Способ получения мэйтансиноидов

(54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЮЙТСИНОИДОВ общей фоРмУлы(088 0 шойа 7 авцо1 во 1 аЪ хоп,апй СЬеш 1 са 1цва Моцго 1114), 1977 г Б.М., К апвпоЫ с 1 цаС 5.опБочо 1 Спеш, 4 2 ОЕ3 ц гд щ иенияра с цельния та сино мулы ую ЮООй,укаэанные эн ии дициклогек лучае необход кислоты Льюи ения,лкарбодиости в где Н име в присутс имида и в присутств ГОСУДАРСТ 8 ЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАН ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОЧНРЫТИЙ(56) 1 КцфсЬа и др., тле Мау ,ЯСгцсФцга 1, Е 1 1 пФегге 1 а 11 оп 1 йев, - 1, Ог 8. р. 2349-2357,В - ниэ лич аю упрощ выхода и целевых л дейст алкил с Сйс я тем, что, процесса, повышесширения ассортимендуктов, на мэйтан кислотой общей форИзобретение относится к получению мэйтансиноидных соединений, а именно мэйтансиноидов формулы Нзг 3О= С-СН-Мо фоСН) СН 0 НУ д й алкил с отивомикр свойствам пользованы екоторые рации, а лы 1,где Й где В - низши обладающих пр воопухолевыми могут быть исИзвестны н дов 1,-конфигу синоиды форму обными и протии, которыев медицине. из мэйтансиноиименно мэйтанП 3,Й НЗ м стадий э выделе нны МауСепця с дуктов сос 00002, О,25 стракции из расте-, ггаа. Выавляет со и полученные рядорастворителем иний, таких какход целевых проответственно О,0,0000036 С 13,Целью изобрещение процесса,расширение ассодуктон,Поставленнаяспособом полученформулы 1, заклюна мэйтансинол добщей формулы;ения является упроповышение выхода иртимента целевых про- З цель достигаетсяия мэйтансиноидовчающимся в том, чействуют кислотой 4 Нф И-ОООН где В - имеет укаэанные значения,в присутствии дициклогексилкарбодиимида и в случае необходимости вприсутствии кислоты Льюиса,Полученные мэйтансиноиды формулы1 включают Ь-форму новую О-формуили их смесь.По предлагаемому способу мэйтансинол ацилируется кислотой Формулы 11 в присутствии карбодиимида.Кислота Формулы 11 может быть любымиз ь- и Р-изомеров, а также их смесью,но когда остаток кислоты Формулы 11,который предполагается ввести в гидроксильную группу н З-положении,является оптически активной группой,желательно применение соответствуощего оптически активного изомера кисло- .ты формулы 11. Однако, даже если при- б 5 меняется оптически активная кислота формулы 11, получают смесь 0- и1,-мэйтансиноидон Формулы 1.По отношению к мэйтансинолу кислота формулы 11 может использоваться в количестве примерно 1-500, пред почтительно примерно до 30 молярных эквивалентов, а карбодиимид - н количестве около 1-700, предпочтительно примерно до 50 щолярных эквивалентон.В случае необходимости целесообразно проводить реакцию н присутствии кислотного катализатора такого как кислоты Льюиса: безводный хлористый цинк, безнодный хлористый алюминий (А 1 С 3), безводное хлорное железо, четыреххлористый титан (ТС 14), четыреххлористое олово (ЯПС 14), пятихлористая сурьма, хлорид кобальта, хлорид меди, эфират трехфтористого.бора и др неорганические или органические сильные кислоты, такие как серная, перхлорная, соляная, бромистоводородная, бензосульфокислота, и -толуолсульфокислота, трифторуксусная кислота, трихлоруксусная кислота и др,; кислые ионообменные смолы, такие как Дауэкс(Н ) и т,д. Основной катализатор+может быть, например, ныбран из органических аминовых соединений, таких как пиридин, альфа-, бета- игамма-пиколин, 2,6-лютидин, 4-диметилламинопиридин, диметиланилин,диэтиланилин, триэтиламин, Б-метилморфолин, и др,; галогенидов щелочных металлов, таких как Фтористыйкалий, безводный йодид лития и др.;солей органических кислот, такихкак ацетат натрия и т.д. Особенножелательным является безводныйхлористый цинк, Использование такого катализатора приводит в результате к улучшенному выходу мэйтансиноидон формулы 1, Катализатор применяется в количестве, достаточномдля промотиронания реакции ацидирования. Такое подходящее количествокатализатора во многих случаях может быть выбрано из интервала примерно 0,001-10, предпочтительно от около 0,01 до 1 молярного эквиналента по отношению к кислоте формулы 11,Когда применяется такой катализатор, количество кислоты формулы 11 по отношению к мэйтансинолу может быть снижено предпочтительно пример. но до 1-6 моларных эквивалентов,Данная реакция может осуществляться в подходящем растворителе, таком как сложные эфиры, например этилацетат, простые эфиры, например диэтилоный эфир, диоксан, тетрагидрофуран, и др,; галоидиронанные углеводороды, например метиленхлорид, хлороформ и др, натриды, например1 О ацетонитрил, ароматические углево-дороды, например бензол, нитрометан, пиридин, диметилформамид,диметилсульфоксид, сульфолан и др.;а также. в подходящей смеси такихрастворителей. 5Предлагаемый способ позволяетв одну стадию простым химическимпутем получать целевые продуктыс достаточно высоким выходом, втом числе.в новой Р-форме.П р и м е р 1. В круглодоннуюколбу емкостью 50 мп помещалось47,3 мг (0,0837 ммоль) мэйтансинола и 145 мг (1,0 ммоль ) м-метил Б-ацетил-Ь-аланина, После добавления 10 мл безводного метиленхлоридаполучаМся гомогенный раствор, К данному раствору добавлялось 10 мл раствора 309, мг (1,5 ммоль). дициклогексилкарбодиимида в безводном дихлорметане, после чего сразу же отделялись бесцветные кристаллы. Прн перемешивании данная суспензия нагревалась с обратньж холодильником намасляной бане при температуре бани 2555-60 С в течение 10 ч, После того,как реакция завершалась, реакционная смесь концентрировалась при.пониженном давлении, и нерастворимые вещества отделялись с помощью Зфильтрования. Нерастворимые вещества промывались небольшим количеством метиленхлорида, и промывные воды объединялись с фильтратом. Объединенный фильтрат концентрировался 35при пониженном давлении, и остатокхроматографировался на колонке, заполненной 40 г силикагеля с использованием смеси хлороформ-метанол -45:1 об./об. Первые Фракции, содер Ожащие побочный продукт - дициклогексилмочевину в качестве преобладающего растворенного вещества, удалялись, а биоавтографически положи-.тельные Фракции сливались, Из последующей фракции, стекакцей с колонки, 45выделялось 27 мг мэйтансинола,Биоавтографически активные фракции объединялись, концентрировалисьи хроматографировались на колонке,наполненной 27 г силикагеля, причемэлюирование осуществлялось смесьюэтилацетатгэтилацетат, насыщенныйводой 2:1. С помощью данной процедуры выделялось 7,0 мг бесцветно:го биоавтографически активного сое.динения. То, что данный продукт представляет собой одно соединение, подтвердилось данньии тонкослойнойхроматографии на ТСХ-пластинке (Кизельгель 60 74, Арт 5715, МеРку 60ФРГ) в двух системах растворителейрслороформ: метанол (9:1 по объему)и этилацетат, насыщенный водой. Подтвердилось, что структура данного соединения соответствует соединению Формулы, где Б - метил.Элементный анализ.Вычислено, Ъ: С 59,00; Н 6,70;М 6,07.СЗ+Н Фб С 1 Н 3 О оНайдено, 3: С 58,68; Н 7,02;Н 6,54.Масс-спектр (в СНС 1 3) м/е:691 (М , следы), 630 (Й - НО-НЯСО),485, 470, 450,уф-спектр (в этаноле) макс.:233, 243, 254, 282, 290 нм.П р и м е р ы 2-9. Приготавливались следующие базовые растворы:Раствор А. Раствор мэйтансинолав безводном метилбнхлориде, содержащий 1 мг мэйтансинола в 50 мкл раствора,Раствор В, Раствор дициклогексилкарбодиимида в безводном метиленхлориде, содержащий 6 мг дициклогексилкарбодиимида в 50 мкл раствора,Раствор С. Раствор Н-ацетил-Н-метил-Б-алаиина в безводном метиленхлорнде, содержащий Б-ацетил-Б-метил-Ь-алании в концентрации3 мг/50 мл раствора.В стеклянную трубку размером около 4 ммв поперечнике и около 14 смдлиной добавлялось в указанном порядке 50 мкл раствора С, 50 мкл раствора В и 50 мкл раствора А. После перемешивания добавлялся катализатор,в том виде как он есть в случае твердого катализатора, или предварительно разбавленный метиленхлоридом доподходящей концентрации, когда он,жидкий (количество катализатора приблизительно 0,3 мг). Наконец, реакционная смесь доводилась до 200 мклметиленхлориддм. Стеклянная трубка,эапаивалась на расстоянии около 12 смпо ее длине., При периодическом встряхивании трубка оставлялась стоятьпри указанной температуре в течение,наносились на ТСХ-пластинки (силикагель 60 Р 24, Арт 5715, 20 смх 20 см,Мерк, ФРГ). После проявлений смесьюслороформ-метанол (9:1 по объему)пятно мэйтансина обнаруживалось с помощью хроматосканирующего прибора,С 8-910 Фирмы Симадзу при длине волны .детектирования 250 нм и длине волны:контроля 350 нм, и по предварительноподготовленной калибровочной кривойвычислялись абсолютный и процентныйвыходы мэйтансина. В то же время аналогичным образом определялся процентный выход мэйтайсинола, когда имеломесто его выделение. Полученные результаты приведены в табл. 1,1075973 Таблица 1 Пример катализатор Температура реакции, ОС Выход мэй- Выделение тансина, % мэйтансииола, 6 70 15-25 0-515 80 15 15-г 25 15-25 20 15 0 Безводное хлорное железо 15-25 15-25 Четыреххлорное олово 50 35 Эфират трехфтористогобора 27 15-25 15-25 1Серная. кислота 32 П р и м е р ы 10-12. К смесям50 мкл каждого из растворов С, В иА, полученных в стеклянных трубках, "30таким же образом как и в примерах2-9, добавлялось около 2 мг катализа.тора, и реакция проводилась как ь Т а б л и ц а 2 Выход Выделение мэйтан- мэйтансина, синола,ф а катализатор Пример10 Безводный фтористый калий 30 11 Безводный йодистый литий 30 20 12 4-Диметиламинопиридин 25 35 ЛВ П р и м е р 13. В 20 мл безвод ного метиленхлорида растворялось 159 мг М-метилн-пропиониль-алани-, на с по "ледующим добавлением 309 мг дициклогексилкарбодиимида и 48 мг мэйтансинола. Смесь нагревалась при температуре дефленмации, и для 60 исключения влаги - в течение 16 ч., Реакционная смесь концентрировалась, и нерастворимые вещества отфильтровывались . Фильтрат концентрировался прн пониженном давлении, и.оста Безводный хлористый цинк Безводный хлористый алюминий Четыреххлористый титан,рримерах 2-9. Затем аналогичнымобразом определялся количественнополученный мэйтансин. Процент выделейия мэйтансинона также определялся одновременно. Данные приведеныв табл. 2,ток пропускался через колонку, наполненную 40 г силикагеля. Проявление осуществлялось смесью хлороформ,метанол (45:1 по объему) и, биоавтографически положительные фракциисливались. Растворитель отгонялся,и остаток повторно хроматографировался на колонке из силикагеля(27 г силикагеля проявляющий растворитель этилацетат-этилацетат,насыщенный водой, 2:1 по объему).Биоавтографически положительныефракции собирались и выделялось 5 мг бесцветного соединения, Данный продукт идентифицировался как соединение формулы 1, где К -этил, таким же образом, как и в примере 1Масс-спектр,м/е: 644 (М+ -61), 485, 470.П р и м е р 14. С помощью про;цедуры, сходной с описанной в примере 13, 173 мг Я-изобутирил-Н-метил-Ь- -аланина, 309 мг дициклогексилкарбодиймида и 48 мг мэйтансинола вводились в реакцию в 20 мл безводного метиленхлорида. Реакционная смесь далее. обрабатывалась как в примере 13 и выделялось 3,2 мг бесцветного соединения. На основании его масс- спектра данный продукт идентифицировался как соединение формулы 1, гдеСН 3у щг 3н,20 Масс-спектр, м/е:658 (М 1-61),485, 570. 25П р и м.е р 15, С помощью приема;аналогичного описанному в примере13, 187 мг Б-метил-Н-изовалерил-Ь-аланина, 309 мг дициклогексилкарбодиимида и 48 мг мэйтансинола вводились в реакцию в 20 мл безводногометиленхлорида, Реакционная смесьобрабатывалась как в примере 13 ивыделялось 2,5 мг бесцветного соединения, На основании данных его масс- З 5спектра продукт идентифицировалсякак соединение формулы 1, гдеК=СН 2 СН(СНЗ)2 .Масс-спектр, м/е: 672 (Мф -61 ),485, 470.40П р и м е р 16. Мэйтансинол(300 мг, 0,5316 ммоль ) и Б-ацетилЮ-метил-Ь-алании (1,585 г,10,62 ммоль) растворяли в 80 млдихлорметана. К раствору добавляли 3,285 .г дициклогексилкарбодиимида и 72, 5 мг (О, 582 ммоль ) безводного хлористого цинка. Смесь перемешивали при температуре около20 С в течение б ч и выдерживалипри этой температуре 11 ч, Затемдобавляли еще Б-ацетил-Б-метил-Ь алании (530 мг), дициклогексилкарбодиимид (1095 мг ) и безводный хлористый цинк (150 мг). Спустя 2 ч реак ционную смесь фильтровали и фильтрат Ыпромывали приблизительно 150 млвбды и высушивали над безводнымсульфатом натрия. Нерастворимые продукты отфильтровывали и фильтратразделяли хроматографически на колон ке с силикагелем (60 г) и элюентомхлороформ:метанол 40:1 (по объему),отбирая после того, как были удалены несколько предшествукщих фракций, фракции по 25 г, Фракции 14-24 65 объединяли, концентрировали и повторно разделяли хроматографически, используя силикагель (65 г) и смесь этилацетат:этилацетат, насыщенный водой 2:1 (по объему), отбирая после нескольких предшествукщих Фракции по 16 г, получая 149,3 мг соединения формулы 1 (К=СН 3, соединение А) из фракций 25-60.Фракции 23, 24 и 61-100 после второго хроматографирования объединяли и упаривали 20,5 мг вещества, из которого дополнительно выделяли 6,3 мг соединения А, подвергая его препаративной тонкослойной хроматографии на силикагеле с 10 изопропанола в хлороформе, Фракции 101-153 от второй хроматографии объединяли и концентрировали, получая 320 мг продукта, из которого получали 95,7 мг изомера соединения Формулы 1 (К=СН 3, соединение В) после повторной хроматограФии на колонке с силикагелем (75 г) с хлороформом и метанолом в соотноше. нии 40:1 (по объему), Общий выход соединения А составил 155,6 мг, а соединения В 95,7 мг. Вещество А растворяли в смесиэтилацетата с диэтиловым эфиром иэтот раствор оставляли стоять в холодильнике, получая кристаллическоесоединение А, которое затем один разперекристаллизовали из смеси этилацетат-диэтиловый эфир и дважды изсмеси хлористый метилен-диэтиловыйэфир, получая кристаллы соединения А:бесцветные пластинки, т.пл. 191195 ОС (с разложением).Соединение В кристаллизовалось,когда хлороформный раствор веществаВ обрабатывали диэтиловым эфиром.Полученные таким образом кристаллы,в последующем перекристаллизовывалидважды иэ той же системы растворителей, получая кристаллы соединения В,плавящиеся при 155-1.78 С (с постепенным разложением),П р и м е р 17, Мэйтансинол(100 мг, 0,177 ммоль ) и Б-ацетил-Нметил-Ь-аланид (522 мг, 3,59 ммольрастворяли в 25 мл дихлорметана. Еэтому раствору при охлаждении иабане из льда с водой при температуре ниже 5 С добавляли 1100 мг(5,38 ммоль) дициклогексилкарбодиимида и 24 мг безводного. хлористого цинка. Смесь перемешивали притемпературе ниже 5 фС в течение 20 ч,затем фильтровали, Фильтрат концентрировали и остаток подвергали хроматографическсму разделению на колонке с силикагелем (55 г) со смесьюхлороформ:метанол 401 (по объему),отбирая 25-граммовые фракции. Фрак-ции 15-30 объединяли и вьатаривали,получая 147 мг смеси веществ. Иэфракций 31-220 выделяли 43 мг мзйтансинола.147 мг продукта подвергали 2-йочистке на хроматографической колонке со смесью этилацетат:этилацетат,насьчценный водой, 2 ф 1 (по объему),Несколько предшествующих фракцийбыли удалены и затем элюат собиралив 15-граммовые фракции, получая 34 мгмэйтансина, 17 мг смеси мэйтансинаи некоторых других веществ, и 47 мг 10вещества, содержащего изомер мэйтансина. При препаративной тонкослойной хроматографии (пластины Р 2 С,силикагель 60 Р Аг, 5717, Мерк,ФРГ) с элюентом хлористый метилен: 5изопропиловый спирт 9:1 (или 17 мгпродукта) получили еще 5,0 мг мэйтансина, 47 мг продукта в последующем хроматографировали на колонке ссилнкагелем (60 г), элюент хлороформ 0этанол = 40:1 (по объему), получая20,0 мг изомера мэйтансина. Общийвыход мэйтансина и его изомера составил 39 и 20 мг соответственно.П р и и е р 18. Мэйтансинол( 100 мг, 0,177 ммоль), И-метил-И-пропионил,-алании (84,5 мг,0,531 ммоль ) и дициклогексилкарбодиимид (164 мг,.0,796 ммоль) растворяли в 15 мл сухого дихлорметана. 30Немедленно образовалась суспензияс белым осадком, К этой суепензиипри перемешивании добавлялн прикомнатной температуре около 24 мг(0,176 ммоль ) безводного хлОристого цинка, После перемешивания приэтой же температуре в течение 1 чдобавляли еще 84,5 мг И-метил-Ипропионил-Ь-аланина, 164 мг дицикло-гексилкарбодиимида, примерно 24 мгбезводного хлористого цинка и 10 млдихлорметана, и смесь продолжалиперемешивать еще в течение 1 ч и50 мин, Затем реакционную смесьфильтровали, чтобы удалить небольшое количество нерастворимого материала, и Фильтрат разбавляли дихлорметаном до объема приблизительно 100 мл, проьывали водой, сушилинад безводным сульфатом натрия и затем фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении,и выделившийся осадок отфильтровывали и промывали небольшим количеством этклацетата, Объединенный фильтрат и промывку жидкости подвергали 55хроматографированию на колонке ссиликагелем (65 г), элюент - этилацетат:этилацетат, насыщенный водой2:1 (по объему), отбирая 15-граммовые Фракцйипосле того, как несколько предшествующих Фракций удаляли.Фракции 7-31 объединяли, и при выпаривании, получили 66 мг соединенияФормулы 1 (В=С 2 Н 5, вещество С), аиз фракций 40-97 получили 58 мг б 5 изомера соединения Формулы 1 (В=С 2 Нсоединение Р).Раствор вещества С в небольшомколичестве зтилацетата выделял кристаллы этого вещества при стояниипри комнатной температуре. Кристаллы собирали и перекристаллизовывалииз смеси дихлорметан-диэтиловыйэфир, получая кристаллы соединенияС: бесцветные иголки, плавящиесяпри 185-189 С (со слабым разложением).Раствор вещества 0 в небольшомколичестве этилацетата давал кристаллы соединения В, которые перекристаллизовывали из смеси дихлорметана с диэтиловым эфиром, получаякристаллы соединения Э: бесцветныеиглы, плавящиеся при 192-197 С (соразложением).1П р и м е р 19. Иэйтансинол(100 мг, 0,177 ммоль), И-изобути,рил-И-метил-Ь-алании (92 мг,0,532 ммоль) и дициклогексилкарбодиимид (164 мг, 0,796 ммоль ) растворяли в 15 мл сухого дихлорметана, Кэтому раствору при охлаждении в банеиз льда с водой и при перемешивании добавляли 24 мг безводного хлористого цинка, и смесь перемешивали0,5 ч при охлаждении льдом, Затемводно-ледяную баню убирали, и реакционную смесь нагревали до комнатнойтемпературы (20 С),Еще через 1 ч добавляли 92 мг И-изобутирил-И-метил-Б-аланина, 164 мг дициклогексилкарбодиимида и . 24 мг безводного хлористого цинка вместе с 10 мл сухого дихлорметана. А еще через 45 мин добавляли следующую порцию И-изобутирил И-метил-Ь-аланина (31 мг, дициклогексилкарбодиимида (55 мг) и безводного хлористого цинка ( 24 мг), и реакционную смесь дополнительно перемешивали 45 мин. Общее время реакциисоставило 3 ч. Затем полученную таким образом реакционную смесь обрабатывали как в примере 17, а полученный материал хроматографировали насиликагеле (65 г) с элюентом этилацетат;этилацетат, насыщенный водой2:1 (по объему), отбирая 15-граммовые Фракции как в примере 17. Фракции 8-22 объединяли, растворительвапаривали, получая 70,5 мг соединения формулы 1 (В-"СН(СН) , соединение Е), Фракции 27-55 давали послесмешивания и выпаривания растворителя 57,5 мг изоера соединения Формулы 1 (В=СН(СНЗ), соединение Р),Из раствора соединения Е в небольшом количестве этилацетата выпадаликристаллы, которые перемристаллизовывали из смеси дихлорметан-диэтиловый эфир, получая кристаллы вещества Е: бесцветные иглы, плавящиесяпри 185-187 С (с разложением)..0,35 0,39 0,24 0,48 Н 0,16 0,11 Мэйтансинол ВИИИПИ Заказ 540/54 . Тираж 410 Подписное филиал ППП "Патенте, г. Ужгород, Ул.Проектная, 4 Из .раствора соединения В в неболь-.шом количестве смеси этилацетатдиэтиловый эфир получали кристаллы,которые перекристаллизовывали из смеси дихлорметан-диэтиловый эфир по"ф 5лучая кристаллы соединения Г; бесцветные иглы, плавящиеся при 195 о198 С (с разложением),П р и м е р 20. Мэйтансинол(100,5 мг, 0,1779 ммоль) обрабатывали как в примере 17 при комнатной температуре (около,20 С ) сначала И-изовалерил-М-метил-Ь-аланином(99,5 мг, 0,532 ммоль ), дициклогексилкарбодиимидом (165 мг, 0,801 ммоль 5и безводным хлористым цинком(24 мг) в растворе сухого дихлорметана (15 мл) в течение 1 ч, изатем повторно В-изовалерил-Б-метил-Ь-аланином (67 мг, 0,358 ммоль ),дициклогексилкарбодиимидом (110 мг,0,534 ммоль ) и безводным хлористымцинком (около 24 мг) в сухом дихлорметане (10 мл)еще в течение 1 ч,Полученную таким образом реакционную смесь обрабатывали как в примере 17, и полученный в результатесырой продукт хроматографировали наколонке с силикагелем (65 г) этил-ацетатом, отбирая 15-граммовые фракции,после того, как некоторое количество предшествукщих фракций удаляли. Фракции 17-29 объединяли ипосле упаривания растворителя получали 60 мг соединения формулы 1(В=СН СН(СН)2, вещество О), Из фракций 33-75 получали после смешивания и выпаривания растворителя 57 мгизомера соединения формулы 1(100 мг, 0,177 ммоль), М-ацетил-Нметил-Р-алании(64,5 мг, 0,443 ммоль,2,5 молярных эквивалента).и дициклогексилкарбодиимид (109,5 мг,0,532 вмоль, 3,0 мол. экв,)растворяли в 20 мл сухого дихлорметана. Кэтому раствору добавляли при перемешивании и при комнатной температуре24 мг (0,177 ммоль, 1,0 мол.экв.)безводного хлористого цинка. После30 мин перемешивания при этой жетемпературе добавляли дополнительноМ"ацетил-Б-метил-Р-алании (61,5 мг,0,354 ммоль, 2,4 мол.экв.) ц безводный хлористый цинк (н 24 мг,551,0 мол. экв.), и реакционную смесьперемешивали еще в течение 1 ч.1 атем добавляли 80 мл дихлорметана и 20 мл воды. Органический слой отделяли и сушили над безводньзч сульфатом натрия, затем фильтровали,Фильтрат упаривали досуха и к остатку добавляли 3 мл этилацетата. Некоторое количество нерастворимого вещества отфильтровывали, Фильтратконцентрировали и хроматографировали на колонкес силикагелем (60 г)этилацетатом.,Те фракции, для которых пятна нахроматограмме в тонком слое соответствовали соединениям А и В, соответственно ббъединяли (раздельно дляА и для В), и после упаривания раст-орителя получали 60 мг соединенияи 60 мг соединения В соответственно. Соединение А (мэйтансин) и вещество В (предположительно Р-мэйтанрин), полученные таким образом, иденгифицированы по соответствующим продуктам, полученным в примере 16,посредством сопоставления спектровЯМР,Величины В мэйтансиноидов формулы 1 при тонкослойной хроматографии на пластине ТСХ (Аг, 5715, Мерк, ФРГ) приведены в табл, 3.