного производного формулы- Н пли Н - 1.ец - Иу - Иу - А 1 а - Иу -15 - МН; 08.07.75 прп К) - водород или ХНКз,где Кз - ацил или бензоил, Кв - водород; или К - Н - А 1 а - Иу - МН; К 2 -СООА 11, где А 11 - алкильная группа с 20 прямой или разветвленной цепью С) - С)л.5 1 О 15 20 25 зо 35 40 45 50 55 60 65 К холодному (ледяная,баня) раствору 6,4 г (20,03 ммоля) Н - Ссу - А 1 а - Сс 1 у - - - ОМе СН,СООН в диметилформамиде (30 мл) при перемешивании дооавляют Ч-этилморфолин (2,8 мл), затем раствор 8,5 г (24 ммоля) ВОС - Сс 1 у - ОТор в диметилформамиде (20 мл), Раствор выдержи.вают на ледяной бане 2 дня. Растворитель отгоняют, остаток растворяют в метаноле и продукт осаждают диэтиловым эфиром, кристаллизуют из этилацетата, получают вьипе указанное соединение, т. пл. 103 - 105 С и 141 С (диморфность); ЯМР 1,25 б (ЗН), 1,38 б (9 Н), 3,65 б (ЗН).Л р и м е р 5. Гидразид трет. бутилоксикарбонил-глицил-глицил - аланил - глицина где Ег и я 4 имеют вышеуказанные значения, с последующим удалением всех оставшихся зашптных групп соляной кислотой.П р и м е р 1. Трифторацетат метиловогоэфира аланил-глицина (Н - А 1 а - ,сл 1 у -ОМеСРЗСООН) .10 г ВОС - А 1 а - Иу - ОМе (45 лсмолей)растворяют в 100 мл. холодной (ледянаябаня) трифторуксусной кислоты. Растворперемешивают 1 ыс,при 0 С и отгоняютрастворитель, сстаток,растворяют в метаноле, добавляют к диэтиловому эфиру и выпавший в осадок продукт отфильтровывают.П р и м е р 2. Метиловый эфир трет. бутилоксикарбонил - глицил-аланил - глпцина(В ОС - Ы у - Л а - Сс 1 у - ОМе),К холодному (ледяная баня) растворуН - А 1 а - Ссу - ОМе СНзСООН (45 молей)в дисметилфомамиде (50 лил) добавляютМ-этилморфолин (рН 8), затем охлажденный раствор 18 г ВОС - Сс 1 у - ОТср (45 лслсолей) в диметилформамиде (50 мл). Растворвыдерживают на ледяной бане 2 дня. Растворитель отгоняют, продукт чистят хроматографией на колонке с силикагелем, используя в качестве элюента смесь этилацетат (метанол) пиридин (98: 1: 1). Продукткристаллизуют из смеси этилацетата .и петролейного эфира и получают вышеуказанное соединение, т. пл, 98 в 1 С, ЯМР(120 мл) и раствор перемешивают при 0 С1 чае. Расвворитель отгоняют, остаток растворяют в метаноле, продукт осаждают добавлением диэтилового эфира и отфильтровываютт.Пр и мер 4. Метиловый эфир трет. бутилоксикарбонил - глицил - глицил-аланилглисцнна (ВОС - Сс 1 у - (л у - А 1 а - Ыу --- ОМе) .(В ОС - Иу - Ы у - А 1 а - Ыу - ХН -- 1 г)К холодному (ледяная баня) раствору 2,5 г (6,7 ммолей) ВОС - Ссу - Ссу - Ла - Ссу - ОМе в метаноле (50 лсл) при перемешивании добавляют 2,5 мл гидрат гидразина. Раствор перемешивают при 0 три часа и при комнатной теяпературе в течение ночи. Осадок отфильтровываютпромывают метанолом, сушат, получают выше указанное соединение; аминокнслотный анализ: Ссу 3; А 1 а 0,99.П р и м е р б. Метиловый эфир трет.бутилоксикарбонил - глицил - глицил - аланилглицил-тритил-цистеинил-М. -трет.бутилоксикарбонил-лизил - аспарапинил - фенилаланил-фенилаланина. (ВОС - Сс 1 у - 61 у -- Л 1 а - Ыу - Суя (Тг 1) - 1.уя - (ВОС) -- Аяп - Р 11 е- - РЬе - ОМе) .К раствору 1,57 г (4,2 лсмоля) ВОС -- Ыу - Ссу - А 1 а - 6 у - ВН - МНг в диметилсульфоксиде (25 мл) и диметилформамиде (25 мл) добавляют 2,04 н. раствор хлористого водорода в этилацетате (5,15 мл) при - 10 С, Смесь охлаждают до - 12 С и добавляют 0,61 мл (5,2 ммоля) трет.бутилнитрита. Выдерживают прои - 10 С 15 ясин, охлаждают до - 15 С и к смеси добавляют вначале 1,8 лсл (рН 8) И-этилдиизопропиламина, затем раствор 4,5 г (4,18 лсмолей) Н - Суя (Тг 1) - 1.уя (ВОС) - Аяп - РЬе -- Рпе - ОМе и вновь 0,72 мл Х-этилдиизолропиламина в диметилформамиде (25 мл). Смесь перемешивают один час при - 10 С и в течение ночи при комнатной температуре, Упаривают, остаток растворяют в метаноле, продукт осаждают водой и кристаллизуют из метанола, получают вышеуказанное соединение; аминокислотньсй анализ: 1.уя 1,07; Аяп 0,97; Сс 1 у 3,27; Аа 1,0; Р 1 се 2,08; цпстеиновая кислота 1,35.П р и м е р 7. Гидразид трет.бутилоксикарбонил-глицил глицил-аланил - глицил-Ь- тритил-цистеинил-Х - трет.бутилоксикарбо,нил-лизил - аспарагинил - фенилаланил - фенилаланина. (ВОС - Ссу - Ссу - А 1 а - Сс 1 у -- Суя (Тг 1) - 1.уя (ВОС) - Ляп - РЬе - Р 1 е -- йН 1 Нг).К холодному (ледяная баня) раствору 0,9 г (0,66 моля) ВОС - Иу -- 6 у - А 1 а - 6 у - Суя (Тг 1) - 1.уя (ВОС) -- Аяп - РЬе - Р 11 е - ОМе в диметилформамиде (25 мл) добавляют 1,5 мл гидрата гидразина. Раствор перемешивают 18 час при комнатной температуре, Растворитель отгоняют, остаток растирают с метанолом и сушат над пятиокисью фосфора, получаюг ьышеуказанное соединение; аминокислотный анализ: 1.уя 1,10; Ляп 1,00; 61 у 3,33; А 1 а 1,0; РЬе 2,14; цистеиновая кислота 1,35,П р и м е р 8. Трет.бутилоксикарбонилглицил-глицил.аланил-глицил- тритилцистеинил-К. - трет.бутилоксикарбонил-лизиласпарагинил - фенилаланил - фенилаланилтриптофил-М - трет.бутилоксикарбонил-ли639446 ВОС 61-С 1 ЛП 01,9 С 5 1 а ЭОС ) Я.ЧП ЬЕ Р);В ТГР-иВ (ВО 1 -1- ТЬг(Ви )-Р 1 Е - ТЬ.г(Вц ) - гг(Вц ) - С,1- - С"1 З 5 4555 50 зил-О-трет,бутил-трео гил - ре 111 лаланил-О- трет.бутил-треонил - фенилалаил - О-трет, - бутил-треонил-О-трет.бутил - серпл - 8-тритилцистеин. ВОС - 6 у - 61.,) - Л)2 - 61 у - Суз (Тг 1) - .уз (ВОС) - Лзп - Р)е - Р)е -Тгр1.уз (ВОС) - Т 1)г (Вц ) - РЬе -- Тпг (Вц ) - Вег (Вц ) - Суз (Тг 1)ОН 1.К раствору 800 мг (0,59 ял 1 оля) ВОС -- 6 у - 61 - А а - 6 у - Суз ( г 1) - .уз - (ВОС) - Авп - Рпе - Р)е - АНИН, в диметилформамиде (12 мл), охлажденному до -- 20 С, добавляют 1,85 н. раствор хлористого водорода в этилацетате (0,795 лл, 1,475 л 1 мо гя). Смесь охлаждают до - 15 С и добавляют 0,081 мл (0,71,илоля) третбутилнитрит, раствор перемешивают 15 лин, Раствор 81 бл 1 л (0,59 л 111 оля) Н - Тгр - 1.ув - (ВОС) - Т)г (Вц ) - Р)е - Т 1)г(Ви ) - Бег - (Вц) - Суз (ТТИ) - ОН и 0,354 лл (2,0 б л 1,ноля) М-этилдиизопропиламина в диметилформамиде (б .Нл) охла)кдают до - 15 С и добавляют к реакционной смеси, которую перемешивают при - 15 С 1 час и при 25 С 18 час. Растворитель отгоняют, остаток растирают с ледяной лимонной кислотой, отфильтровывают, промывают водой и метанолом, сушат, получают вышеуказанное соединение; аминокислотный анализ; Хуз К этому соединению добавляют холодную концентрированную соляную кислоту (23 лл) на бане с ледяной водой в атмосфере азота при сильном перемешивании в течение 10 л 1 ин., затем добавляют ледяную уксусную кислоту (300 лл) и раствор лиофилизуюг. Остаток растворяют в воде и снова лиофилизуют, остаток растворяют в 0,01 н. водном растворе ацетата а м мония и вносят в колонку с карбоксимет 1 илцеллюлозой (Ватман СМ, 2,5 ХЗО сл). Продукт элюируют 0,0 б н.,раствором ацетата аммония (буфер). Очищенное вещество лиофилизуют и получают вышеуказанное соединение в виде белого Осадка в виде его укоусной соли; л,. МеОН 282 11 к (в 52 бО), 289 мк (в 4730); аминокислотный анализ: .уз 2,28; Азп 1,05; Т 1)г 1,95, Бег 0,98, Суз 2,34, 61 у 3,00, Аа 1,05, Р)е 3,12. Повторная лиофилизация соединения дает соединение в виде свободного основания, амНокислотный анализ: .уз 2,10; Азп 1,04; ТЬе 1,80;5 ег 0,95; Суз 2,17; 61 у 3,00; Ла 1,07; Р 1 те 2,99.Лналогично мож 11 о получить вьппеуказан 1 Ое соединение, применяя вместо Йода родан по методу Хиски и Смита.Пр им ер 10. Метиловый эфир трет.- бутилоксикарбонил-лейцил - глицил-глицило 5 20 25 191; Азп 0,96; )г 1,б; Бег 0,49; 61 у 2,82; Ли 1,00; Р)е 2,80,П р и м е р 9. Циклический дисульфид глпцпл-глицил-аланил - глицил - цистеинил- ЛИЗИЛ - аСП 2 РаГИНИЛ - фЕНИЛ 2 ЛЯНИЛ - фЕНИЛ- ала 1 шл 1-Триптофил - лизил - треонил-фенилаланил-треонил-серил-цистеина. (Н - 61 у -- С 1 у - Л 2 - 6 у - Суз - 1 ув - Лзп - Р)е -- Суз - ОН).0,871 г (0,32 л 1 л 1 огя) ВОС - 61 у - 6 у -- Л 1 а - 6 у - Суз (Тг 11) -уз (ВОС) - Азп -- Р)е - Р)е - Тгр - .уз (ВОС) - Т 1 г (Вц) -- Р)е - Т)г(ВП ) - Бег (Вц ) - Суз(Тг 11) -О.11, твома)О 1 ч летянол ск 1/снои кислоте (ОО,11,1) и по каплям дооавляют к 0,5%- ному раствору иода в метаноле 150 лл, (30 л;1 о.1 еи) при перемешиванип 1 час прп комнатой температуре. Смесь продолжают перемешивать еще 45 минут, затем охлаждают на льду и добавляют 1 н. раствор о л. г 1 И 1 осу;ьфита натрия в воде для разрушения избытка йода (бесцветный раствор). Растворитсль отгоняют, остаток растирают с водой, сушат и сухой продукт растира)от с изопропиловым эфиром, получают циклический дисульфпд гексадскапсптпда формулы аланил-глицИа ( )ОС -- .си - 6 у - 61 у - А 1 а - Спу - ОМе 1.2 г (5,35,112 о, еи) раствора ВОС - 61 у - - /- 6 у - А 2 - 61 у - Оге ь трпфторуксгной кислоте (2 О .11 л) перемсшиваюз при "С в течение ч са, Раство.;итель Отгоняют, остаток,растирают с эфиром, ссадок собирают и сушат, получают тетрапсптид формулы- 61 у - ау - А 1 а - у -- .,Ме, в ьпдс тр 1- 1)то ксусной ссл 1;. 5,3 О .;121 ояя рас 1 вор; пептида. а г11 ло 1 я) ОС211 - Н 1,35 г (10,11,11 оля) 1-окспбснзтрпазола, 2,27 г)тн11 .11,110,1 е 11,1 дий 1 НП,Огексплкарбодим)гда и О,б 8 г М-э 1 илмор 1 ролина в д 11)1 етплформаМИДЕ (2 д Л,1) ПврСМЕШ)1 Ва 10 Т При 0 С 24 Чае. Осадок отфильтровываю:, фильтрат добав ля)о к диэт 11 ловому эфир) (200 л,1). ВыП 2 В 1 ПИЙ ОС 2 ДОК ОТ СЛЯ 10 Т и КР 11 СТаЛЛ 1 ЗУ 10". из смеси 1 етанола и изопропплового эфп;)а, ПОЛУЧ 210 Т УКазанОЕ ВЫШЕ СОСДППЕИПС; Т, ПЛ.1905 193 С 11" - 152" (С 1 диме тилформамид).П р и м е р 11. Гпдразпд трет.бутилоксикарбонил-лейцил - глпцил - глицил-аланил-глипина.ВОС - .е 11 - 61 у - 61 у - Л 1 а -- 6 у - 1 Н 1 Н,).2 г (4 1121 оля) раствора ВОС - 1.еп -- 6 у - 61 у - А 1 а - 6 у - О.Ме и 4,12 мл (80 ллолеи) пдрата гидразина в метаноле(50 мл) перемешивают,при 0 С 4 час. Смесь концентрируют упариванием до 4 лсл и добавляют к диэтиловому эфиру (200 мл). Осадок собирают, растворяют в метаноле (4 лгл) и добавляют к диэтиловому эфиру (200 мл). Выпавший осадок отделяют, сушат и получают указанное выше соединение, т. пл. 174 - 176,5 С; а," ,= - 12,0 (с = 1, диметилформамид).Прим ер 12. Метсиловый эфир трет.- бутилоксикарбонил-лейцил - глицил - глицил-алания-глицил-Я-тритпл-цистеинил-Х- трет. бутилоксикарбонил-лизил - аспарагинил-фенилаланил-фенилаланина (ВОС -- 1.ец - Сс 1 у 1 - ау - А 1 а - Иу - С уз (Тг 1) -- .1.уз (ВОС) - Азп - РЬе - Р 1 се - ОМе),0,15 мл (1,27 ммоля) трет.бугилнитрит добавляют к раствору 0,308 г (0,635 ммоля) ВОС - 1.ец - Ссу - Юу - А 1 а - Ыу - МНз в днметилформамиде (5 лгл) при - 20 С и 2,4 н, хлориетый водород в этила цетаге (0,66 мл, 1,59 ммоля) . Перемешивают 15 мин при - 90 С к смеси добавляют раствор 0,62 г (0,58 лгмоля) Н - Суз (Тг 1) -- 1.уз (ВОС) - Аяп - Р 1 се - РЬе - ОМе и 0,372 лгл диизопропилэтиламина в диметилформамиде (6 мл). Смесь перемешивают при - 20 С в течение часа и при 0 С 24 ч, затем добавляют к 200 мл дсиэтиловому эфиру. Выпавший осадок собирают, раство,ряют в метаноле (5 лгл) и добавляют к диэтиловому,эфиру (200 мл). Осадок отфильтровывают, сушат и получают вышеуказанное соединение с т,пл. 238 в 2,5 С.П р и м е р 13. Гидразид трет.бутилоксикарбонил-лейцил - глицил - глицил-аланил-глицил-Я-тритил-цистеинил-К -трет,бутилоксикарбонил-лизил-аспарагинил - фе - нилаланил-фенилаланина (ВОС - 1.ец -- 6 у - Ыу - А 1 а - 61 у - Суя (Тг 1) - .уя - (ВОС) - Азп - РЬе - РЬе - КНЯЖН) . 5 о 5 20 25 зо 35 40 Раствор 0,56 г (0,38 ммоля) ВОС -- 1.ец - Ссу - Ыу - Аа - Су - Суя -- (Тг 1) - 1.уя (В ОС) - Аяп - Рсе - Р)се -- ОМе и 0,74 мл гидрата гидразина в диметилформамиде (10 мл) перемешивают при 0 С 12 час и при 25 С 24 час. Раствор добавляют к 100 лгл диэтилового эфира, выРаствор 0,23 г (0,081 лсмоля) ВОС -- 1.ец - Ссу - 61 у - А 1 а - бу - Суз (Тг 1) - 1.уз (ВОС) - Азп - РЬе - РЬе - Тгр - . - 1.уз (БОС) - ТЬг (Вц ) - Р 1 се - Тйг (Вц) - Яег (Вц) - Суя (Тг 1) - ОН в уксусной кислоте (90 лгл) по каплям в течение часа прибавляют к раствору 0,5%-ного иода в метаноле (41,5 мл, 0,81 ммоля). Запавший осадок собирают, растворяют в дпметилформамиде (3 мл) и добавляют к 100 лсл диэтилового эфира. Осадок собирают, сушат и получают вышеуказанное соединение, т. пл. 239 в 2 С; аминокислотный анализ: 1.уз 1,.05; цистеиновая кислота О,бб; Лзп 0,99; Оу 3,00; Аа 1,11; 0,5 Суз О 21; 1 ец О 96; Рсе 1 86. П р и м е р 14, Трет.бутилоксикарбониллейцил - гллцил-глпцил-аланил - глицил- тритил-цистеинилЧ -трет. бутилоксикарбонил-лизил-аспарагинил - фенилаланил-фенилаланил-триптофил - К. -трет.бутилоксикарбонил-лизил-О-трет.бутил - треонил-фенилаланил-О-трет,бутил - треонил-О - трет. бутил-серил-третил-цистеин (ВОС - 1.ец -- Сс 1 у - Ссу - Аа - Ыу - 1 Суя (Тг 1) - 1.уз (ВОС) - Азп - Рсе - РЬе - Тгр - 1.уя - (ВОС) - Тйг (Вц) - Р 11 е - ТЬг (Вц ) - Ьег - (Вц) - Суя (Тг 1) - ОН).0,03 мл (0,28 ммоля) трет.бутилнитрита добавляют к раствору 0,20 г (0,14 ммоля) ВОС - 1.ец - Сс 1 у - Сс 1 у - Аа - Сду - Суз (Тг 1) - 1.уз (ВОС) - Аяп - РЬе - Рйе - К 2 Нз в диметилоульфоксиде (2 мл) и диметилформамиде (4 мл) и 2,21 н. хлористого водорода в этилацетате 0,16 лгл (0,35 ммоля) охлажденному до - 20 С. Перемешивают 15 лсин при - 20 С, добавляют раствор 0,20 г (0,14 лсмоля) Н - Тгр - 1.уя (ВОС) -- Т 1 сг (Вц ) - Рсе - Таст (Вц ) - Бег (Вц ) Суя (Тп 1) - ОН НСООН и 0,08 мл (0,49 лгмоля) диизопрсспиламина в дисметилформамиде (5 лгл). Раствор перемешивают при - 20 С 1 час и при 0 С 24 час. Затем концентрируют до 2 мл и добавляют к диэтиловому эфиру (100 мл), осадок собирают, промывают, водой (2 Х 5 лгл), метанолом (2 х 5 лсл) и сушат, получают вышеуказанное соединение; аминокислотный анализ; Ууз 1,92; цистеиновая кислота 0,93; Ляр 0,93; Т 1 сг 1,38; Ьег 0,66; б 1 у 3,00; А 1 а 1,02; Суз 0,39; 1.ец 0,93; Р 1 се 2,70.П р и,м е р 15. Циклический дисульфид лейцил-глицил-глицил - аланил - глицилцистеинил-лизил-аспарагинил - фенилаланил-фенилаланил-триптофил - лизил - треонил-фенилаланил-треонил-серил - цистеина тем раствор перемешивают при комнатной температуре 1 час и охлаждают до 0 С. Вводят 1,62 мл гипосульфита натрия до полного обесцвечивания раствора. Растворитель отгоняют, осадок отделяют, сушат, растирают с эфиром, сушат и облучают циклический дисульфид гептадекапептида формулы(7:1:2) перемешивают при 25 С 6 час. Растворитель отгоняют и остаток растирают с диэтиловым эфиром, получают вышеуказанное соединение; аминокислотный анализ: 1.уз 2,23; цистеиновая кислота 1,38; Азр 1,00; Туг 214; Ьег 0,86; РЬе 3,24. П р и м е р 21. Трет.бутилоксикарбонилглкцил-глицил - глицнл - аланил - глицил-Я- тритил-цистеинил-Х - трет.бутилоксикарбо. нпл-лизил - аспарагинил-фенилаланил - фенилаланил - триптофил-х-трет,бутилоксикарбонил-лизил-О-трет.бутил - треонил-фенилаланил-О-трет.бутил - треонил-О-трет.- бутил-серил- тритил-цистеин (ВОС) --- Ыу - 61 у - б 1 у - Аа - Ыу - Суз (Тг 1) -- 1.уз (ВОС) - Азп - РЬе - Р 11 е - Тгр - 1.уз (ВОС) - Тпг (Вц ) - РЬе - Туг (Вц) - Бег (Вц) - Суз (Тг 1) - ОН).0,04 мл (0,34 ммоля) Трет,бутилнитрита добавляют к охлажденному до - 20 С раствору 0,076 г (0,176 смоля) ВОС - Сг 1 у -- Су - Су - Аа - Сгу - М 1-1 МН, в смеси диметилсульфоксида (1 мл), диметилформамид (2 мл) и 2,5 н. раствора хлористого Раствор 0,285 г (0,103 лглоля) ) ВОС -- Сгу - Сгу - Су - А а - Сгу - Су (Тг 1) - 1.ув - (ВОС) - Азп - РЬе - РИе - Тгр - 1.ув (ВОС) - ТЬг (Вц ) - РЬе - ТЬг (Вц ) -- Бег (Бц") - Суз (Тгй) - ОН в уксусной кислоте (200 лгл) добавляют к раствору 0,5-ного йода в метаноле (52 мл, 1,03 ммоля) в течение 60 мин, продолжают перемеРаствор этого циклического дисульфи. да гептадекапептида (0,1 млоля) в конц, соляной кислоте (10 мл) перемешивают при 0 С 10 мин. в атмосфере азота. Добавляют 100 мл уксусной кислоты и лиофилизуют. После повторной лиофилизации из воды (100 лил) остаток хроматографируют на колонке с химически модифицированным сшитым декстраном (Сефадекс Сг - 25, ЗХ 50 см) суспендированным в нижней фазе смеси бутанол/уксусная кислота/вода (4: 1; 5). Для десорбции используют верхнюю фазу, получают почти чистый гептадекапептид. с истые фракции объединяют, упаривают и лиофилизуют, получают вышеуказанное соединение в иде уксуснокислой соли.УФ-спектр, Х(МеОН) 283 лгк (в 6702), 289 лгк (г 6350). Повторная лиофилизация 10 15 20 25 водорода в этилацетате (0,176 мл, 0,44 ммоля). После первмешивания при - 26 С в течение 15 мин к смеси добавляют раствор 0385 г (0,16 ляолегг) НСу (Тг 1) 1.ув (ВОС) - Азп - Рйе - Р 1 ге - Тгр - 1.у (ВОС) - ТЬг (Вц ) - Р 1 ге - Тгг (Ви ) - Бег (Вц) - Суз (Тг 1) - ОН НСООН и 0,12 мл диизопропилэтиламина в диметилформамиде (5 мл). Раствор перемешивают при - 20 С 1 час, затем температуру поднимают до 0 С и перемешивают 1 час, затем перемешивают вще 20 час при 20 С. Раствори- тель упаривают и остаток добавляют к диэтиловому эфиру (100 мл). Осадок собирают, промывают водой, метанолом и сушат, получают вышеуказанное соединение; аминокислотный анализ: 1.уз 2,30; цистеиновая кислота .1,42; Азр 1,00; Т 1 гг 2,72; Бег 1,00; (я 1 у 3,84; А 1 а 1,00; Р 1 ге 3,34.,П р и м е,р 22, Циклический дисульфид глицил-глицил-глицил - аланил-глицил - цистеинил - лизил-аспарагинил-фенилаланилфенилаланил - триптофил - лизил - треонилфенилаланил-треонил-серил - цистеина шивание 60 лин при комнатной температуре, Раствор охлаждают до ОС и добавляют 1 н. 2,06 ммоля раствора гипосульфита натрия, для обесцвечивания. Раствори- тель отгоняют, маслянистый остаток добавляют к воде (100 мл), Выпавший осадок отфильтровывают, сушат и получают циклический дисульфид гептадекапептида формулы продукта из воды дает вышеуказанное соединение в виде свободного основания; аминокислотный анализ; Еуз 2,0; цистеиновая кислота 1,42; Азр 1,09; Тйг 1,89; Бег 0,91; Сг 1 у 3,64, А 1 а 0,98; Р 11 е 2,95,Аналогично можно получить вышеуказанное соединение применяя вместо иода родан по методу Хиски и Смита,П р и м е р 23, А,Я-дитритил-цистеинил- Ктрет.бутилоксикарбонил-лизил-аспарагипил - фенилаланил-фенилаланил - триптофил-Х -трет.бутилоксикарбонил - лизил-О- трет.бутнл - треонил - фенилаланил - О- трет.бх тил - треонил-О-трет.бутил - серил-третилтиоэтиламид, (ТгП) - Суз (Тгй) -- 1.уз (ВОС) - Азп - РЬе - РЬе - Тгр - 1.уз (ВОС) - Тйг (Вц) - РЬе - ТЬг (Вц) - Яег (В и ) - Х Н С НС Н.Я - -Тг 11.639446 Раствор 0,230 г (0,083 ммоля) ВОС - еа.у- Ы ч-ли- Иу - Суя (Тг Л) -Ь уя (ЗОС, - ляп-РЬ е-ТЪе- Тг р-.-я(БОС)- -ТЬг (Ви )-ГЬе-Т 1 т 1 (Вц)-Бег (Би")-ЪЫС 11. СН,5 -Тгй2 Раствор 0,80 г (0,637 ммолей) пидразида пентапептида Тг 1 - Суя (Тг 1) - 1.уя (ВОС) - . - Ляп - Рйе - РЬе - ИНСАН, в сух;,м днмевилформамиде (9 мл) и охлаждают до - 20 С. Добавляют к мему 2,4 н.распвор х,;орнстого водорода в этилацетате (0,691 ммоля), затем 0,0872 мл (0,764 ммоля) трет.бутнлннтрита. Смесь перемешивают 15 лин при - 15 С. Р,аствор 0,852 г (0,637 ллголя) Н - Тгр - 1.уя (ВОС) - ТЬг (Вц) -- Рпе - ТЬг (Вц ) - Бег (Вц) - ХНСНСН,Ь - ТгИ в димепилформамиде (8 лл), содержащий 0,272 мл (1,59 ммоля) М-этил-днизопропиламина, охлаждают до - 15 С и по каплям добавляют к реакционной смеси. Перемешивание продолжают при - 15 С 1 час и при,комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь упаривают в вакууо 1 е, остаток растирают с водой, фильтруют, промывают вюдой, сушат над пяпиокисью фосфора. Остаток хроматографируют в колонке с силикагелем (163 г), продукт элювруют хлороформом, содержашим 3% метаиола и 0,3% лиридина, Чистый продукт кристаллизуют из омеои метанола с изопропидовым этиром и получают вышеуказанное соединенне с т. пл, 163 - 180 С (разл.).Найдено, %: С 69,24; Н 7,09; М 8,9.С 14 Л 18 ой 1601 вЬыВычислено, %: С 69,85; Н 7,04; 1 ч 8,76.П р,и м ер 24. форъюиат 5-трипилцистеинил - И-трет.бутилоксикарбонил - лизиласпарагинил - фенилаланил - фенилаланилтриптофил-М- -трет.бутилоксикарбонил - лизил-О-трет. бутил-треонцл - фенилаланил-О- трет.бутил-треонил-О-трет.бутил - серил - 2- тритилпиоэвилам яда (Н - Суя (Тгй) - 1.уя (ВОС) - Аяп - Рйе - РЬе - Тгр -- 1.уя(ВОС) - Т 1 г (Вц) - Р 11 е - ТЬг (Вц ) -- Яег (Вц) - КНСНСН;8 - Тп 1 НСООН) .Раствор 0,909 г (0,355 ммоля) ундекапептида Тгй - Суя (Тп 1) - Суя (ВОС-- Аяп - Р 11 е - Рйе - Тгр - 1.уя (ВОС) -- Тйг (Вц) - РЬе - Т 1 и. (Вц) - Бег(Вц) -- ХНСНСНгЬ - ТгИ в омеаи 20 мл уксусной кислоты (муравьиной кислоты) воды (7: 1: 2) перемешивают в течение, ночи при комнатнюй температуре. Растворитель отгоняют, остаток растирают с водой, полученный осадок отфильтровывают, промывают водой и сушат вал пятиоиисью фосфора, получают вьгшеукаэанное соедоневие; амянокислотный анализ: 1.уя 2,03; Аяр 1,00; Зег0,87; РЬе 2,9 цистевнювая кислота 0,90;Тйг 1,85,П р и м е р 25. Трет.бутилоксикарбоннллейцвл-глицил-глвцил-аланил - глицил - 5 тритнл - ццстеннл-Я- трет.бутилоксикарбонил-лизил-аспарапинил - фенвлаланил - фе 1 Оннлаланил - триптофил-Х -трет.бутилоксиЕкарбонил - лизил - О-трет.бутил - треоиилфенилаланил-О-трет.бутил-треонил-О- трет.- бутил - серил - 2 - тритилпиоэтиламид(ВОС) - 1.ец - 5 у - 61 у - А 1 а - 61 у -- Суя (Тп 1) - 1.уя (ВОС) - Аяп - РЬе -- РВе - Тгр - 1.уя (ВОС) - Тйг (Вц) -- Рйе - Тпг (Вц) - Яег (Вц )-НСНСНЯ - Тпг.К,раствору 0,066 г (0,136 ммоля) пидразила пентапептида ВОС - 1.ец - 61 у - б 1 у -- Аа - 6 у - ХНХН, в сухом диметилформамиде (3 мл), охлажденном до - 20 С,добавляют 2 н. 0,175 мл соляной кислоты вэтилацетате, затем 00186 мл (0,13 ммоля)трет-бутилнитрита. Смесь перемешиваютпрн - 15 С 15 мия. К реакционной омеснпю каплям добавляют раствор 0,315 г(4 мл), содержащий 0,082 мл (0,476 люмолей) К-этплдиизопропиламина, охлажден.ного до - 15 С, перемешивание,продолжают при - 15 Счае и при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесьвыпаривают в вакууме, остаток, растираютс охлажденной на льду 1 н,лимюнной кислотой, фильтруют и промыва 1 от водой.4 Твердый остаток распирают с метановом исушат,над пят 1 иокисью фосфор апюлучаю гвышеуказанное соединение; аминюкислотный анализ: 1.уя 1,88; цистеиновая кислота0,84; Аяр 1,00; Тйг 1,94; Бег 0,97; 6 у 2.78;Аа 0,89; 1 ец 0,89; Рйе 3,11.П р и м е р 26. Циклический дисульфидлейцил-глицил - глицил - аланил - глицилцистеинил-лизил - аспарагинил - фенилаланил-фенцлаланил-триптофил-лизил-треонил.фенилаланпл - тэеонил-серил - 2-тиоэтил- амида639446 15 Вос -заец - О - 0; - лл - гу - с.а - ьув(ВОсг-лбгг-Рье-Рье-тГР- ьр (ЯОс) Тс, ЯцР и, е 1;, (Яц ) агфаН - С 1 цц- ц Ц-А 1 п ц- С уз - .ц 8 - АЗи - РЕе -РЕе-Тгр-.цв - ТЬ.ц - РпеТггег - ННЩСН 3 1 45 50 в уксусной кислоте,ОО мл) медленно добавляют при сильном перемешивании и раствору 0,211 г (0,83 ммоля) йода в 42 мг метанола при комнатной температуре, смесь перемешивают при комнатной температуре 60 мин, Медленно охлаждают до 0 С и добавляют 1 н. раствор гипосульфита натрия При сильном перемешивании к циклическому гексадекапептиду в концентрированной соляной кислоте (7 мл) при 0 С, в атмосфере азота, в течение 10,чин добавляют 90 мл уксусной кислоты, и раствор лиойилизуют, Остаток смывают 2"-ной уксусной кислотой в воде и лпофилизуют, Затем чистят хроматографией на колонке с химически модифициорованным сшитым декстраном Сефадекс Сг - 25 М (Зх 50 см) уравновешенным вначале в нижней фазе смеси бутанол/уксусная кислота/вола (4: 1; : 5), затем уравновешснным в верхней фазе, Для десорбции почти чистого гексадекапептида применяют верхнюю фазу. Чи стые фракции объединяют, выпаривают, лиофилизуют и получают вышеуказанное соединение в виде уксусной соли,УФ-спектр; Х,(Ме 01-) 290,чн (в 4290);282 лгк (в 4910), 273 мн (в 4630). Повторная лиофилизация продукта дает вышеуказанное соединение в виде свободного основания; аминокислотный анализ; .уз 2,01; Азр 1,35; Бег 0,93; А 1 а 0,99; Рге 2,52; цистеиновая кислота 0,66; Тгг 1,98; Сг 1 у 3,00; .ец 0,96.П р и и е р 27. Трет.бутилоксикарбонил-глицил-глицил - глицил-аланил-глицил-тритил - цистеинил-М -трет.бутилоксикарбонил-лизил.аспарагинил - фенилаланил-фенилаланил - триптофил-М- трет.бутилоксикароонил-лизил-О-трет.бутил - треонил-фенилаланил-О-трет.бутил - треонил-О-трет. - бутил-серил 2-тритилтиоэтиламид. (ВОС -- 6 у - Иу - бу Аа - 61 у - Суз (Тг 1) - . - 1.уз (ВОС) - Азп - Рге - Рге - Тгр - .уз -Раствор 0,224 г (0,083 ммоля) ВОС - Сгу - Сгу - Сгу - Аа - Сгу - Суз (Тг 1) - .уз (ВОС) - Азп - Рге - Тгр - .уз (ВОС) - Тгг (Вц ) - Рге - Тгг (Вц ) - Бег (Вц ) - МНСНСНЬ - Тг 1 в 160 м г уксусной кислоты медленно добавляют к сильно перемешиваемому раствору 0,211 г (0,83 лг,цоля) иода в метаноле (42 мл) при комнатной 1 О 15 20 25 30 35 40 в воде для разрушения избытка иода (обесцвечивание раствора).Ра створ итель отгоняют почти досуха, остаток растирают с холодной водой, фильтруют, промывают водой, сушат над пятиокисью фосфора, промывают эфиром и сушат, получают циклический дисульфид формулы- (ВОС) - Тгг(Вц ) - Рге - Тгг(Вц ) -- Яег(Вц ) - МНСН СН,Ь - Тг).К раствору 0,0608 г (0,141 ммоля) гидр азидпентапептида ВОС - 6 у - Сеу - Сг 1 у -- А 1 а - Сгу- АНИН, в сухом диметилформамиде (6 мл) и 2 мл диметилсульфоксида, охлажденному до - 20 С добавляют 2 н. соляную кислоту в этилацетате (0,176 мл, 0,352 яыоля), затем 0,019 лгл (0,196 ммоля) трет.бутилнитрита. Смесь перемешиваютпри - 15 С 15 мин. Раствор 0,327 г (0,133 ммоля) Н - Суз (ТП 1) - .уз(ВОС) - Азп - Рге -- Рге - Тгр - .уз(ВОС) - ТЬг (Вц) - Тге -- Тгг (Вц ) - 8 ег (Вц ) - ХНСН 2 СН 28 --- Тг в диметилформамиде (4 мл), содер. жащий 0,085 мл (0,494 ммоля) И-этилдиизопропиламина, охлаждают до - 15 С и по каплям добавляют к реакционной смеси. Продолжают перемешивание при - 15 С 1 ч и при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь упаривают и вакууме, остаток растирают с охлажденной на льду 1 н. лимонной кислотой, фильтруют и промывают водой. Твердый остаток растирают с метанолом и сушат над пятиокисью фосфора, получают вышеуказанное соединение; ам инокислотный анализ: .уз 2,31; цистепновая кислота 0,84: Азр 1,00; Тгг 2,26; Бег 1,19; Сгу 4,00; А 1 а 0,84; Рге 3,2. П р и м е р 28, Циклический дисульфид глицил-глицил-глицил-аланил-глицил - цистеинил-фенилаланил-фенилаланил - триптофил-лизил-треонил - фенилаланил - треонил - серил- тиоэтиламида температуре, После добавления иода перемешивание раствора продолжают при комнатной температуре 60 лсин, Раствор охлаждают до 0 С и медленно добавляют к нему 1 н, раствор гипосульфита натрия в воде для разрушения избытка иода (до обесцвечивания) . Растворитель отгоняют почти досуха, остаток растирают с холод-Т)гг (Вц)-РЬе -Тьг(Ви)- Бег(Зи)-М 1 СН СН 5 ной водой, фильтруют, промывают водой, сушат, получают циклический дисульфит Этот циклический гексадекапептид сильно перемешивают с 7 мл концентрированной соляной кислоты при 0 С в атмосфере азота в течение 10 мин, К смеси добавляют 90 мл уксусной кислоты и раствор лиофилизуют. Остаток смывают 2% -ной уксусной кислотой в воде и вновь лиофилизуют. Остаток хроматографируют на колонке с химически модифицированным сшитым декстраном (Сефадекс Сг - 25 М), уравновешенным вначале в нижней фазе системы бутанол/уксусная кислота/вода (4: 1: 5), затем в верхней фазе этой системы. Для десорбции почти чистого гексадекапептида используют верхнюю фазу. Чистые фракции объединяют, упаривают ц лиофилизуют, получают вышеуказанное соединение в виде уксуснокислой соли.УФ-спектр: Х п,а, (МеОН) 288 мк (е 4870), 280 мк (в 5575), 274 мк (в 5380), 268 мк (в 5185), 265 мк (в 4955). Повторная лцофцлизация последнего продукта из воды дает вышеуказанное соединение в виде свободного основания; аминокислотный анализ:1.уз 1,72; Азр 1,00; Бег 0,73; А 1 а 0,69; Р 1)е 2,78: цистеиновая кислота 0,57; Т 1 гг 1,69; Яу 3,59.П р и м е р 29. Трет.бутилоксикарбонцлглицил-глицил-аланил-глицил - 8 - тритцлцистеинил-Х -трет,бутилоксикарбонил - лизил-аспарагинил-фенилаланил - фенцлаланил - триптофил - Я:. трет.бутилоксикарбониг-лизил-О-трет.бутил - треонил - фенилаланил - О - трет.бутил-треонил-О-трет,бутил-серил- тритилтиоэтиламид. (ВОС -0,860 г (0,3 ммоля) ВОС - Сгу - Сгу - Аа - Сгу - Суз - (Тп 1) - 1.уз (ВОС) - Азп - Р)ге - Р)ге - Тгр - 1.уз (ВОС) - Т)гг (Вп ) - РЬе - Т)гг (Вц ) - Бег (Вп ) - ИНСН,СН 5 растворяют в 150 мл ледяной уксусной кислоты и по каплям при перемешивании, в течение часа добавляют к раствору 0,5 ого-ного иода в метаноле (150 мл, 30 лгмолей) процесс ведут при комнатной температуре. Смесь 5 10 15 20 25 30 35 Сг 1 у - Сгу - А 1 а - 6 у - Суз (Тг) - 1.уз - (ВОС) - Азп - Р)ге - Р 1)е - Тгр - 1.уз - (ВОС) - Т)гг (Вп ) - Р)ге - Т)гг (Вп ) - Бег (Вп ) - ИНСНСНг 8 - Тг 11) .К раствору 800 лгг (0,58 млхоля) ВОС - Сгу - Сгу - Аа - (л 1 у - Суз (Тг 11) - 1.уз - (ВОС) - Азп - Р 1)е - Р 1 ге - ЯНИНАМ в 12 мл дцметцлформамида при - 20 С до бавляют прц перемешивании 1,85 н. раствор хлористого водорода в этилацетате (0,795 м.г, 1,475 ммоля), Температуру сме. си охлаждают до - 15 С, добавляют 0,081 м,г (0,71 ммоля) трет.бутилнитрита ц раствор перемешивают 15 мин. Раствор 0,52 г (0,637 лглголя) Н - Тгр - 1.уз - (ВОС) - Тгг (Вц ) - Р)ге - Т)гг (Вц) - 8 ег - (Вц) МНСН,СНЬ - Тг 11 и 0,354 лгл (2,06 ммоля) М-этцлдиизопропиламина в 6,0 мл дцметилформамида охлаждают до - 15 С и добавляют к вышеуказанной реакционной смеси. Смесь перемешивают при - 15 С в течение часа и при 25 С 18 час. Растворцтель отгоняют, остаток растирают с охлажденной на льду лимонной кислотой, фильтруют, промывают водой, метанолом, сушат ц получают вышеуказанное соединение. Амцнокцслотный анализ: 1 уз 2,01; Азр 0,97; Т)гг 1,60; Яег 0,65; цистеиновая кислота 0,87; Сг 1 у 2,92; А 1 а 1,00; Р 1)е 2,97,П р ц м е р 30. Циклический дисульфид глицил-глицил-аланил - глицил-цистеиниллцзил - аспарагинил - фенилаланил-фенилаланцл - трцптофил-лизил - треонил-фенилаланцл - треонцл - серпл - 2-тиоэтцламида. продолжают перемешивать еше 45 мин, охлаждают на льду ц добавляют 1 и. водный раствор гипосульфита натрия (6 мл) для разрушения избытка иода (до обесцвечцвания раствора), Растворитель отгоняют, остаток растирают с водой, сушат и сухой продукт растирают с изопропцловым эфиром, получают циклический дисульфид пентадекапептида формулы