Гидрохлорид этилового эфира 8-бромаденозин-5-карбоновой кислоты, проявляющий антиагрегационную активность и способ его получения

(71) Институт биоорганнческой химииАН Белорусской ССР(56) 1. Патент США В 3855205,ко. 260.21 1.5, 17. 12.75.2. БсЬвЫс К.К., ИасЬаг К.,БсЬ 1 ое ц, Ме 5-СатЬоху 1-ягцрре а 1 зЯсЬцз 1 цп 1 сс 1 оп Ьет Ицс 1 еовЫцш иапй 1 цпяеп. ЯупсЬезе чоп 2-0 езохуайепоз 1 п.СЬеш. Вег. 106, 1256-1261(1973).3. Бсе 1 п НЛ., Яовапх Р, РтазайКЛ.Сагй 1 очазсц 1 ат е 1 Гессв оГ пцс 1 еоз 1 йапа 1 о 8 з. Апп. ИЛ. Асай. Зс 31255,380-386, (1975) .4. Комаров Ф.И., Люсов В,А. иБокарев И.Н. Фармакологическое воздействие на тромбоцитарное звеногемостаэа при лечении больных ИБС."Кардиология", 1978, т. 18, В 3,с, 12-18.5. Ргазай К.ИРцпцА.,Тхеге К.,;Яге 1 п Н.Н.,Вгопйу 1 с Н.В. ИойИ 1 сагтопо 1 гЬе 5-Ров 1 гтоЬ оГ РцтЫе Ицс 1 ео в Ыез . БупсЬез 1 в апй В 1 о 1 оу с а 1Ргоретс 1 ев оГ,А 11 су 1 АйепозЫе-сагЬоху 1 асез. д, ой Ией. СЬев. 19,1180-1186 р (1976) .6. М. ЙсеЬага, И. Капе 1 со.Ббнйевой Ицс 1 еозЫез апй Нцс 1 еотЫев-ХЫ,.Рцг 1 пе сус 1 опцс 1 еовхйез. Тесга-.Ьейгоп, 26, 4251-4259 (1970).. И. ПсеЬага, М, Капе 1 со. Бсцйхезот Яцс 1 еозЫев .апй Мцс 1 еосЫез.2-Эеохуайепоздпе апй 3 -Эеохуайепоз 1 пе (Согйусер 1 п) . 1 п. "БупгЬедс Ргосейцтез Ы Ицс 1 етс АсЫ СЬевдвт.- гуи, Бу Ей. Я. ЕотЬасЬ, К.Б. Т 3.рзоп, ЛЯт 11 еу.й Бопз, И,-У , 1.опйоп, Буйпеу, Тогопо, 1968, ч. 1, р.188,8. К.А. 1 оп 8, К,К. КоЬпе, 1,.В. Тоизепй. 8-Вговораповие,3 ЬЫ ч. 1, р. 228. (54) ГИДРОХЛОРИД ЭЖПОЗОГО 34 ИРА 8-БРОИАДЕНОЗИН-КАРВЯОВОВ КИЛОТы, ПРОЯВЛЯЮЦИЙ АНТИАГРКГАЦИОНЯЯО Активность, и спосов еГО получещя (57) 1. Гидрохлорид этилового эФира1 8-бромаденозин-карбоновой кислоты+ фР ИН,С 1 ПО ОНантиагрегагионную актив 2. Способ получения гидрохлорида ,8-бромаденозин-карбоиовой кислоты, о т л и ч а ю щ и й с я тем, чтоаденозин бромируют водным раствором брома в ацетатном буфере, в полученный 8-бромаденозин вводят защитную. ;изопропилиденовуюгруппу защищенное производное 8-бромаденозина окисаеют перманганатом калин. в щелочной среде, полученную 8-бром"2,3,-О- -изопропилиденаденозин-карбоновую кислоту подвергают кислотному гидролизу, полученную 8-бромаденоэии" -5-карбоновую кислоту обрабатывают хлористым тионилом в абсолютном этиловом спирте и выделяют целевой продукт.1122669 СОО ОС И М сР 3 ООС Н 2И 1Изобретение относится к новому химическому соединению, а именно к гидрохлориду этилового эфира 8"бромаденозин-карбоновой кислоты, формулы + 3 С И-В г проявляющему антиагрегационную активность, и способу его получения.Известны структурные аналоги сое динения (1) " этиловый эфир аденозин-карбоновой кислоты (П) 11 и иэопропиловый эфир 8-бромаденозин" -5"карбоновой кислоты ОЦ) 23.ИН, Ивг 2Соединение (П) проявляет кардиотоническую н сосудорасширяющую активность 3 . Данных о биологической активности соединения (Ш) в литературе не имеется.Известна ацетилсалициловая кисло" ;та (1 У), применяемая в медицинской практике как средство, ингибирующее тромбоцитарное звено гемокоагуляции 4 1 Известен. способ получения соеди"неннй (П) и (Ш) состоящий в следующем;аденозин (У) переводят в его изопро О пнпеденовое производное (У 1), которое затем окисляют перманганатомкалия в щелочной среде до соответствующей кислоты (Уf), после чего удаляют изопропипиденовую защиту в успо виях кислотного гидролиза и получаютсоединение (УШ), которое этернфицируют абсолютированным этиловым илиизонропиловым спиртом в присутствиихлористого тионила (БОС 1,) и получаютсоответственно эфиры аденозин-карбоновой кислоты (П) и (1 Х) 5.Однако 8-бромпроизводное (Ш)было получено только для изопропилового эфира аденозин-карбоновой 5кислоты (1 Х) посредством бромнрования е го св об одным бромом в смесидиоксана и натрийфосфатного буфера 2,1122669 МН ЫО ьРг 00, БАРРО ОН о такой пут я получения а этилового Однакгоден длрохлорилнозиннво оновои Целью изобретения ие нового соединени дных аденозин-ка высокой антиагрега стью, а также спос(ЗЕ Поставленная целописываемым гидр охлэфира 8-бромаденоэикислоты и способомб получениятся в том" синтеза непризаявляемого гид эфира 8-бромадеислоты 1 .является изыска. я в ряду произрбоновой кислоты 2 ционнои активоба его получеИ)Я нозин (У) бромируют водным раствором брома в ацетатном буфере. Полученный 8-бромаденозин (Х) обрабатывают абсолютированным ацетоном в присутствии п-толуолсульфокислоты. Полученный 8-бром, 3-0-изопропилидеиаденозинс ф(Х 1) окисляют перманганатом калия в щелочной среде в 8-бромЗЛО-иэопропилиденаденоэин-карбоновую кислоту (ХП). После снятия иэопропилиденовой защиты в условиях кислотного гидролиза получают .8-бромаденоэин- -карбоновую кислоту (ХШ), которую обрабатывают хлористым тионнлом в абсолютном этиловом спирте и выделяют целевой продукт (1)10 П р и м е р 1. Получение гидрохлорида этилового эфира 8-бромаденозин-карбоновой кислоты.Р 5510 г аденозина (37,4 ммоль) растворяют при нагревании и перемешивании в 200 мл 0,5 М ацетатного буфера, РаТаким образом, способом, которым получают структурный аналог (Ш), соединение (1) получить невозможно, поскольку непосредственное бромирование этилового эфира аденозин- 5 -карбоновой кислоты (П) приводит к гидролизу эфирной группировки и получаемая при этом смесь продуктов не содержит целевого соединения. Было установлено также, что невозможно пробромировать и аденозин-карбоновую кислоту (УИ) известными способами С 63 81Невозможность получения этилового/эфира 8-бромаденозин-карбоновой 15 кислоты бромированием этилового эфира аденозин-карбоновой кислоты обьясняется свойствами конечного продукта - его крайней нестабильностью в водной среде. В связи с этим был 20 получен предлагаемвм способом не этиловый эфир 8-бромаденозин-карбоновой кислоты, а его гидрохлорид. Если гидрохлорид этилового эфира 8-бромаденозин-карбоновой кислоты 25 обработать водным раствором, содержащим бикарбонат натрия в количестве, необходимом для нейтрализации НС , то вместо образования ожидаемого продукта - этилового эфира ЗО 8-бромаденозин-карбоиовой кислоты - происходит его полное разложение, По данныи ТСХ образуется 8-бромаденоэин-карбоновая кислота, В присутствии даже следов влаги гидрохлорид этилового эфира 8-бромаденозин"- -карбоновой кислоты постепенно разлагается. Все методы введения брома основываются на бромировании в водных средах, Поэтому даже, если и 40 происходит бромирование то образовавшийся этиловый эфир 8-бромаденозин-карбоновой кислоты сразу разлагается.Таким образом, практически невоэ можно получить гидрохлорид этилового эфира 8-бромаденозин-карбоиовой кислоты. В связи с этим разработан синтез предпагаемого соединения (1), исходя из 8-бромпроизводных адено 50 зина (Х) и(Х 1) с получением промежуточных новых соединений (ХП) и (ИП). створу дают остыть до комнатной температуры, после чего при тщательномперемешнвании прибавляют к нему покаплям раствор Э мл брома (58 ммоль)в 300 мл воды. Через 3 ч избытокброма разлагают добавлением сульфитанатрия до исчезновения красной окраски и раствор нейтрализуюг 5 н. ИаОНдо рН 7. Колбу помещают на ночь вхолодильник. Выпавшие кристаллы отФильтровывают, промывают водой, спиртом и эфиром, сушат и получают,9,7 г(5,0 г 14,45 ммоль высушен над Р Ов вакуумном эксикаторе) в 800 мл абсолютированного ацетона прибавляюти-толуолсульфокислоту (27,3 г,144,5 ммоль) . Реакционную смесь перемешивают 2 ч и выпивают затем в400 мл воды со льдом, содержащей28 г бикарбоната натрия. Для удаления ацетона раствор упаривают при пониженном давлении на ротационномиспарителе, По мере удаления ацетона начинается выделение кристаллического продукта, плохо растворимого вводе. Его отфильтровывают, сушат иполучают 4,7 г (12,2 ммоль) 8-бром,3"О-изопропипиденаденозина, Т.пл.221-222 ОС, выход 84%.К суспензии 8-бром,3-0-изопропилиденаденозина (2, 0 г, 5, 15 ммопьв 540 мл воды) добавляют 0,86 г КОНи порциями в течении часа КМп 04,(3,32 г, 21 смоль), Реакционную смесьперемешивают трое суток. Непрореаги "ровавший перманганат калия разрушают30%-ной перекисью водорода, двуокисьмарганца отфильтровывают, промываютгорячей водой, объединенные Фильтра-ты концентрируют до 200 мл и подкис 1ляют 10%-ной соляной кислотой до .рН=4. Выделившиеся кристаллы отфильтровывают, сушат и получают 1,52 г712262,5 г (6,25 ммоль) 8-бром,3-0- -изопропилнденаденознн-карбоновой кислоты прибавляют в один прием в 250 мл 1 н. НС и перемешивают прио70 С в течение 25 мин. Затем раствор 5 быстро охлаждают,и нейтрализуют до рН 4-5 нЛаОН. Раствор концентрируют до 120 мл,при этом образуется хлопьевидный осадок, Его отфильтровывают, промывают водной, сушат и получают 10 1,73 г (4,81 ммоль) 8-бромаденозин- -5-карбоновой кислоты. Т.пл, 185 С1 о (разл), выход 773, молекулярный вес 378.Найдено, 7.: С 31,60; Н 3,36; 15 Вг 21,53.С 1 О Н 100 И 5 Вг 1 Н 0Вычислейо, %: С 31,75; Н 3,17; Вг 21,16.с(Н 5,94 Д Н. 5,04 88; Н 20 4,53 И; Н 4 ф 38 8) 1 т= 6,0 Гц; ,21,з 5,0 Гц: Хэ,Ф= 3,5 Гц,Л д 1 аО2,69 нм ( Е 1,80 10 ммоль "см-ф).К 0,8 г (2,22 ммоль) 8-бромаденозин-карбоновой кислоты добавля ют 50 мл абсолютированного этилового спирта и затем при перемешивании. и охлаждении льдом - 0,5 мл хлористого тионила. Смесь перемешивают 1 ч при 0 С и 30 ч нри комнатной темпе ратуре. Раствор концентрируют в вакууме до 15 мп, охлаждают и прибав" ляют к нему 300 мл холодного эфира, Образовавшийся осадок отфильтровывают и сушат в вакуумном эксикаторе, получают 0,85 г (1,81 ммоль) гидрохлорида этилового эфира 8-бромаденозин-э-карбоновой кислоты. Т. пп. .108-110 С, выход 82%, молекулярный вес 460,5. 40Найдено, 7.; С 35,31; Н 4,61 СьВг 24,41.С 1 И О Н СВг С Н 50 НВычислейо, Х: С 35,70; Н 4,46; СЗВг 24,54. 45 5,25 Гц; Тщ 5,05 ГфцЯеО =262 нм ( Я 2, 0310 1 ммоль 1 см) .Выход на исходный аденозин 29,33. 69 Структурный аналог (П) в условиях прямой тест-системы в конечной концентрации 10 И проявляет двухфазное действие на агрегацию тромбоцитов, вызываемую АДФ. Соединение (П) оказывает прямое антиагрегациоиное дейст вие, снижая на 77 Х степень агрегации тромбоцитов в течение первой минуты после добавления агреганта. Затем статистически,достоверный 1 антиагрегационный эффект отмечается иа 25 ьв 55 Предлагаемый способ является единственным способом получения гидрохлорица этилового эфира 8-бромаденозин-карбоновой кислоты. Спо-. соб основан на доступном отечественном исходном аденозине.Соединение (1) в конечной концентрации 10 И снижает свертываемость крови, изменяя статистически достоверно все показатели тромбоэластограммы, что косвенно подтверждает влияние его на функциональную активность тромбоцитов. Подобного эффекта на установлено для структурного аналога (соединениеП), Соединение (1) обладает высокой антиагрегационной активностью и в условиях: применения прямых тест-систем, Соединение (1) в концентрации 10" М на 50-857. снижает степень АДФ - инду" цированной агрегации тромбоцитов.Антиагрегационный эффект наблюдается в течение 25 мин регистрации динамической функции тромбоцитов и свидетельствует о прямом продолжительном действии соединения (1), Весьма существенно, что соединение (1) не влияет на спонтанную дезагрегацию тромбоцитов . не препятствует распаду тромбоцитарных агрегатов по сравнению с контролем.В условиях целостного организма соединение (1) в дозе 10 мг/кг (1 Х от максимально переносимой дозы при внутривенном введении) снижает степень агрегации тромбоцитов на 573 продолжительностью 5-6 мин. По величине эффективной дозы соединение (1) в 5 раз превосходит активность фармакологического стандарта, вызывая при этом более выраженный антиагрегационный эффект. Соединениеобладает выраженной антикоагуляциои" ной активностью, абсолютно нетоксично, практически не влияет на важнейшие физиологические функции организма, хорошо растворимо в воде.Следовательно, оно имеет существенные преимущества по сравнению с ис" лотой ацетипсалициловой не только по эффективности, но и цо безопасности. Соединение (7) пригодно для разработ. ки быстродействующщс жкарственных форм для внутривенного введения при неотложной антиагрегационной терапии в экстремальных условиях.9 11226 нуте опыта, который вероятно обусловлен продуктом распада соединения (Й). Структурный аналог, уступая по глубине и продолжительности действия изучаемому соединению (1), оказывает Б весьма сильное влияние на важнейшие физиологические функция организма.Следовательно, соединение (И) абсолютно непригодно в качестве потенциального антикоагулянта, так как спо собно вызывать целую гамму побочны эффектов, весьма опасных дпя жизнедеятельности организма в условиях диссемииированного внутрисосудистого свертывания крови, 15Стандартное ,Фармакологические средство - кислота ацетилсалицйловая в концентрации 10 фИ проявляет менее выраженное антиагрегационное действие, уступая активности изучаемого соеди нения более, чем в 10 раз. В усповиях целостного сфганнзма кислота ацетилсалициловая в дозе 55 мг/кг (53 от СД .) проявляет сопоставимую по величийе антиагрегационную актив ность. Следовательно только индекси широты терапевтического действия соединения (1) (94) и Фармакологического стандарта (1 У) (20) могут служить несомненным доказательством цреимущества изучаемого вещества. При этом следует учитывать широкий спектр Фармакологической активности кислоты ацетилсалициловой, только оральный способ применения, медпенное развитие.Твбккцв 1 М 2,0 11,322,4 ИВ,З 5246 21204 103,7+2 91,Ы 1 О 2 9 84,2+1 9 36 233 10 Ф, 60329995 4003 0,32,5 16,3 т 2,8 123,2 а,о 190, 603 " О 5 кке ( 6,6218 99623 8922 44148 17 фО 2+3 О, 18203 781 й6+0,8 88,0 1,ватуфав Ю,ИО 7 10 622,3 113,620Сфеяккваюв (И) О 2209 86219 11382 антиагрегацнонного эффекта, непригодность препарата в качестве средства в неотложной терацни.В табл. 1 приведено влияние производных аденозин-карбоновой .кислоты (соединение 1 и 11 10И) на свертывающую систему крови белых крыс инвитро по данныи тромбоэластограммы, в табл, 2 - влияние производюас (соединение 1 н 11).аденоэии-карбоновой кислоты ( 1(ФИ) и ацетилсалицкповой кислоты (10 М) на АДФ - индуцированную агрегацню тромбоцнтов белых крыс в опытах инвитро.В табл.З дано влияние соединения 1 (10 мг/кг вну 3- рнбрюшинно) и ацетилсалицнповой кислоты (55 мг/кг внутрибрюшиино) на степень агрегаци тромбоцнтов (агрегирующий агент - , АДФ) в опытах на белых крысах (вещества вводили за 20-30 мин до начала исследования). В табл. 4 и 5 дано влияние соедаве ния (,1) на свертывающую систему кром белых крыс йри введении в дозе 10 мг/кг вутрибрюшинно за.20 мин до забора крови. Таким образом, гидрохлорид эткнювого эфира 8-бромаденоэин-карбоновой кислоты обладает преююущест" вами в аитиагрегациоином эффекте перед известными структурными соединениями, и предлагаемый способ, позволяет нопучить новое соединение (1).22669 2 Таблнца 2 и дезагрегации троибоцнтое ею)н 1 О 25Иакснмаль аг оег вцня еньгрега 322)3 22)526) 2) 916) 3)8 т 3) 1 26)51 9,3 025)9 19)УИ)9 Ш 4 527) 6 9) гй 6 -65,3 Соединение (П) 27,815) 7,5 43,123, Э 25, 4,3 112) Кислота вце тилсвлицило 94)2)224)0 37,8+3,6 24) 1 э 3)3 1 О)723)038)623) 1 -42,9 -28) В -44, 1 -58,3 "28,4 еО Табл кца Со гр 2) 822) 3 27) Щ 5) 6 3)726)9 14)ЭЪ 6) О, 123 3) 820) 35)824)8 Соедмне нив (2) 8)7+6)6 О эффект 1 У)34,5 563,6 28 32 20)325 3) 1 онт це 3,2 13, 125 О,И 7,21122669 твблнцв 5 глебалло вый брыяолнзьпе кювое с58262 8,36,0 225 ФО 6 22 5206 т,2+ Составитель Ю, Белоусовктор Г. Волкова ".Гехрвд Т,Дуб. Корректор Г инчак по делам иэобретеннй и открытий 3035, Иосква, ЖРауаская наб., аказ 8094/22 Тираж 380 Поднисное ВНИИПИ Государственного комитета СССР 4