Способ получения пептидов

ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕ Н ИЯИ ПАТЕНТУ Своз Советских Социалистичесеа Республик//А 6 К 37 итет 2 2 Рвуддретввинык квмнтет СССР ао делам нзобретеннй1) В 1-640 Опубли овано 070781. Бюллетень25убликования описания 090781 УДК 547. 9 . 4,07 (088 крыт Иностранцфалуди, Дьердь НКаталин Гидаи и, Ласл ло Спо аи, 1 гон,-Карпат Э редприятиеьесети Дьяр Иностранн71) Заявитель ВН 4) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДОВ тозил бензил динитр водоро еет зн И гд получки ак найти енил;или и-нитроения, указайствию сводным амей фо ензи У и подверг онноспо карбонореакц иноок мулы ют взаимоде обным произ ои кислоты общЧ-Х-Мимеет значения азанные ыше; арбонильная ил ксикарбонильна бензилокстрет-бутилгруппа;пентафторлученногоЧ, Е,О,ЪФ,5( и получения пептидов11 ец-Нз-Рго-У енокси,оединения общей от по ормулы -Х-Аг 9 В) -11 ец-Н;-РгоУ имеют значен 20 анные выше отщепляют одновременно или ступен что реакционно- обшей формулы1 ец-Нз(Е)-Ргоказащ)-Ча 1-Туг(В) чествеМ гептапе Н зобретение относится к способуения новых пептидов - биологичестивных соединений, которые могутприменение в медицине,Способ наращивания пептидной цепиметодом активированных эфиров, например пентафторфениловых эфиров, широко известен в химии пептидов .Цель изобретения - получение новыхпептидов, обладающих ценными фармакологическими свойствами.Поставленная цель достигается описываемым способомобщей формулыХ-Аг 9-Ча 1-Туггде Х - остаток алифатической карбоновай кислоты, содержащейв ОС-положении аминооксиацетильную или с 6-аминооксипропильную группу;У - ец, 1 ец,заключающийся в том,способное производноеные группы. Используемыесходных веществ произвотидов общей формулы 118457 ют известными методами пептидной химии (например, методом активированных эфиров, карбодиимидным методом и т.п. 2)Для защиты функциональных групп применяют защитные группы, стабильные в условиях ацидолиза, проводимого для отщепления защитных групп после завершения реакции образования пептидной связи.Предпочтительным для временной 10 защиты карбоксильной группы С-концевой аминокислоты является ислользова . ние п-нитробензильной группы (ЙВ), для защиты гидроксильной группы тирозина - бензильной группы (Вг), для защиты имидазольного цикла гистщйна - динитрофенильной группы (ОИРУ) и для защиты гуанидино-группы аргинина - тозильной группы (Тоэ). Эти защитные группы устойчивы к действию 20 слабых кислот, вследствие чего трет-бутилоксикарбонильная группа (ВОС) отщепляется после образования пептидной связи селективно без затрагивания названных защитных групп. Динитрофенильная группа может быть удалена затем тиолиэом, а остальные указанные группы - действием жидкого фтористого водорода. ньшения ривенном 55Для очистки полученных соединений 3 используют известные методы, например ионообменную хроматографию на карбоксиметилцеллюлозе. При этом большую часть продуктов получают в виде лиофилизованнйх порошков. Такие продукты 3 могут быть использованы непосредственно для образования различных солей или комплексов.Антагонистическое действие новых соединений общей формулыисследуют 4 на животных после введения им наркотика. 1(ровяное давление измеряют на сонной артерии животного. Эксперименты проводят таким образом, что вызывают повышение давления введением наркоти ка в вену бедра в дозе 0,5 мг/кг/мин. После стабилизации повышения давления животному вводят внутривенно или подкожно однократную дозу исследуемого вещества в водном физиологическом 50 растворе, затем измеряют вызванное введенным веществом уменьшение кровяного давления.Достигнутые величины уме кровяного давления при внут73 4введении различных новых соединенийприведены в табл. 1. Эти величиныявляются средними из шести измерений,указаны также предельные отклоненияот средних значений. Для сравненияприведены величины, достигнутые с помощью известного саралазина, т,е.в (й-метилглицин)-5-.-валин-.-алании-ангиотензина 1, в тех же условиях. Таблица 1+2,0 -40-5 1+ 2,5 Са н Иэ данных, приведенных в табл. 1, следует, что все аналоги ангиотензина 11, замещенные в первом положении алифатическим остатком карбоновой кис лоты, содержащим Ы-аминооксигруппу, существенно снижают кровяное давление Размер этого действия пропорционален величине дозы.Проведено также исследование новых соединений при подкожном введении. В этом случае:к физиологическому раство ру поваренной соли, содержащему иссле дуемое вещество, добавляют также карбокаиметилцеллюлозу или желатин.В табл. 2 приведены ббобщенные результаты исследований - средние значения измерений, проведенные у пяти животных, а также величины предельных отклонений от средних значений.845773 Таблица 2 Добавка к Снижение кровяного давления Доза, мг/кгв мм рт.ст.) по истечении мин1 Соединение раст -вору КМЦ" -21+5,8 -26+7,2 -139,4 -5 Жлтф -23 ф 2,0 -21+ 2, 2 - 10+2,8 - ,1 КМЦ -21+6,7 -24+5,7 -16+5,1 - 1(1-О-аминоокси 200 пропионил,8-лейцин)-ангиотензин 11 200 Жлт -24+5,7 -21+ 5,6 -9+5,7 -3 ХКМЦ - карбоксиметилцеллюлозаХХЖлт - желатин. Результаты, приведенные в табл.2, свидетельствуют о том, что новые соединения при подкожном введении, даже через 60 мин, значительно снижают экспериментально вызванное повышение кровяного давления.Благодаря таким свойствам предлагаемые соединения, а также их физиологически совместимые соли и комплексы могут найти применение в терапии как средства, понижающие кровяное давление. Под физиологически совместимыми комплексами этих новых пептидов следует понимать такие соединения, которые образуются при добавлении известных, например, органических ве- З 5 ществ и придают действующему началу запаздывающее действие, В качестве таких комплексообразующих веществ могут быть использованы, например, желатин,карбоксиметилцеллюлоза,сложные40 эфиры альгиновой кислоты, полифлоретинфосфаты,полиаминокислоты,а такжедругие полимеры и сополимеры. В качестве физиологически совместимыхм45 солеи новых пептидов могут быть названы обычные, используемые в фармацевтической практике соли, образоранные присоединением кислот, напримерацетаты.50Новые пептиды, а также их физиоло,гически совМестимые соли и комплексы используют в терапии в виде обычных лекарственных препаратов. Эти препараты содержат новые соединения55вместе с пригодными для энтеральногои парэнтерального введения неорганическими или органическими носителями.Лекарственные препараты могут быть тов;Й не ее ов нные ль-. ид(1-Аминооксиацетил, 2008-лейцин)-ангиотензин 11 200 получены в виде твердых лиофилиз в этом случае в качестве носител могут быть использованы различны реагирующие с пептидами соединен такие, например, как углеводы, Д в качестве лекарственных препара могут быть получены концентриров или разбавленные суспензии или э сии, которые наряду с обычными кими носителями содержат также с билизирующие и консервирующие вс могательные вещества.Такие лекарственные препараты гут быть использованы прежде все в терапии для лечения тех синдро в этиологии которых йграет роль шенный за счет ренина уровень да ния; далее, они могут служить ди тическими средствами для диффере рованной диагностики гипертонии нального происхождения.Получение новых пептидов обще формулы 1 проиллюстрировано прив ными ниже примерами. Использованв примерах сокращения соответств принятым в специальной литератур ПринадлежащиесВ-аминооксикислот группы обозначают обычными симво соответствующих аминокислот со с щими перед ними 0", например "Оилиц - аминооксиуксусная кислота "Оал" -Ф -амииооксипропионовая к та и т.д. Пентафторфенильный ост ток - ПФФ, фПри получении различных соеди ний упаривание растворителей про водят всегда с помощью роторного парителя. Температуры плавления деляют с помощью аппарата Ог. То(Вцсйи). Тонкослойную хроматографию проводят на пластинах "Кезе 1 с 1 е 6 пасЬ 5 йаЬ 1 ф (Е,ИегсМ. ОагазСМй); для проявления хроматограмм используют следующие системы растворителей:1. Этилацетат: (пиридин-уксусная - кислота-вода 20:6:11) = 95:52. Этилацетат: (пиридин-уксуснаякислота - вода 20:6:11)90:103, Этилацетат: (пиридин-уксусная 10кислота - вода 20:6;11) = 80:304. Этилацетат (пиридин-уксуснаякислота - вода 20:6:11) = 70:305. н-Бутанол : уксусная кислота : вода = 4:1:.5 156. н-Бутанол : уксусная кислота::пиридин : вода = 30;6:20 247. н-Бутанол : этилацетат : уксусная кислота : вода = 1;1:1:Цифра в степени при значении Ру 20указывает номер использованной системы растворителей, например РЭлектрофоретические исследованияна бумаге проводят на горизонтальном приборе "1.И 1 М" умеренного напряженияна бумаге "Ий 214" в буферном растворе при рН 1,9, содержащем глутаминовую кислоту, Напряжение составляет450 в, время - 3 ч,.Тонкослойные хроматограммы прояв- З 0 ляют нингидрином после обычного хлорирования раствором о-толидина с йодистым калием.Очистку целевых продуктов проводят следующим общим методом. 35Сначала соли свободных пептидов с фтористым водородом чистят на смоле"5 ерйасгу 5"200 5 црегГпе" (производства РЬагаас 1 а Р 1 пе сЬещ 1 са 1 з,Оррзаа, 5 сбиедеп) градиентной элюцией 0,01 М (рН 4,5) и 0,4 М (рн 6,7)растворами ацетата аммония, Детектирование элюата производят с помощьюприбора "1.КВ Очсогд 11" (производства 1.КВ, Оррза 1 а, Швеция), сбор - с по 45 мощью коллектора фракций.Дальнейшую очистку основной фракции проводят иа карбоксиметилцеллюлозе следующим образом.0,5 л карбоксиметилцеллюлозы50 (КМЦ) приводят в состояние равно.весия в колонке с первым буферным раст. вором, затем в колонку заливают раствор 0,5 г пептида в 4 мл 0,01 М раствора ацетата аммония и вымывают продукт градиентной элюцией укаэанными буферными растворами. Скорость элюировання 25 мл/ч, Собирают фракции 73 8 по 10 мл и детектируют их с помощью прибора КВ Очсогд 1. Очищенный целевой продукт получают лиофнлизацией основной фракции.П р и м е р . (1-Амннооксиацетил, 8-изолейцин)-ангиотензин 11Стадия 1: ВОС - Агу (Тоз) - Ча -Туг (Вг 1) - Е 1 е - Н 1 з ОИРУ) - Рго 11 е - МВК 4,5 г (15 ммоль) хлоргидрата 1 нитробензилового эфира изолейцина в 50 мл хлороформа добавляют 2,1 мл триэтиламина и 3,81 г (40 ммоль) пентафторфенилового эфира БОК-пролина. Смесь перемешивают 20 мин при комнатной температуре, продукт экстрагируют водой, затем 07.-ным водным раствором лимонной кислоты. Полученный после высушивания и упаривания растворителя в виде остатка защищенный дипептид (Р = 0,8) растворяютс)без дополнительной очисткив 20 мл 8 М раствора соляной кислоты в диоксане, Через 10 мин раствор разбавляют безводным эфиром и упаривают. Полученный в остатке хлоргидрат дипептида (Р= 0,44) растворяют в 30 мл хлороформа, добавляют к раствору триэтиламин до рН 8 и затем - 8,8 г (15 ммоль) пентафторфенилового эфира ВОС-гистидина. Через 1,5 ч в раствор вносят 1,65 мл й,й-диметиламиноэтиламина и еще через 15 мин раствор промывают 107-ным водным раствором лимонной кислоты, 1 н. соляной кислотой, водой и 57.-ным водным раствором бикарбоната натрия в указанной последовательности. Органическую фазу отделяют, высушивают и упаривают. Полученный в виде остатка сырой защищенный трипептид (Ру = 0,50) без очистки растворяют в 20 мл 8 М раствора соляной кислоты в диоксане. Через 15 мнн полученный таким образом свободный трипептид (Р = 0,25) осаждают добавлением сухого эфира, отфильтровывают и промывают эфиром,Продукт тотчас же растворяют в смеси 50 мл хлороформа с 20 мл диметилформамида, величину рН раствора с помощью триэтиламина устанавливают равной 8 и затем добавляют 6,0 г (15 ммоль) пентафторфенилового эфира ВОС-изолейцина. Через 30 мин растворитель упаривают, остаток растворяют в этилацетате, Полученный раствор промывают 107-ным водным раствором лимонной кислоты и затем водой. После84577 ом У п. аст- одоиго стыи ез,высушивания и упаривания этнлацетатного раствора защищенный гексапептид (В0,56) выделяют с помощью эфиД)ра и промывают эфиром.Далее продукт растворяют в 20 мп 8 М раствора соляной кислоты в диоксане и полученный таким образом свободный гексапептид (йу = 0,47) осажда 41ют сухим эфиром, отфильтровывают и промывают эфиром, Полученный продукт 1 О тотчас растворяют в 50 мл диметнлформамида, добавляют триэтиламин до рН 8, после чего прибавляют 7,2 г (12 ммоль) пентафторфенилового эфира ВОС-аргинина (Тоз). Смесь перемешива ют 1 ч, растворитель упаривают, остаток растворяют в хлороформе и полуенный раствор промывают 03-ным водным раствором лимонной кислоты,н. раствором соляной кислоты и водой в 20 указанной последовательности. Органическую фазу отделяют, высушивают и упаривают,остаток растирают с эфиром и отфильтровываютПолучают 12,4 г защищенного гептапептида нитробензилового эфира ВОС - Агд (Тоз) - Ча 1 -Туг(Вг 1) - 11 е - Н 5(ОМРЬ) - Рго -11 е (выход 807 от теоретического, в расчете на исходное соединение - пентафторфениловый эфир ВОС-пролина). З 0 Т.пл. 189-92 оС. Вр = 0,55. Стадия 2: ВОС-Оглиц- Агд (Тоз) Ча 1 - Туг - 11 е - Нз - Рго - 11 е.8,1 г (2 ммоль) нитробенэилового з 5 эфира ВОС-Агд (Тоз)-Ча-Туг(В 21) -3 1 еН 1 з(ОИРЬ)-Ргое растворяют в 5 мл диметилформамида и в раствор добавляют 2,9 мп 2-меркаптоэтанола. Через 1 ч пептид осаждают сухим эфиром, от Фнльтровывают, проьывают эфиром и очищают переосаждением эфиром из метанола. Получают 2,0 г (747 от теории) нитробензилового эфира ВОС-.Агс(Тоз)-Ча 1-Туг(Вг 1)-11 ец-Нзе. 45 (Ку = 0,1), Продукт растворяют в 30 мл смеси метанол-уксусная кислота - вода 5:1:1 и добавляют 1,0 г 107-ного палладия на активированном угле. Через раствор в течение 5 часов 50 .пропускают водород, затем катализатор отфильтровывают, фнльтрат упаривают и остаток растирают с эфиром. Получают 1,22 г (757 от теоретического) частично защищенного гептапептида 55 (Й = 0,8). Продукт растворяютЛ)в 5 мл 8 М раствора соляной кислоты в диоксане и через 20 мин сухим эфи 3 Ором осаждают свободнйй гептапептид (В 41:.О, ).Свободный гептапептид отфипьтро вают, промывают эфиром и растворяю, в 15 мп диметнлформамида. Величину рН раствора с помощью триэтиламина устанавливают равной 8 и к раствор добавляют 0,45 г (1,2 ммоль) пента фторфенилового эфира ВОС-Оглицина, Через 30 мин реакционную смесь упа вают, остаток растворяют в 30 мл с си хлороформ-диметилформамид (3:1) и раствор промывают 102-ным раство лимонной кислоты и водой. После вы шивания и упаривания раствора полу ют остаток, который растирают с эт ацетатом, отфильтровывают и промыв ют этилацетатом. Получают 0,4 б г ВОС-Оглиц-Агд(Тоз)-Ча 1-Туг1 е-Н 15 Ргое (выход .723 от теоретическо го); К = 0,23; Ву 1 = 0,40.Стадия 3: .удаление защитных гр 0,46 г (0,35 ммоль) ВОС-ОглицАгд(Тоз).-Ча -Туге-Н 15-Ргое воряют в 2 мл жидкого фтористого в рода и добавляют к раствору 0,5 тиоанизола, Раствор выдерживают 1 при ООС, затем осаждают пептид эф ром; отфильтровывают н прОмывают э ром. Получают 0,35 г (выход ООХ о теоретического) (1"аминооксиацетил 8-11 е)-ангиотензина 1 Фторгидрат Продукт очищают, как описано выше (до примеров). Характеристика чист продукта:Р О 26; КГО 56; 10157; Е 0,э 00.Результаты аминокислотного анал за: Рго 1,01 (1)1 Ча 1 1,0 ; 11 е 1,98 (2); Туг.О,б 5 (1); Н 15 1,0 (1 Агд 1,03 (1).П р и м е р 2. (1-1.-0-аминоок пропионип, 8-изолейцин)-ангиотензиСтадия 1: ВОС-ОА 1 а-Агд(Тоз)-Ча 1 Туге-Нз-Ргое.0,6 г (0,5 ммоль) ВОС-Агд-(Тоз) Ча 1-Туге-Нз-Рго-Ие (пример 1, стадия 2) растворяют в 5 мп 8 М р вора соляной кислоты в диоксане. рез 20 мин полученный свободный п тид (К = 0,1) осаждают сухим ром, отфильтровывают и промывают. деленный таким образом продукт то час растворяют в 20 мл диметилфор да, добавляю триэтиламин до рН 8 затем 0,7 г (1,9 ммоль) пентафтор фенилового эфира ВОС-Оаланина. Че 30 мин раствор упаривают, остаток11 8457растворяют в 30 мл смеси хлороформдиметилформамид (3;1). Полученныйраствор промывают 1 ОЖ-ным водным раствором лимонной кислоты и водой. Органическую фазу высушивают, упариваюти остаток растирают с этилацетатом.Получают 0,55 г (выход 847 от теоретического) ВОС"Ола-Агд(Тоз)-Ча 1-Туг ,11 е-Н 15-Рго"11 е.Р" = 0,43; Р = 0.80 10ск 1, СЙСтадия 2: удаление защитных групп.0,53 г (0,42 ммоль) ВОС-ОА 1 а-"Агд(Тоз)-Ча 1-Туг -11 е-Н 1 з-Рго-.11 е растворяют в 2 мл жидкого Фтористого водорода и добавляют, 0,55 мл тиоанизола.Раствор выдерживают 1 ч при ОоС, затем осаждают пептйд сухим эфиром, от.Фильтровывают и промывают эфиром.Получают 0,41.г (1-0 аланин, 8-изолейцин)-ангиотензина 1; продукт очи- щ 0щают, как описано вьпле. Р = 0,32,(вРф = О 58; Рд 1 = О 59; Е = 1,0,Результаты аминокислотного анализа: Рго 1,0 ; Ча 1 1,1 (1); 11 е2,02 (2); Нз 0,9 (1); Туг 0,95 (1); 25Агд 1,05 (1),П р и м е р 3, (1-Аминооксиацетил; 8-лейцин)- ангиотензин .Стадия 1: ВОС-Агд(Тоз) -Ча 1- -Туг(В)-11 е-Нз-Ргоец ОНБ. зо4,2 г (12 ммоль) бромгицрата нитро,бензилового эфира лейцина растворяют.в 50 мл хлороформа и к полученномураствору добавляют 1,68 мп триэтиламина и 3,81 г (10 ммоль) пента-з 5фторйенилового эфира ВОС-пролина.Смесь перемешивают 20 мин при комнатной температуре и затем экстрагируют107-ным водным раствором лимонной кислоты и водой. Органическую фазу высушивают и упаривают, Полученный в осфтатке защищенный дипептид (Р= 0,8) без дополнительной очйсткирастворяют в 20 мл 8 М раствора соляной кислоты в диоксане, через 10 мин 4раствор разбавляют сухим диоксаноми упаривают.Полученный в остатке свободный дипептид (Р" = 0,56) без дополнитель.ной очистки растворяют в 50 мл хлороформа, в раствор добавляют тризтиламин до рН 8 и затем 8,8 г (15 ммоль)пентафторфенилового эфира ВОС"гистидина (ОМРВ), Через ЗО мин в раствор добавляют 1,65 мл М,й-диметиламиноэтиламина и еще через 10 мин смесь промы -вают 1 ОХ-ньуч водным раствором лимонной кислоты, 1 н. раствором соляной 2кислоты, водным раствором бикарбоната натрия и водой в укаэанной последовательности.Органическую фазу высушивают и упаривают, полученный в виде остатка защищенный трипептид (Р = 0,65)Ибез дополнительной очистки растворяют в 25 мл 8 М раствора соляной кислоты в диоксане и полученный свободный трипептид (Р = 0,47) осаждают сухимНэфиром. Трипептид отфильтровывают, промывают эфиром и тотчас растворяют в смеси 50 мл хлороформа с 20 мл диметилформамида, В раствор добавляют триэтиламин до рН 8 и 6,0 г (15 ммоль) пентафторфенилового эфира ВОС-изолейцина. Через 30 мин растворитель упаривзют, остаток растворяют в этилацетате, раствор промывают 107-ным водным раствором лимонной кислоты, 1 н. раствором соляной кислоты и водой, органическую фазу высушивают и упаривают.Полученный в остатке защищенный тетрапептид (Р = 0,65) высаживают11)с помощью смеси н-гексан-эфир (7:3). Продукт растворяют в 25 мл 8 М раствора соляной кислоты в диоксане че 4 рез 15 мин свободный пептид (Р0,65) осаждают сухим эфиром, отФильтровывают, промывают эфиром и сразу же растворяют в 50 мл смеси хлороформ-диметилформамид (1:1). Величину рН раствора устанавливают равной 8 с помощью триэтиламина и добав- . ляют в раствор 6,0 г (11,5 ммоль) пентафторфенилового эфира ВОС-титрозина. Через 15 мин растворитель упаивают, остаток растворяют в этилаце-. ате,к раствору добавляют 0,66 мл Й,й-диметиламиноэтиламина и через 15 мин смесь промывают 107-ным водным раствором лимонной кислоты, 1 н. раствором соляной кислоты и, наконец, водой. После высушивания и упаривания органической фазы с помощью эфира выЩ деляют защищенный пентапептид (Р0,8) и растворяют его в 20 мл 8 М раствора соляной кислоты в диоксане.Полученный свободный пентапептид (Р = 0,8) осаждают сухим эфиром, отфильтровывают, промывают эфиром и тотчас растворяют в 50 мл диметилформамида. Величину рН раствора с помощью триэтиламина устанавливают равной 8 и добавляют в раствор 3,85 г (10 ммоль) пентафторфенилового эфира ВОС-валина. Через 1 ч отгоняют растворитель, остаток растворяют в хлороформе, органическую фазу обычным образом экстрагируют ОХ-ным воднымраствором лимонной кислоты, 1 н. раствором соляной кислоты.и водой,5Полученный защищенный гексапептид,(Й = 0,82) выделяют с помощью эфира. Продукт растворяют в 20 мл 8 Мраствора соляной кислоты в диоксанеи через 15 мин сухим эфим осаждают Освободный гексапептид (Й = 0,55).ЪСвободный гексапептид сразу же растворяют в 40 мл диметилформамида, добавляют триэтиламин до рН 8 и 6,0 г(10 ммоль) пентафторфенилового эфира 5ВОС-аргинина (Тоз). Через 30 мин отгоняют растворитель, остаток растворяютв хлороформе и этот раствор промывают 1 н, раствором соляной кислоты иводой. После высушивания и упаривания 20растворителя с помощью этанола выделяют полученный защищенный гептапептид ВОС-Агс (Тоз) -Ча-Туг Вг 1) -11 еН 15(ОЙРЬ)-Рго-ец-ОКВ (Й = 0,62).Выход 7,5 г (503 от теоретического 25в расчете на исходное соединение -пентафторфениловый эфир ВОС-Рго).Т.пл, 186-900 С.Стадия 2: ВОС-Оглиц-Агд(Тоз)-Ча 1-Туге-Н 15-Рго.ец 3,45 г 30(2,26 ммоль) ВОС-Агу (Тоз) -Ча 1-Туг (Вг 1)(-.11 е-Н 15 (ОНРп) -Рго.ец-ОМВ растворяют в 10 мл диметилформамида, добавляют 6,6 мл 2-меркаптоэтанола ичерез 2 ч сухим эфиром осаждают частично защищенный гептапептид. Переосаждением эфиром из метанола получают 2,9 г очищенного нитробензиловогоэфира ВОС-Агу(Тоз) -Ча 1-Туг(Вг 1) -11 е-Н 15-Рго.ец (933 от теории). . 40Йу = 0,12; Й = 0,26.Й), гъПродукт растворяют в смеси метанол-уксусная кислота - вода (5:1;1),добавляют 1,0 г 07-ного палладия наактивированном угле и в течение 6 ч 45через раствор пропускают водород. КаТализатор отфильтровывают, растворитель упаривают и остаток растираютс эфиром, Получают 2,15 г (893 от теоретического) ВОС-Агц(Тоз)"Ча 1-Туг11 е-Н 15-Рго.ец,Йу = 0,75; Й = 0,20.з , (ц)1,1 г (1 ммоль) полученного продукта растворяют в 10 мл 8 М растворасоляной кислоты в диоксане, через 5530 мин свободный гептапептид (ЙИор ст" доют п. стсразу же растворяют в 0 мл димет формамида. В раствор добавляют три этиламин до рН 8 и затем 0,54 г (1,5 ммоль) пентафторфенилового эф ра ВОК-Оглицина. Через 30 мин раст разбавляют 30 мл хлороформа и про вают водой. После высушивания и уп ривания раствора остаток растирают с этилацетатом,. отфильтровывают и промывают этилацетатом. Получают ,05 г (выход 863 от теоретическог ВОС-Оглиц-Агу(Тоз)-Ча"Туге"НзРго-ец.Стадия 3: удалейие защитных гру 0,9 г (0,73 ммоль) ВОС-Оглиц-. Агц(Тоз) -Ча 1 -Туге-НЯ 5-Рго.ец р воряют в 5 мл жидкого фтооистого в рода и добавляют 1,5 мл тиоаниэол Смесь выдерживают 1,5 ч при 0 С, з тем осаждают пептид сухим эфиром, отфильтровывают его и промывают эф ром. Получают 0,55 г (выход 807. от теоретического) (1-Оглицин; 8-лейцин)-ангиотензина 1. Продукт очищ ют какописано выше. Йф = 0,33;цСь 5 . Г 72Результаты аминокислотного акал за: Рго 1,0 (1); Ча 1 1,0 (1); 1 е 1,0 (1); 1.ец ,1 (1); Н 15 0,95 (1) Агу 1,0 (1); Туг 0,7 (1).П р и м е р 4, (1-В-Ы;Аминоокс пропионил; 8-лейцин)-ангиотензин 1Стадия 1: ВОС-ООА 1 а-Агд(Тоз)-Ча Гуге-Н 1 з-Рго.ец.1,1 г (1 ммоль) ВОС-Агд(Тоз)-Ча Туге-Н 1 з-Рго.ец растворяют в 10 мл 8 М раствора соляной кислоты в диоксане и через 30 мин свобод пептид осаждают сухим эфиром, осад отфильтровывают и промывают эфиром Продукт немедленно растворяют в 10 диметилформамида, в раствор добавл триэтиламин до рН 8 и затем 0,56 г (1,5 ммоль) пентафторфенилового эф ВОС-О-Оаланина. Через 30 мин раств разбавляют хлороформом и промывают водой. После высушивания и упарива растворителя остаток растирают с этилацетатом, отфильтровывают и пр мывают этилацетатом. Получают 0,95 (выход 77 Х от теоретического) ВОС ОА 1 а-Агд (Тоз) -Ча 1-Туг1 е-Н з-Рго.ео; В = 0,29.Стадия 2:,удаление защитных гру 0,95 г (0,77 ммоль) ВОС-О-ОА 1 аАго(Тоз)-Ча 1-Туге-Н 1 з-Рго-ец р воряют в 4 мл жидкого фтористого в16 Формула изобретения 20 25 ЭО 15 8457рода и добавляют 1,2 мл тиоаниэола.Раствор выдерживают 1,5 ч при ООС, затем продукт осаждают сухим эфиром,отфильтровывают и промывают эфиром.Получают 0,6 г (1-О-Оаланин; 8-лейцин)-ангиотензина 1 (выход 907 от(1); Х 1 е 1,03 (1); Нз 1,01 (1);Аг 9 0,92 (1); Туг Оф 8 (1). Способ получения пептидов общей формулы 1Х-Агд-Ча 1 -Тугец-Н 1 з-Рго-У где Х - остаток алнфатической карбоновой кислоты, содержащейв с 6-положении аминооксиацетильную илиЖ -аминооксипропильную группу;У - ец, 11 ец,о т л и ч а ю щ и й с я тем, что реакционноспособное производное общей ФормулыН-Аг 9(А)-Ча 1-Туг(В)-11 ец-Нз(Е)-Рго"У"06 73где А - тозил;В - бензил;Е - динитрофенил;О - водород или и-нитробензил;У - имеет значения, указанные вьппеподвергают взаимодействию с реакционноспособным производным аминооксикарбоновой кислоты общей формулы 1Ч-Х-Мгде Х имеет значения, укаэанные вьппе,Я - бензилоксикарбонильная илитрет-бутилоксикарбонильйаяъгруппа;М - пентафторфенокси,и от полученного соединения общейформулы ЧЧ-Х-Аг 9(А)-Ча 1-Туг(В) 1 ец-Н 5(Е)Ю-Рго-У"ОСгде АВЕ,О,Ы,Х и У имеют указан ыевьппе значения, отщепляют одновременноили ступенчато защитные группы,Источники информации,принятые во внимание при экспертизе.а 1 оз К 5 а 1 цду, М,.ои, О.йуеЕ 1, Т.5 ггСез, Е.ЯЬоп, Ое Чегчепсцп 9 акоп РепйаГ 1 цогрЬепу 1 езСегп 6 е РерСс 15 упТЬезеп, .цэцз КеЬ 95 Аппа 1 еп сег сЬев 1 е,1973, Не 1 9 з.1 ч 21 2. Шредер 3., Любке К. Пептиды.ч. 1, М., "Мир", 1967, с. 116.Составитель В. ВолковаРедактор Л, Ушакова Техред С.Мигунова Корректор М. КостаЗаказ 4258/8 Тираж 443 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва Ж-ЗЗ, Раушская наб., д, 4/5 Филиал ППП "Патент , г. Ужгород, ул. Проектная, 4